高淼
- 作品数：20 被引量：6H指数：2
- 供职机构：重庆医科大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家教育部博士点基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 一种针对BCR-ABL融合基因的高特异性探针的制备方法
- 本发明公开了一种针对BCR‑ABL融合基因的高特异性探针的制备方法，将CRISPR‑Cas12a系统运用到慢性髓细胞白血病特征性融合基因的检测中。BCR‑ABL是一种长链双链DNA结构，针对其这一特点提出多位点识别这一方...
- 黄峥兰何畏高淼
- 一种杀灭慢性粒细胞白血病耐药细胞的系统及方法
- 本发明一种杀灭慢性粒细胞白血病耐药细胞的系统，由载入腺病毒的SH2-PTP1B/C-ODC融合基因和AZ1基因组成。通过实验验证本发明的系统和方法可以杀灭白血病耐药细胞，并且效果非常好，对于治疗白血病的研究及药物的开发具...
- 冯文莉高淼黄峥兰徐敏
- 文献传递
- 探讨FABD结构域对Bcr/Abl蛋白定位及功能的影响被引量：1
- 2017年
- 目的:构建F-actin结合结构域(F-actin binding domain,FABD)缺失腺病毒载体Ad-Bcr/Abl-ΔFABD和野生型Bcr/Abl腺病毒载体Ad-Bcr/Abl,探讨FABD结构域对Bcr/Abl蛋白定位及功能的影响。方法:PCR扩增bcr/abl和bcr/abl-ΔFABD片段,双酶切后克隆至穿梭质粒p Ad Track-CMV,经Ad Easy构建系统获得腺病毒Ad-Bcr/Abl-ΔFABD和Ad-Bcr/Abl,并在HEK293细胞中进行包装。将细胞分为3组,Ad-GFP组、Ad-Bcr/Abl组以及Ad-Bcr/Abl-ΔFABD组,分别加入对应的腺病毒。Western blot验证Bcr/Abl和Bcr/Abl-ΔFABD在293T细胞中的表达水平,间接免疫荧光法检测Bcr/Abl和Bcr/Abl-ΔFABD在293T细胞中的定位。流式细胞术、MTT法分别检测Bcr/Abl和Bcr/Abl-ΔFABD对293T细胞凋亡、增殖的影响。结果:双酶切以及测序验证穿梭质粒构建正确;PacⅠ酶切验证重组腺病毒质粒重组成功;绿色荧光显示重组腺病毒包装成功;Western blot验证Bcr/Abl和Bcr/Abl-ΔFABD可在293T细胞中表达;间接免疫荧光发现Bcr-Abl蛋白在细胞内的分布依赖于F-actin;FABD缺失后虽然不能使Bcr/Abl入核,但使其在细胞内的分布方式由均匀变为点状或块状聚集;FABD缺失后,Bcr/Abl在细胞内呈块状聚集的方式与IM处理后的结果相似。流式细胞术和MTT结果显示,与Bcr/Abl相比,Bcr/Abl-ΔFABD组293T细胞的凋亡比例增加(P<0.05),增殖能力降低(P<0.05)。结论:成功构建Ad-Bcr/Abl和Ad-Bcr/Abl-ΔFABD重组腺病毒,FABD缺失后使Bcr/Abl蛋白在细胞质中的分布方式发生改变,并能抑制Bcr/Abl的抗凋亡能力和促增殖能力。
- 王腾黄峥兰高淼李会周芳竹冯文莉
- 关键词：细胞定位伊马替尼
- 一种让慢性粒细胞白血病细胞凋亡的系统及其方法
- 本发明为一种让慢性粒细胞白血病细胞凋亡的系统，由载入腺病毒的两个融合肽N3R、两个化合物AP21967和载入腺病毒的融合肽F2S连接在一起构成。本发明系统和方法通过实验验证，可以达到和实现诱导CML细胞凋亡，并且效果非常...
- 冯文莉黄峥兰高淼罗红伟
- FKBP-RAP-FRB系统转运BCR-ABL入核对K562细胞的增殖抑制效应被引量：1
- 2014年
- BCR-ABL融合蛋白是慢性粒细胞白血病(chronic myeloid leukemia,CML)发病的基础。其中,BCR-ABL只能定位于细胞浆、不能易位至细胞核是其致病的关键因素。因此,转运BCRABL入核可能是治疗CML的潜在方法。该研究利用基因重组技术,构建HA-2FKBP-ABD(HF2A)和FLAG-3NLS-FRB*(FN3R)重组腺病毒,与雷帕霉素类似物(Rapamycin analog)一同组成FKBP-RAPFRB系统,转运K562细胞胞浆中的BCR-ABL癌蛋白至细胞核,并探究其对K562细胞增殖的影响。结果显示,成功构建了高滴度的重组腺病毒,Western blot证实目的蛋白在K562细胞内成功表达。FKBP-RAP-FRB系统可通过转运BCR-ABL入核,抑制K562细胞生长和克隆形成的能力。结果揭示,FKBP-RAP-FRB系统转运BCR-ABL入核有望为CML提供新的治疗手段。
- 高淼黄峥兰曹唯希李千音李会冯文莉
- 关键词：慢性粒细胞白血病BCR-ABLK562细胞重组腺病毒
- SH2-ODC/AZ1腺病毒的构建及对BCR-ABL蛋白的降解效应
- 2015年
- 目的构建重组腺病毒Ad-SH2-ODC和Ad-AZ1,检测共表达SH2-ODC和AZ1蛋白对BCR-ABL癌蛋白的降解效应。方法PCR扩增src同源结构域2(src homology 2,SH2)、鸟氨酸脱羧酶(ornithine decarboxylase,ODC)及抗酶蛋白1(antizyme 1,AZ1)基因,构建携带SH2-ODC(SO)或AZ1基因的p Ad Track-CMV腺病毒穿梭质粒,经双酶切和测序鉴定后与腺病毒骨架质粒p Ad Easy-1同源重组,获得重组腺病毒质粒。后者经PacⅠ酶切鉴定后,在人胚肾细胞系AD293中包装、扩增,获得重组腺病毒;腺病毒Ad-SO和Ad-AZ1共感染人白血病细胞系K562,western blot检测目的蛋白的表达。结果双酶切和测序证实,腺病毒穿梭质粒构建正确;PacⅠ酶切结果显示,重组腺病毒质粒构建成功;western blot证实目的蛋白在K562细胞中表达正确,共表达SO和AZ1可以降低BCR-ABL蛋白水平。结论成功构建了Ad-SO和Ad-AZ1重组腺病毒,共表达SO和AZ1可以降解K562细胞中的BCR-ABL蛋白。
- 徐敏高淼黄峥兰陶崑钟梁冯文莉
- 关键词：SH2结构域鸟氨酸脱羧酶
- PTD-OD-HA融合蛋白对K562细胞中Bcr-Abl的抑制作用观察
- 2012年
- 目的探讨PTD-OD-HA融合蛋白转导K562细胞的动力学、定位及其与Bcr-Abl定位的关系,以及对Bcr-Abl寡聚化和Bcr-Abl酪氨酸激酶活性的影响。方法采用FITC标记PTD-OD-HA融合蛋白,观察蛋白转导K562细胞的效率与剂量和时间的关系,激光共聚焦显微镜检测融合蛋白在细胞内的定位,免疫共沉淀法检测融合蛋白与Bcr-Abl的相互作用,Western blotting检测Bcr-Abl的磷酸化水平。结果 PTD-OD-HA转导K562细胞呈剂量和时间依赖性。PTD-OD-HA定位于K562细胞胞质,与Bcr-Abl共定位,且能与Bcr-Abl蛋白相互作用,进而干扰Bcr-Abl同源寡聚化,并可降低Bcr-Abl的磷酸化水平。结论在K562细胞中,PTD-OD-HA融合蛋白能有效抑制Bcr-Abl同源寡聚化及磷酸化水平。
- 高淼黄峥兰季茂胜黄世峰曾建明李千音冯文莉
- 关键词：蛋白转导域
- 重组腺病毒Ad5/F35-HF2S的构建及其鉴定被引量：3
- 2012年
- 目的构建携带HA标签的重组腺病毒Ad5F35-HF2S。方法体外合成HA标签DNA双链,以K562细胞cDNA为模板,分别扩增FKBP1、FKBP2和SH2基因,依次亚克隆至穿梭质粒pAdTrack-CMV-HA中,构建重组穿梭质粒pAdTrack-CMV-HF2S,穿梭质粒经PmeⅠ酶切线性化,与腺病毒骨架质粒pAd5/F35在Ad5/F35-BJ5183感受态细胞中同源重组,获得重组腺病毒质粒pAd5/F35-HF2S,经PacⅠ酶切线性化后,转染AD-293细胞进行包装、扩增,获得重组腺病毒Ad5/F35-HF2S,经2轮扩增后,测定病毒滴度;采用PCR及Western blot法检测感染细胞中HF2S基因的转录及蛋白的表达。结果重组穿梭质粒pAdTrack-CMV-HF2S及重组腺病毒质粒pAd5/F35-HF2S经鉴定均构建正确;经包装及2轮扩增后,重组腺病毒Ad5/F35-HF2S病毒滴度可达1013IU/ml;经PCR及Western blot鉴定表明,重组腺病毒携带的HF2S基因能够在AD-293细胞中表达。结论已成功构建了表达HF2S基因的重组腺病毒Ad5/F35-HF2S,为研究Grb2-SH2结构域在CML中的基因治疗和作用机制奠定了基础。
- 李千音黄峥兰高淼钟梁冯文莉
- 关键词：SH2FKBP重组腺病毒
- 一种杀灭慢性粒细胞白血病耐药细胞的系统及方法
- 本发明一种杀灭慢性粒细胞白血病耐药细胞的系统，由载入腺病毒的SH2‑PTP1B/C‑ODC融合基因和AZ1基因组成。通过实验验证本发明的系统和方法可以杀灭白血病耐药细胞，并且效果非常好，对于治疗白血病的研究及药物的开发具...
- 冯文莉高淼黄峥兰徐敏
- 文献传递
- 采用锌指核酸酶技术破坏人bcr‑abl融合基因以抑制CML细胞增殖和促使其凋亡
- 本发明公开了一种DNA分子，其序列如SEQ ID No:2所示，还公开了该DNA分子作为靶点在抑制人bcr‑abl融合基因表达或导致人bcr‑abl基因功能丧失中的应用；抑制人bcr‑abl基因表达或导致人bcr‑abl...
- 冯文莉高淼黄宁姝黄峥兰袁颖
