高波
- 作品数：25 被引量：93H指数：6
- 供职机构：深圳大学生命科学学院过敏反应与免疫学研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划深圳市科技计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 屋尘螨变应原Der p 1基因原核表达产物的纯化及特性鉴定被引量：9
- 2006年
- 目的建立屋尘螨主要变应原Derp1蛋白原核表达产物的纯化方法,获得理想的表达产物并鉴定其免疫原性。方法大量诱导表达含pET24a-Derp1质粒的BL21工程菌,表达产物以重组蛋白包涵体的形式存在,包涵体经洗涤与溶解后,使用结合6组氨酸的镍柱进行亲和层析纯化蛋白质,用稀释复性方法进行重组蛋白的复性,再用屋尘螨过敏性哮喘患者阳性血清经Dot-ELISA方法分析Derp1纯化蛋白的抗原活性。结果分步洗涤可有效去除重组蛋白包涵体沉淀中混杂的多数杂蛋白成分,亲和层析分离可获得高纯度重组变应原Derp1蛋白。Dot-ELISA法检测结果表明经复性并纯化的Derp1蛋白呈强阳性反应,最佳血清稀释度为1∶64,而重组蛋白与正常人血清呈阴性反应。结论纯化后的融合蛋白Derp1具有较高的纯度及较强的免疫活性,可望作为有效的屋尘螨变应原诊断试剂和疫苗的候选分子。
- 刘志刚杨慧付颖媛高波朱健琦吉坤美
- 关键词：屋尘螨变应原P复性纯化
- 粉尘螨cDNA文库的构建被引量：4
- 2004年
- 目的构建粉尘螨cDNA表达文库。方法提取粉尘螨总RNA和mRNA,以NotIdT18作为引物反转录合成第一链,置换法合成第二链。加EcoRI接头,经NotI酶切后,应用定向克隆技术将相应dscDNA片段插入λExCell/NotI/EcoRI/CIP载体的NotI和EcoRI双酶切位点间,经包装、转染宿主菌,构建成cDNA文库。检测文库库容量和重组效率,并采用PCR方法对插入片段大小进行分析。结果已成功构建一个含4.8×105个重组子的cDNA表达文库,重组率为100%,插入片段大小平均约1.2kb。结论所建文库容量及插入片段大小适合对粉尘螨特异性重组变应原的进一步研究。
- 刘志刚周珍文高波罗时文陈淑贞张兆松
- 关键词：粉尘螨CDNA文库
- 一种诊断过敏性疾病变应原的检验方法
- 本发明涉及一种新型诊断过敏性疾病变应原的检验方法。通过天然或重组的方法获得尘螨、真菌和花粉等变应原，并包被在磁性纳米粒子。包被蛋白A的磁性纳米粒子与待测病人血清孵育后，血清中的大部分IgG被去除。再将血清加入包被有变应原...
- 刘志刚邢苗喻海琼吉坤美高波
- 文献传递
- 中国龙虾变应原性组分分析被引量：6
- 2006年
- [目的]对中国龙虾(Panulirusstimpsoni)变应原性组分进行分离和鉴定。[方法]用Coca's液提取法制备龙虾变应原粗浸液,经聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分离蛋白质组分,并用凝胶成像系统测定各组分的相对分子质量;采用蛋白质-印迹(Western-blotting)鉴定龙虾的主要及次要变应原。[结果]中国龙虾变应原粗浸液分离得到14种以上的蛋白质组分,有6种蛋白质能与患者血清特异性IgE结合,其中分子量为23000、34000、64000的蛋白质结合率较高。[结论]中国龙虾分子量为23000、34000和64000的蛋白质为主要变应原,分子量26000和64000两种蛋白质在粗浸液中含量并不高,但变应原性较强。
- 陈同强刘志刚高波
- 关键词：龙虾变应原性
- 防治空调中尘螨的方法
- 本发明涉及一种防治空调中尘螨的方法。过敏性疾病是由于吸入或接触各种变应原引起的，其中，屋尘螨和粉尘螨引起的变态反应疾病约占70％。经调查发现空调空气滤网是它们喜好的繁衍环境。本发明运用简单、实用、经济的方法抑制空调空气滤...
- 刘志刚邢苗喻海琼吉坤美高波李盟练玉银包莹沈作冰
- 文献传递
- 蒿属花粉cDNA文库的构建和初步鉴定被引量：14
- 2004年
- 目的构建蒿属花粉cDNA表达文库。方法应用定向克隆技术将相应dscDNA片段插入λExCell/NotI/EcoRI/CIP载体的NotI和EcoRI双酶切位点间,经包装、转染宿主菌,构建成cDNA文库。检测文库库容量和重组效率,并采用PCR方法对插入片段大小进行分析。结果成功构建了一个含有5.6×105个重组子的cDNA表达文库,重组率为100%,插入片段大小平均约1.3kb。结论所建文库容量及插入片段大小适合对蒿属花粉特异性重组变应原的进一步研究。
- 刘志刚吉坤美高波何毅华黄妩姣吴晓蔓
- 关键词：蒿属花粉重组变应原CDNA文库
- 屋尘螨重组变应原Der p 2的表达、纯化及免疫学活性鉴定被引量：6
- 2009年
- 目的大量诱导表达含pET24a-Derp2质粒的BL21工程菌,表达产物以重组蛋白包涵体的形式存在,经包涵体洗涤与溶解后,使用结合6组氨酸的镍柱进行亲和层析纯化蛋白质,用梯度复性方法进行重组蛋白的复性,再用屋尘螨过敏性哮喘患者阳性血清经Western blot方法分析Derp2重组蛋白的免疫学特性。纯化后的融合蛋白Derp2具有较高的纯度及较强的免疫活性,可望作为有效的屋尘螨变应原诊断试剂和疫苗的候选分子。
- 刘晓宇吉坤美高波刘志刚
- 关键词：屋尘螨蛋白表达免疫印记
- 粉尘螨Ⅰ类变应原(Der fⅠ)的克隆表达、纯化及免疫学特性被引量：22
- 2006年
- 粉尘螨Ⅰ类变应原(Der fⅠ)是粉尘螨Dermatophagoidesfarinae主要变应原,可引发Ⅰ型变态反应。挑取纯培养的粉尘螨,提取总RNA,采用RT-PCR方法有效地扩增出DerfⅠ片段,产物连接入T载体(pMD18)。经扩增后,用NdeⅠ和XhoⅠ双酶切后将目的片段连接到pET24a表达载体上,得到重组质粒pET24a-DerfⅠ,工程菌经IPTG诱导培养,高效表达出DerfⅠ蛋白,该蛋白主要以包涵体形式存在。表达产物经亲和层析纯化,用Westernblot及ELISA方法检测免疫学活性,结果表明目的蛋白具有良好的免疫原性。
- 朱健琦刘志刚高波吉坤美邢苗
- 关键词：粉尘螨变应原纯化
- 一种检测空调过滤网灰尘中尘螨变应原基因的方法
- 本发明涉及一种检测空调过滤网灰尘中尘螨变应原基因的方法。过敏性疾病是由于各种接触或吸入变应原引起的，其中，尘螨引起的变态反应疾病占70％左右。引起变态反应疾病的尘螨主要包括户尘螨和粉尘螨。经过调查发现空调过滤网也是它们嗜...
- 刘志刚刑苗喻海琼吉坤美高波张红云洪旭肖勇
- 文献传递
- 美洲大蠊主要变应原的纯化与免疫学鉴定
- 蟑螂变应原是一种主要昆虫过敏原(变应原)。在我国南方,美洲大蠊为蟑螂优势种群。自Bernton等于1964年首次报道了蟑螂是引起Ⅰ型变态反应的一种重要昆虫变应原后,国内外学者对蟑螂和变态反应性疾病(如外源性哮喘等)的关系...
- 胡川刘志刚邢苗高波
- 文献传递
