目的:采用原子力声显微镜及透射电镜观察低频低能量超声联合微泡对前列腺癌细胞DU145及正常前列腺上皮细胞RWPE-1的作用。方法:两种细胞均分为对照组、单纯超声组、超声联合微泡组。对照组加入一定比例的生理盐水,不进行超声辐照;单纯超声组加入相同比例的生理盐水,用发射频率为21 k Hz的低频超声辐照,辐照2 min,占空比30%;超声联合微泡组加入同前相同比例的微泡造影剂悬浊液,用与单纯超声组相同的超声辐照。处理过的细胞立即用原子力声显微镜观察其形貌并计算其杨氏模量。同时,对同一处理方式的对照组及超声联合微泡组细胞继续培养24 h后,用透射电镜观察细胞。结果:单纯超声组的DU145细胞及RWPE-1细胞的细胞形态与对照组无明显变化;超声联合微泡组的DU145细胞及RWPE-1细胞形态呈类圆形,细胞表面可见放射状显微丝状结构,细胞膜表面可见多个大孔状结构;超声联合微泡组的DU145细胞的弹性模量较RWPE-1细胞大,且与对照组相比,两种细胞的弹性模量均变大,DU145细胞尤甚。透射电镜观察结果示对照组的两种细胞未见细胞自噬,而超声联合微泡组两种细胞都出现自噬现象,其中DU145细胞中可见凋亡现象。结论:低频低能量超声联合微泡可引起前列腺癌DU145细胞及正常前列腺上皮RWPE-1细胞的细胞膜出现孔状结构,并诱导其自噬,且对DU145细胞的损伤大于RWPE-1细胞。
目的比较不同频率低频超声联合微泡促进脂质体介导的p EGFP质粒转染人前列腺癌PC3细胞。方法实验共分7组:空白对照组仅人前列腺癌PC3细胞株,不进行任何处理;质粒组每毫升细胞悬液中加入1μg质粒;脂质体组每毫升细胞悬液中加入100μl转染液;脂质体+微泡组每毫升细胞中悬液加入100μl转染液和200μl微泡,低频超声联合脂质体+微泡组每毫升细胞悬液中加入100μl转染液和200μl微泡,同时采用声功率为400 m W/cm2的脉冲超声波辐照模式,辐照时间240 s,占空比设为1∶1,依据辐照频率不同又分3个亚组,分别为20 k Hz超声组、500 k Hz超声组和1 MHz超声组。每组设6个复孔。各组经处理后继续培养24 h,荧光显微镜观察转染情况;流式细胞仪检测各组转染率。结果荧光显微镜下,低频超声联合脂质体+微泡组PC3细胞胞质内可见大量绿色荧光蛋白表达,明显多于其他各组,各亚组间又以20 k Hz超声组绿色荧光蛋白较多;脂质体组和脂质体+微泡组绿色荧光蛋白表达量亦多于空白对照组和质粒组。流式细胞仪检测显示,低频超声联合脂质体微泡组转染率高于质粒组,其中20 k Hz超声组转染率最高,明显高于其他各组,差异有统计学意义(P<0.05)。脂质体组与脂质体+微泡组之间、500 k Hz超声组与1 MHz超声组之间转染率比较差异无统计学意义。结论低频超声辐照微泡可显著促进脂质体介导的p EGFP质粒转染人前列腺癌PC3细胞。在相同声功率、相同辐照面积下,随着辐照频率的升高,转染率呈现下降趋势。
