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鸡肠上皮细胞原代培养方法的改进研究被引量：5: 2012年; 鸡肠上皮细胞(Intestinal epithelial cell,IEC)既是消化吸收的功能性细胞又是肠道免疫的天然屏障,本研究旨在探讨IEC的分离方法和改进其体外培养条件。试验选取20日龄鸡胚,分离肠组织后利用刮取法获得了肠绒毛及隐窝单位,在体外与成纤维细胞共同培养最终获得了活性较高的肠上皮细胞。对所分离细胞进行形态学观察和生化指标的检测,鉴定为IEC。结果表明,共培养方法可以使体外IEC的培养时间延长,可有效满足实验需要,为长时间培养IEC提供了新的方法。; 贾国东赵毅博刘冠群夏露屈月魏萍

食淀粉乳杆菌代谢产物调节细胞完整性及屏障功能的抗病毒作用: 本试验的目的是研究食淀粉乳杆菌（Lactobacillus amylovorus）代谢产物中起抑制致病菌和抗猪传染性胃肠炎病毒（TGEV）的成分是否具有一致作用,同时探索TGEV感染猪小肠上皮细胞（IPEC-J2）时,食...; 赵毅博; 关键词：猪传染性胃肠炎病毒抗病毒; 文献传递

食淀粉乳杆菌代谢产物抑菌与抗病毒的比较研究被引量：8: 2014年; 为研究食淀粉乳杆菌(Lactobacillus amylovorus)代谢产物抑菌和抗病毒的作用机制并确定其成分,试验采用过酸、过氧化氢酶及蛋白酶等处理食淀粉乳杆菌培养上清液,并利用琼脂扩散法(牛津杯法)和MTT法分别检测了食淀粉乳杆菌培养上清液对大肠杆菌、沙门氏菌和金黄色葡萄球菌的抑菌活力及对猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)感染猪小肠上皮细胞的抗病毒活性。结果显示,经过氧化氢酶、胰蛋白酶、胃蛋白酶处理后的食淀粉乳杆菌培养上清液的抑菌效果显著降低(P<0.05),但抗病毒活性变化不显著(P>0.05);经酸、蛋白酶K处理后的食淀粉乳杆菌培养上清液的抑菌效果和抗病毒活性都显著减弱(P<0.05),表明食淀粉乳杆菌培养上清液中抑菌与抗病毒成分有一致性,且为酸性物质和对蛋白酶K敏感的蛋白类物质。; 赵毅博田宗民王莹莹魏萍; 关键词：抗病毒 TGEV

嗜酸乳杆菌不同成分体外抗TGEV作用的研究: 2015年; 文章探讨嗜酸性乳杆菌不同成分在抗猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)中的作用,并分析益生菌抗病毒可能存在的机制。试验分离嗜酸乳杆菌不同成分和TGEV氨肽酶受体抑制剂Bestatin,按照感染后处理组、处理后感染组和同时感染处理组试验。采用MTT法,在猪睾丸细胞(ST)上评价各成分对TGEV抑制作用。在Bestatin封闭ST细胞基础上添加S-层蛋白,研究二者联合作用。结果表明,抑制率大小顺序:S-层蛋白>菌体>脱S-层蛋白菌体>代谢产物>牛血清白蛋白。S-层蛋白对TGEV抑制作用与Bestatin相当。由此可知,嗜酸乳杆菌S-层蛋白对TGEV在ST细胞上的复制有抑制作用。氨肽酶抑制剂Bestatin预先处理ST细胞对S-层蛋白抑制TGEV的感染具有协同作用。; 魏萍刘冠群贾国东赵毅博夏璐; 关键词：嗜酸乳杆菌 S-层蛋白抗病毒

食淀粉乳杆菌代谢产物对TGEV感染IPEC-J2细胞屏障功能的影响被引量：2: 2015年; 本研究采用荧光定量PCR方法,检测了IPEC-J2细胞不同时间点紧密连接蛋白3(claudin 3,CLDN-3)、细胞角蛋白8(cytokeratin 8,KRT8)、黏蛋白1(mucin 1,MUC1)3种蛋白mRNA的表达量变化。本试验将猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)感染IPEC-J2细胞,探索食淀粉乳杆菌代谢产物是否通过维持或改善CLDN-3、KRT8、MUC1蛋白mRNA表达来增强细胞的屏障功能,是否对IPEC-J2细胞感染TGEV后的屏障功能产生影响。试验结果发现,正常细胞对照组MUC1、CLDN-3及KRT8蛋白mRNA表达量随时间没有显著变化(P>0.05),MRS培养基对照组与正常细胞对照组相比没有显著变化(P>0.05),食淀粉乳杆菌代谢产物单独处理组对细胞MUC1、CLDN-3及KRT8蛋白mRNA表达量呈显著上调作用(P<0.05);食淀粉乳杆菌代谢产物+TGEV试验组与病毒对照组相比,处理24、36和48h,MUC1、CLDN-3及KRT8蛋白的表达显著升高(P<0.05)。结果表明,食淀粉乳杆菌代谢产物不仅能提高MUC1、CLDN-3及KRT8在IPEC-J2细胞上的表达,还能负调节TGEV诱导的MUC1、CLDN-3及KRT8在IPEC-J2细胞上的表达,从而加强IPEC-J2细胞对TGEV感染的屏障功能。; 田宗民张萍赵毅博刘文娜王子敬张宏宇张睿魏萍; 关键词：猪传染性胃肠炎病毒

枯草芽孢杆菌对轮状病毒感染IPEC-J2细胞相关TLRs mRNA表达的影响被引量：1: 2015年; 为研究枯草芽孢杆菌(B.subtilis)是否通过激活猪肠上皮细胞(IPEC-J2)中Toll样受体(TLRs)的表达抑制轮状病毒(RV)的复制,本研究采用RV感染灭活B.subtilis预处理的IPEC-J2细胞,鉴定B.subtilis对RV在细胞中增殖的抑制作用,并检测不同时间点RV感染B.subtilis预处理IPEC-J2细胞中相关TLRs的表达。结果显示,RV感染B.subtilis预处理IPEC-J2细胞24 h后,与未处理细胞相比,其病毒的增殖能力显著被抑制。通过荧光定量PCR检测不同处理组细胞TLRs m RNA的表达水平,结果表明RV感染B.subtilis预处理IPEC-J2细胞在感染早期(1 h和3 h)与其他组相比,TLR2、TLR3、TLR9 m RNA表达均显著增加。本研究表明,灭活的B.subtilis能够抑制RV在IPEC-J2细胞中的增殖,并在病毒感染初期显著提高细胞TLRs m RNA表达,推测可能与调节宿主细胞的先天免疫反应有关。; 夏璐张萍王莹莹尹鑫魏萍田宗民刘冠群赵毅博; 关键词：枯草芽孢杆菌猪轮状病毒 TLRS

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赵毅博