范文文
- 作品数：12 被引量：8H指数：1
- 供职机构：滨州医学院附属医院更多>>
- 发文基金：山东省自然科学基金山东省科技发展计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- RNA干扰联合小剂量阿糖胞苷对K562细胞增殖、凋亡的影响被引量：3
- 2012年
- 目的探讨利用RNA干扰(RNAi)技术沉默同源盒(HOX)A10基因联合小剂量阿糖胞苷(Ara-C)对K562细胞增殖、凋亡的影响,为白血病的基因治疗提供实验依据。方法设计合成针对HOXA10的特异性短发卡RNA寡核苷酸链,构建pGPHI/GFP/Neo-HOXA10真核表达载体并测序,应用阳离子脂质体转染K562细胞。RNAi与小剂量Ara-C单独和联合应用后,应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞凋亡率。结果成功构建pGPHI/GFP/Neo-HOXA10载体,并转染K562细胞,结果显示该载体能有效降低HOXA10 mRNA表达水平,HOXA10/β-actin灰度比值(ODR)为(38.86±4.49)%;RNAi联合小剂量Ara-C作用于K562细胞后,细胞增殖能力明显下降,细胞增殖抑制率(IR)为(75.58±8.11)%,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05);荧光显微镜可见红色荧光凋亡细胞明显增加,凋亡率显著升高,可达(29.71±1.24)%,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论靶向HOXA10的RNAi技术联合小剂量Ara-C能有效抑制K562细胞增殖,并诱导其凋亡,有望成为白血病基因治疗的新方案。
- 范文文贾秀红李建厂唐慎华朱淑霞
- 关键词：RNA干扰阿糖胞苷K562细胞白血病
- 靶向同源盒A10特异性干扰性小RNA序列的筛选及功能鉴定被引量：1
- 2011年
- 目的筛选有效干扰同源盒（HOX）A10基因表达的特异性干扰性小RNA（siRNA）序列并鉴定其功能，为利用RNA干扰技术靶向HOXA10防治肿瘤提供实验依据。方法设计合成3对针对HOXA10基因不同位点的siRNA序列，应用阳离子脂质体介导转染人肺腺癌A549细胞，采用反转录-聚合酶链反应（RT—PCR）检测HOXA10 mRNA表达，以HOXA10与β-actin灰度比值（ODR）表示相对表达水平。筛选出抑制HOXA10效果最佳的siRNA序列，应用四甲基偶氮唑盐（MTT）和流式细胞术分别检测该siRNA干扰HOXA10后对A549细胞增殖和凋亡的影响。结果3对siRNA均能抑制HOXA10的表达，其中siRNA1抑制HOXA10 mRNA的表达最为明显，ODR为（20．190±1．698）％；siRNA1对A549细胞的增殖抑制率可达（69．793±2．092）％；siRNA转染后细胞凋亡率显著提高，siRNA1诱导A549凋亡作用最为明显，凋亡率为（29．593±2．670）％。结论筛选出的siRNA1序列可有效沉默HOXA10基因的表达，并能有效抑制A549细胞增殖、促进其凋亡。
- 贾秀红范文文李建厂谢书阳
- 关键词：同源盒RNA干扰A549细胞
- RNAi靶向HOXA10对K562细胞多药耐药的研究
- 目的：本研究通过建立高效干扰HOXA10表达的真核载体pGPHI/GFP/Neo-HOXA10,探讨RNAi技术逆转人慢性髓系白血病K562细胞株多药耐药的新方案.方法：根据前期筛选的针对HOXA10的特异性siRNA序...
- 贾秀红范文文李建厂谢书阳李友杰
- 关键词：K562细胞多药耐药RNAI技术
- RNA干扰同源盒A10表达对K562细胞增殖及凋亡的影响被引量：1
- 2012年
- 目的通过构建靶向同源盒A10（HOXA10）的真核表达载体，探讨利用RNA干扰沉默HOXAIO基因对人慢性髓系白血病细胞株K562增殖和凋亡的影响。方法根据筛选的针对HOXA10的特异性有效小干扰RNA（siRNA）序列设计合成短发夹RNA（shRNA）寡核苷酸链，构建pGPHI—GFP—Neo—HOXA10真核表达载体并测序，应用阳离子脂质体转染K562细胞。实验分为细胞对照组（仅加等量细胞及培养基），阴性对照组（脂质体转染阴性对照质粒）、实验组（脂质体转染pGPHI—GFP—Neo—HOXA10）。转染载体24h后利用RT—PCR检测各组HOXA10 mRNA表达；转染载体24、48、72h后应用MTT法检测各组细胞增殖并计算细胞抑制率；转染载体48h后应用流式细胞术检测各组细胞凋亡。结果成功构建pGPHI—GFP—Neo—HOXA10载体并转染K562细胞。与细胞对照组和阴性对照组比较，实验组转染载体能有效降低HOXA10 mRNA的表达水平[（38．86±4．49）％比（88．52±9．24）％、（86．75±7．38）％，P〈0．05]，而阴性对照组与细胞对照组比较差异则无统计学意义（P〉0．05）。与阴性对照组比较，实验组载体作用于K562细胞24、48、72h后，细胞增殖能力均明显下降，细胞抑制率明显升高[（39．92±0．74）％比（7．98±5．52）％；（55．62±1．18）％比（8．27±3．45）％；（66．30±1．26）％比（8．63±3．58）％；均P〈0．05]。实验组细胞凋亡率较细胞对照组、阴性对照组也显著升高[（22．29±1．67）％比（9．82±0．69）％、（10．14±0．96）％，P〈0．05]，而阴性对照组与细胞对照组比较差异则没有统计学意义（P〉0．05）。结论构建的真核表达载体pGPHI—GFP—Neo—HOXA10可有效沉默K562细胞中HOXA10基因的表达，能明显抑制K562细胞增殖并诱导其凋亡。
- 贾秀红范文文李建厂朱淑霞唐慎华
- 关键词：K562细胞细胞增殖凋亡
- Hoxa10真核表达载体增强K562细胞对柔红霉素敏感度的研究
- 2012年
- 目的构建高效干扰Hoxa10基因表达的shRNA真核载体,探讨其对人慢性髓系白血病细胞株K562对化疗药物柔红霉素(daunorubicin,DNR)敏感度的影响。方法设计合成针对Hoxa10的特异性shRNA寡核苷酸链,构建真核表达载体pGPHI/GFP/Neo-Hoxa10并测序,应用阳离子脂质体转染K562细胞。实验分三组:正常对照组、阴性对照组、实验组(分别为正常K562细胞、阴性对照质粒转染K562细胞、pGPHI/GFP/Neo-Hoxa10转染K562细胞),三组细胞均加入不同浓度的DNR。RT-PCR检测Hoxa10 mRNA的表达,应用MTT检测各组细胞对DNR的敏感度,流式细胞术检测细胞凋亡率。结果成功构建pGPHI/GFP/Neo-Hoxa10载体并转染K562细胞,该载体能有效降低Hoxa10mRNA表达水平ODR=(38.864±4.488)%;MTT结果显示Hoxa10重组载体可显著降低K562细胞对DNR的IC50(P<0.05),对DNR的敏感度能提高约3.58倍。流式细胞术结果显示,该载体下调Hoxa10的表达后,细胞的凋亡率显著增加,可达(16.207±4.891)%(P<0.05),且联合DNR后细胞凋亡率明显提高,凋亡率达(76.887±0.967)%(P<0.05)。结论本实验构建的靶向Hoxa10的真核表达载体对K562细胞中Hoxa10的表达有明显抑制作用,并能明显增强其对DNR的化疗敏感度。
- 范文文贾秀红李建厂
- 关键词：HOXA10SHRNA柔红霉素K562
- HOX10基因在儿童急性白血病中的表达及临床意义
- 目的：本研究探讨同源盒(HOX)A10基因在儿童急性白血病(AL)患者中的表达及其临床意义.方法：运用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法,检测50例初治AL患儿(包括急性髓系白血病(AML)25例、急性淋巴白血病(...
- 贾秀红范文文李建厂
- 关键词：急性白血病儿童患者
- HOXA10基因在儿童急性白血病中的表达及意义
- 2012年
- 目的探讨急性白血病患儿同源盒(HOX)A10基因的表达及其临床意义。方法选择50例初治急性白血病患儿,其中急性髓系白血病(AML)25例、急性淋巴细胞白血病(ALL)25例,以及13例对照儿童,分离其骨髓单个核细胞,运用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测骨髓单个核细胞HOXA10 mRNA;检测急性白血病患儿外周血白细胞计数(WBC),分析不同类型急性白血病患儿HOXA10基因表达之间的关系。结果对照儿童HOXA10基因的阳性表达率为23.08%,ALL患儿为40%,AML患儿为100%;平均表达灰度比值(ODR)分别为对照儿童0.022±0.001,AML患儿0.373±0.113,ALL患儿0.151±0.006,三组间阳性表达率及表达水平差异均有统计学意义(P<0.01),其中尤以AML患儿最高。HOXA10基因在各型AML中均有表达,其表达水平依次为M1和(或)M2型、M3型、M4和(或)M5型,差异有统计学意义(P<0.01)。WBC≥30×109/L的急性白血病患儿的HOXA10基因阳性表达率显著增高;高危组急性白血病患儿的HOXA10基因的阳性表达率也明显高于中危组和低危组。结论 HOXA10基因的高表达与儿童急性白血病,尤其是与AML明显相关,并且随着AML白血病细胞分化成熟表达逐渐下降;HOXA10基因的阳性表达率与儿童急性白血病危险程度呈正相关,有望成为儿童急性白血病诊断、治疗及判断预后的一个靶点。
- 范文文贾秀红李建厂李仲霞唐慎华
- 关键词：HOXA10基因白血病儿童
- 原发性血小板增多症发病机制研究进展被引量：1
- 2011年
- 原发性血小板增多症（ET）是一种以巨核细胞系增生为主的多能造血干细胞克隆性疾病.儿童与成人疾病特征类似,主要表现为血小板持续性增多,伴有出血、血栓形成,肝脾轻至中度肿大.研究表明ET的发病与多种基因、微小RNA、免疫分子的表达异常或失调及一些染色体异常等相关.该文综述了ET发病机制在分子生物学、免疫学、细胞遗传学等领域的研究进展.
- 范文文贾秀红
- 关键词：原发性血小板增多症发病机制
- RNA干扰同源盒A10基因表达可逆转白血病K562细胞多药耐药性被引量：1
- 2011年
- 目的:本研究通过建立高效干扰同源盒A10(homeobox A10,HOXA10)基因表达的短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)真核表达载体,探讨RNA干扰技术逆转人慢性髓系白血病K562细胞株多药耐药的新方案。方法:构建靶向HOXA10基因的真核表达载体pGPHI/GFP/Neo-HOXA10,应用阳离子脂质体将其转染入K562细胞,G418筛选4周。RT-PCR鉴定重组载体稳定转染的细胞株。MTT法检测细胞在转染前后对长春新碱(leurocristine,VCR)、足叶乙苷(etoposide,VP-16)的敏感性变化。FCM法检测各组细胞的凋亡率。结果:经G418筛选后,反转录PCR(reverse transcriptase PCR,RT-PCR)证实成功建立了pGPHI/GFP/Neo-HOXA10稳定转染的细胞克隆。MTT结果显示,基因干扰组细胞的半数抑制浓度(half-inhibitory concentration,IC50)值明显低于对照组(P<0.05),对VCR及VP-16的敏感性明显增强。FCM检测结果表明,基因干扰组细胞联合化疗药物后细胞凋亡率显著增加(P<0.05)。而转染阴性对照组的IC50值及细胞凋亡率与正常对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:以HOXA10基因为靶标构建的shRNA表达载体能明显增强VCR和VP-16对K562细胞的抑制增殖、诱导凋亡作用,提高白血病细胞对化疗药物的敏感性。提示HOXA10基因表达被RNA干扰可以在一定程度上逆转白血病细胞的多药耐药性。
- 贾秀红范文文李建厂谢书阳李有杰
- 关键词：白血病RNA干扰抗药性多药K562细胞
- HOXA7基因与白血病
- 2011年
- HOXA7作为HOX基因家族的一员,是造血细胞增殖分化的主控基因,其在白血病中的表达及功能受多种上游因子的调控及协同作用分子、其他HOX基因的影响,并且作用于下游靶基因,导致白血病的发生、发展.HOXA7可影响白血病的临床表现,且其过表达与白血病疗效差及预后不佳密切相关.
- 范文文贾秀红
- 关键词：白血病同源盒基因
