罗弋
- 作品数：23 被引量：63H指数：5
- 供职机构：重庆医科大学附属第一医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家临床重点专科建设项目重庆市自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 抗人肺癌单链抗体噬菌体库的构建及特异性单链抗体的鉴定被引量：2
- 2009年
- 目的构建人源噬菌体抗体库,并从中筛选出抗肺癌人源单链抗体。方法提取肺癌患者癌旁淋巴结组织,通过RT-PCR扩增出重链可变区基因(VH)和轻链可变区基因(VL),再经剪切-重叠-延伸PCR(SOE-PCR)将VH和VL连接得到单链抗体(ScFv)。将双酶切后的ScFv基因片段克隆入噬菌体表达载体pCANTAB5E,得到初级噬菌体抗体库。以肺腺癌细胞株A549为抗原对抗体库进行4轮筛选富集,鉴定抗体库性能。将得到的阳性克隆用IPTG诱导表达并进行检测。结果成功构建噬菌体单链抗体库。经筛选富集,噬菌体收获率得到增加,第4轮是第1轮的115倍。随机选取10个克隆,通过ELISA法检测到其中7个与A549细胞呈阳性反应,阳性率为70%。SDS-PAGE及ELISA检测证实得到人源抗肺癌单链抗体。结论成功构建人源单链抗体噬菌体库,从中获得具有较高特异性的抗人肺癌单链抗体。
- 罗弋庞华李少林曹辉李淑杰王树斌樊春波
- 关键词：单链抗体肺腺癌
- 抗PeroxiredoxinⅠ肺腺癌噬菌体抗体的制备、抑制肺腺癌细胞增殖研究及其在荷人肺腺癌裸鼠模型中的放免显像
- 肺癌是目前世界上死亡率最高的恶性肿瘤之一，与20世纪初相比，现在肺癌已经成为威胁人类健康和生命的最大敌人之一。目前肺癌的治疗主要采取外科手术结合放疗和化疗的综合治疗。但肺癌早期少有症状或症状不明显，因此导致患者出现症状就...
- 罗弋
- 关键词：肺腺癌放免显像裸鼠模型
- 文献传递
- 磁标记反义探针对小鼠的急性毒理观察被引量：2
- 2009年
- 目的评价SPIO标记的c-erbB2反义寡脱氧核苷酸探针对小鼠的急性毒性,为进一步将该探针用于活体MR基因成像与靶向基因治疗奠定基础。方法60只清洁级昆明种小鼠分为口服灌胃、静脉注射、腹腔注射3组,采用最大给药量法,口服灌胃:总剂量为2 104.8 mg/kg,给药容积40 ml/kg;静脉注射:总剂量为438.5 mg/kg,给药容积25 ml/kg;腹腔注射:总剂量为1 578.6 mg/kg,给药容积30 ml/kg;各组还另设20只小鼠按相应方式给予等量生理盐水作为对照。所有实验小鼠均在25℃室温下连续饲养14 d,观察并记录饲养期间小鼠的一般情况、主要脏器的病理学、血常规、凝血指标和血清主要生化指标改变。结果在观察期间,各组小鼠均未出现死亡,仅个别出现食欲下降、饮水量增多、腹泻、嗜睡、活动增加等,但均在3 d内恢复正常。脏器系数无统计学差异,肝、脾、肾、心、肺、骨髓、生殖器等主要脏器颜色、形态未见明显异常改变,HE染色切片肝、脾、肾、心、肺、生殖器等细胞和Wright染色的骨髓细胞均无水肿、变性、坏死等改变,普鲁士蓝染色仅见肝、脾内分布少许蓝色铁颗粒。各组血常规、凝血指标及生化指标无统计学差异。结论SPIO标记的c-erbB2反义寡脱氧核苷酸探针对小鼠无急性毒性。
- 文明欧阳羽柏玮罗弋李少林
- 关键词：反义寡脱氧核苷酸超顺磁性氧化铁毒理实验
- 人源肺腺癌噬菌体抗体库的构建及初步筛选被引量：3
- 2008年
- 目的构建人源肺腺癌噬菌体单链抗体库,并筛选肺腺癌细胞A549特异性单链抗体。方法利用肺腺癌患者癌旁淋巴结组织构建肺腺癌噬菌体单链抗体库。从该抗体库中筛选特异性识别A549细胞的单链抗体,将阳性克隆菌转化E.coli HB2151进行可溶性表达。抗体亲和层析纯化后经SDS-PAGE、Western blot鉴定,通过ELISA法鉴定其与人肺腺癌细胞结合的特异性。结果成功构建了1个4.6×107的噬菌体抗体库。在筛选过程中,肺腺癌噬菌体单链抗体得到富集,收获率逐轮得到提高,第5轮为第1轮的181倍。在E.coli HB2151中实现了单链抗体的可溶性表达。SDS-PAGE与Western blot结果显示抗体相对分子质量为30×103左右。细胞ELISA测定结果显示可溶性抗体具有较高的特异性,能与A549细胞结合,而不与MDA-MB-435细胞结合。结论从肺腺癌病人癌肿周围淋巴结扩增免疫球蛋白基因成功地构建人源肺腺癌噬菌体单链抗体库,并从中筛选到肺腺癌特异性抗体。
- 庞华罗弋李少林
- 关键词：噬菌体抗体库单链抗体肺腺癌
- 中晚期宫颈癌患者调强放疗与同步推量调强放疗预后比较被引量：3
- 2016年
- 目的 探讨同步推量调强放疗（SIB-IMRT）技术治疗中晚期宫颈癌患者的不良反应、远期疗效及相关预后因素。方法 回顾性分析2009年1月至2015年6月收治的277例中晚期未手术的宫颈癌患者，其中70例行IMRT，207例行SIB-IMRT。比较中晚期宫颈癌患者行IMRT与SIB-IMRT后的不良反应，并进行远期疗效及预后因素分析。采用Kaplan-Meier法计算生存率，Cox法行多因素预后分析。结果 IMRT组与SIB-IMRT组的随访率均为100%。与IMRT相比，SIB-IMRT未增加患者直肠及膀胱的急性毒性反应（χ^2=0.306和0.971，P均〉0.05）和远期毒性反应（χ^2=0.014和0.381，P均〉0.05）。IMRT组及SIB-IMRT组患者1年总生存率（OS）分别为100%和99.5%，3年OS分别为75.0%和84.7%，差异无统计学意义（χ^2=0.339和0.674，P均〉0.05）。患者年龄和治疗前淋巴结状态是所有入组患者（χ^2=7.971和15.938，P均〈0.05）及SIB-IMRT组患者（χ^2=7.503和10.048，P均〈0.05）生存的预后影响因素。结论 初步结果表明SIB-IMRT技术安全可行，且可以减少后装治疗次数，减轻患者后装治疗的不适及痛苦。对于中晚期宫颈癌患者，SIB-IMRT是一种可尝试的外照射技术。
- 黄维李英龙强鲁文力姜庆丰谭本旭田丽娟罗弋肖英方文姬
- 关键词：预后调强放射治疗
- 抗CCR7单链抗体的筛选及初步鉴定被引量：1
- 2010年
- 目的从噬菌体抗体库中筛选抗CCR7单链融合抗体,并对其生物学特性进行初步检测。方法PCR检测大肠杆菌中ScFv基因插入率;琼脂糖凝胶电泳鉴定SfiI和NotI双酶切质粒的结果;分别以乳腺癌细胞及CCR7多肽片段为靶抗原对抗体库进行4轮和3轮筛选富集。将阳性克隆转化E.coliHB2151进行可溶表达。抗体亲和层析纯化后,经Western blot鉴定,通过ELISA法检测可溶性ScFv抗体的免疫活性。免疫细胞化学和放射免疫显像鉴定scFv抗体与乳腺癌细胞结合的特异性。结果ScFv基因插入率为90%(18/20),双酶切鉴定检测到目的条带。经4轮细胞筛选,3轮抗原筛选抗CCR7抗原的噬菌体抗体得到了明显富集,在E.coliHB2151中实现可溶表达。Western blot结果显示获得抗体相对分子质量为34ku左右。免疫细胞化学检测与放射免疫显像均证实单链抗体与表达CCR7的乳腺癌细胞MDA-MB-435s特异性结合。结论成功从噬菌体抗体库中筛选获得具有较高特异性的抗CCR7单链抗体。抗体在体内体外均与肿瘤细胞表达特异抗原结合。
- 樊春波李少林彭志平罗弋曹辉王洁
- 关键词：噬菌体抗体库单链抗体CCR7淋巴结转移抗体筛选
- ABCG2特异性肺腺癌单链抗体的裸鼠体内放免显像及其抑瘤作用被引量：1
- 2016年
- 目的观察ABCG2特异性肺腺癌单链抗体(scFv)在裸鼠体内的放免显像和代谢动力学特征,并探讨其对肿瘤生长的作用。方法采用不同浓度梯度scFv处理肺腺癌细胞后,Western blot检测ABCG2靶蛋白表达量的变化;CCK-8检测细胞增殖能力改变并绘制生长曲线;流式细胞术检测细胞凋亡和周期变化;放射性核素131I标记抗体后行裸鼠体内生物分布和SPECT/CT放免显像研究;进一步建立移植瘤模型检测scFv的体内抑瘤能力。结果 scFv干预肺腺癌细胞后导致ABCG2蛋白表达水平较对照组显著降低,并明显抑制细胞增殖,诱导细胞凋亡和细胞周期阻滞(P<0.05)。裸鼠体内生物分布和放免显像结果显示该scFv具有良好的代谢动力学特征,表现为高效、快速的肿瘤靶部位特异性结合及体内清除能力。结论肺腺癌ABCG2 scFv具有良好的放免显像效果,并显示出较好的代谢动力学、亲肿瘤和抗肿瘤特性,对肿瘤的生长有抑制作用。
- 赵文思周寒静罗弋
- 关键词：肺腺癌单链抗体ABCG2代谢动力学
- 超顺磁性氧化铁标记反义寡脱氧核苷酸探针在转染细胞磁共振成像中的应用被引量：6
- 2008年
- 目的制备超顺磁性氧化铁(SPIO)标记的反义寡脱氧核苷酸(ASODN)探针,探讨其应用于转染细胞磁共振(MR)成像的可行性。方法采用化学交联法将SPIO标记于c-erbB2癌基因的ASODN制成ASODN探针,原子力显微镜检测探针形态,高效液相凝胶色谱法检测联接率和生物活性,聚丙烯酰胺凝胶电泳法检测稳定性。将ASODN探针转染高表达c-erbB2癌基因的SK-Br3肿瘤细胞株,普鲁士蓝染色后于光学显微镜下观察细胞内铁分布,原子吸收光谱法测定细胞内铁含量,MR扫描观察细胞信号强度变化情况。结果制备的ASODN探针近似球形,粒径在25～40nm间,分散均匀,联接率为100%,仍保持原有生物活性,稳定性好。转染ASODN探针后的SK-Br3细胞胞浆内可见多少不等的蓝色铁颗粒,细胞内铁含量明显高于未转染ASODN探针的其他各组细胞(P均<0.01);MR扫描显示其信号强度最弱,信噪比值明显低于其他各组细胞(P均<0.05)。结论成功制备SPIO标记ASODN探针,该探针能有效进入SK-Br3细胞内,明显降低MR扫描下的转染细胞信号强度。
- 文明李必波欧阳羽蒋明东罗弋李少林
- 关键词：磁共振成像超顺磁氧化铁反义寡脱氧核苷酸靶向对比剂
- EGF偶联白蛋白靶向纳米载体在荷瘤裸鼠体内分布的研究被引量：5
- 2008年
- 目的:本研究旨在探讨125I-EGF-BSA靶向纳米载体在荷人乳腺癌SK-BR3裸鼠体内的分布。方法:采用超声乳化-化学交联方法制备牛血清白蛋白纳米载体,经过羧和反应将与白蛋白纳米载体表面的活性氨基与EGF进行偶联反应,制备EGF偶联白蛋白纳米载体。在裸鼠体内进行荷人乳腺癌实验,将荷瘤裸鼠随机分为3个实验组,125I-BSA非纳米载体组(直接在BSA上标记125I),125I-EGF-BSA靶向纳米载体组和125I-BSA纳米载体组,检测不同时间点各组织的放射分布。结果:125I-EGF-BSA靶向纳米载体的瘤/血比值和瘤/肌肉比值明显高于其它两个给药组,差异有统计学意义(P<0.05)。125I-EGF-BSA靶向纳米载体在荷瘤裸鼠体内的放射性瘤/血比值和瘤/肌肉比值随时间逐渐升高,在2h达峰值,后略有下降。做方差分析,同一时间点125I-EGF-BSA靶向纳米载体的放射性瘤/血比值和瘤/肌肉比值均高于其他两个给药组,差异均具有统计学意义(P<0.05)。25I-EGF-BSA靶向纳米载体在肝、脾、肺等器官分布明显低于其它两组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:125I-EGF-BSA靶向纳米载体对裸鼠体内的人乳腺癌SK-BR3肿瘤具有明显的靶向性,而肝、脾、肺等器官的分布少。
- 王树斌袁飞彭志平李少林孙世良罗弋宋琳
- 关键词：EGF牛血清白蛋白
- 人源乳腺癌噬菌体抗体库的构建及初步筛选
- 2010年
- 目的构建人源乳腺癌噬菌体单链抗体库,并筛选乳腺癌特异性单链抗体(Scfv)。方法利用乳腺癌患者癌旁淋巴组织来构建抗乳腺癌噬菌体抗体库。通过正常乳腺细胞(MCF-10F)和乳腺癌细胞(MCF-7)筛选富集后,用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测噬菌体抗体活性。结果成功的构建了1个4.2×107的噬菌体抗体库,并从该库中筛选到6株对乳腺癌细胞株MCF-7有结合活性的阳性克隆。结论从人源乳腺癌噬菌体抗体库中筛选到6株特异性噬菌体抗体,为下一步进行单链抗体的乳腺癌放射性核素显影及治疗奠定了基础。
- 唐树彬李少林彭杰邹安娜罗弋
- 关键词：乳腺癌噬菌体抗体库单链抗体
