石亮
- 作品数：4 被引量：9H指数：2
- 供职机构：中国医学科学院北京协和医学院医学实验动物研究所更多>>
- 发文基金：国家科技支撑计划更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 腺相关病毒的特性及应用进展被引量：5
- 2016年
- 腺相关病毒(AAV)是一种重要的载体。它与反转录病毒、慢病毒、腺病毒相比有不同的特点,如长期表达,安全性高,免疫原性低,高滴度生产能力,对某些组织感染效率高等。经过十多年的研究,它的生物特性已经被深入了解。在医学上,广泛应用于疾病的基因治疗,如糖尿病、乙型肝炎、癌症及一些免疫性疾病。生物学上,应用于基因功能的研究,作为转基因的载体,动物模型的建立及癌症的研究等。该文就AAV的基本生物学特性和应用进展进行综述。
- 石亮刘云波
- 关键词：腺相关病毒血清型
- 恒河猴P21基因在COS-7细胞中沉默位点的验证
- 2015年
- 目的在细胞水平筛选恒河猴P21基因的有效沉默靶点。方法检测COS-7中P21基因的表达水平;设计shRNA并构建P21-RNA干扰慢病毒载体FUGW-TDT-P21shRNA转染COS-7细胞,通过real-time PCR检测沉默效率,并以Western blot在蛋白水平进行验证。结果筛选到四个有效的靶位,分别位于P21 mRNA的541-561、542-562、215-239、624-648 bp。四个靶位点在mRNA水平的沉默效率分别为(91.82±3.21)%、(82.47±2.48)%、(81.31±2.69)%和(87.35±4.59)%。相应的蛋白表达量为(11.97±0.70)%、(20.22±0.65)%、(23.21±0.63)%和(14.42±0.86)%。结论在细胞水平筛选得到四个有效的P21基因沉默靶点,可用于恒河猴基因沉默研究。
- 李雨函苏静芬张晨石亮刘云波
- 关键词：基因沉默P21基因恒河猴
- 恒河猴 p53基因沉默靶点在细胞水平的验证被引量：3
- 2014年
- 目的：为建立恒河猴 p53基因沉默模型，首先在细胞水平筛选和测定恒河猴 p53基因有效沉默靶点。方法测定非洲绿猴肾来源成纤维细胞 COS-7中 p53基因的表达水平；对恒河猴 p53基因做生物信息学分析，优选靶序列设计 shRNA，克隆入慢病毒载体 FUGW-TDT，转染 COS-7细胞，以 real-time PCR 检测 p53 mRNA 抑制水平，以 Western blot 检测 p53蛋白水平表达变化。结果在 COS-7细胞检测到 p53基因的表达；生物信息学筛选到3个靶片段，分别位于 p53 mRNA 的238～258 bp，681～701 bp，169～189bp，均在开放阅读框内； p53三个靶位点的沉默效率在 mRNA 水平分别为（87.17±4.03）％，（72.62±14.11）％，（76.22±0.98）％；在蛋白水平的沉默效率分别为（84.44±2.18）％，（71.0±1.18）％，（74.17±0.95）％。结论在细胞水平筛选得到3个有效的 p53基因沉默靶点，可用于后续的恒河猴基因沉默研究。
- 苏静芬张晨李雨函刘先菊佟巍向志光石亮石桂英刘云波
- 关键词：基因沉默P53基因恒河猴
- 腺相关病毒介导的狨猴P53基因沉默被引量：1
- 2016年
- 目的在细胞和整体动物水平,利用RNA干扰技术下调绒猴p53基因表达。方法对狨猴p53基因做生物信息学分析,针对靶序列设计shRNA干扰序列,构建在腺相关病毒载体上,转染非洲绿猴肾细胞(cos-7),在细胞水平用荧光定量PCR检测p53mRNA抑制效果,以Western blot方法检测p53蛋白水平表达变化;优选shRNA干扰序列,包装含shRNA干扰序列的8型腺相关病毒,静脉注射感染狨猴;手术取少量肝脏组织,用Western blot和免疫组化方法检测p53蛋白水平的变化。结果细胞水平研究发现2个有效RNA干扰靶点,mRNA干扰效率分别为(82.7±8.1)%和(80.7±7.5)%(P<0.05);蛋白表达下调(77.3±11.5)%和(73.7±10.7)%(P<0.05);2只绒猴感染病毒后,经活体荧光成像分析可见病毒在肝脏、睾丸、颈部等位置分布,狨猴肝脏P53蛋白经Western blot、免疫组化分析未见明显变化。结论本研究在细胞水平实现绒猴P53基因表达下调,但整体动物水平狨猴肝脏P53蛋白表达未发现明显变化;今后需在感染方式等方面做进一步优化。
- 石亮张晨向志光邓仪晨苏静芬刘云波
- 关键词：P53RNA干扰狨猴
