王宇哲
- 作品数：13 被引量：25H指数：3
- 供职机构：华中科技大学同济医学院更多>>
- 发文基金：湖北省自然科学基金武汉市青年科技晨光计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 鸡贫血病毒vp3基因的克隆及其体外凋亡诱导效应的研究被引量：6
- 2001年
- 用 PCR方法扩增了鸡贫血病毒标准株的 vp3基因 ,并将其克隆于真核表达载体 pc DNA3上 ,构建了重组体pc DNA- vp3。经酶切鉴定及测序分析表明 ,该片段和预期相符。在体外利用 L ipofect AMINETM介导的基因转染 ,将 pc D-NA- vp3、 pc DNA3分别转入肝癌细胞系 Hep G2和二倍体肝细胞系 L- 0 2中 ,转染后的 RT- PCR结果证实 vp3基因在细胞中得到了表达。同时利用筛选稳定表达细胞株的技术和原位细胞凋亡检测法 ,证明了鸡贫血病毒是以凋亡的方式诱导细胞死亡 ,并且只诱导癌细胞的凋亡 ,而不诱导正常或二倍体细胞死亡。表明鸡贫血病毒
- 王宇哲申志发田俊宗义强屈伸
- 关键词：基因克隆细胞凋亡VP3基因体外凋亡
- 脱唾液酸糖蛋白受体介导的vp3基因体内靶向性治疗肝癌的研究
- 利用肝细胞表面存在特异的脱唾液酸糖蛋白受体(asialoglycoprotein receptor,ASGPR)这一特性,本文将研究Asor-PLL-vp3复合物体内肝细胞的靶向性及其体内抑瘤效应,探索脱唾液酸糖蛋白受体...
- 孙军王宇哲彭冬君屈伸
- 关键词：VP3基因基因治疗核素裸鼠移植瘤
- 文献传递
- 鸡贫血病毒VP3基因的克隆及在H22细胞中的凋亡诱导状况被引量：2
- 2003年
- 目的 :观察CAV、VP3基因在H2 2细胞中的凋亡诱导情况。方法 :用PCR方法扩增了鸡贫血病毒标准株的VP3基因 ,并将其克隆于真核表达载体pcDNA3上 ,构建含VP3基因的重组体 ;在体外 ,利用LipofectAMINETM 介导的基因转染法 ,将pcDNA VP3、pcDNA3分别转入小鼠腹水型肝癌细胞系H2 2中 ,RT PCR法检测VP3基因在细胞中的表达状况。同时利用流式细胞检测术验证VP3基因诱导死亡的方式。结果 :酶切鉴定及测序分析表明 ,插入片段和预期相符 ,阳性重组体被命名为pcDNA VP3;RT PCR结果表明 ,转染后 ,VP3基因在细胞中得到了表达 ;同时DNA直方图也证实鸡贫血病毒的VP3基因确以凋亡的方式诱导细胞死亡。
- 申志发王宇哲孙军宗义强屈伸
- 关键词：贫血病毒VP3基因基因克隆H22细胞肝癌
- Apoptin在肿瘤治疗和肿瘤发生机制研究中的应用
- Apoptin 是由鸡贫血病毒 CAV(Chicken Anemia Virus)编码的小分子病毒蛋白,又称 VP3。研究发现,Apoptin 能够诱导多种不同组织来源的人肿瘤细胞凋亡;而在人正常二倍体细胞或原代细胞中,...
- 彭冬君尹燕华王宇哲孙军宗义强屈伸
- 关键词：肝脏肿瘤VP3基因
- 文献传递
- 极低密度脂蛋白受体在泡沫细胞形成中的作用地位被引量：1
- 2004年
- 为探讨极低密度脂蛋白受体在摄取富含甘油三酯的脂蛋白及泡沫细胞形成中的作用 ,在体外实验中 ,将极低密度脂蛋白、β极低密度脂蛋白及低密度脂蛋白分别与小鼠腹腔巨噬细胞孵育 2 4及 4 8h后 ,检测细胞内甘油三酯及总胆固醇的含量 ,油红O染色观察泡沫细胞的形成 ,半定量逆转录聚合酶链反应检测极低密度脂蛋白受体、LRP及极低密度脂蛋白受体的mRNA表达变化。结果发现 ,三种脂蛋白与巨噬细胞均能升高细胞内甘油三酯、总胆固醇含量 ;极低密度脂蛋白受体受极低密度脂蛋白、β极低密度脂蛋白的刺激表达上调 ,低密度脂蛋白受体表达下调 ,LRP表达略有上调。在稳定表达极低密度脂蛋白受体细胞中的实验表明 。
- 田俊屈伸王燕李映红王宇哲宗义强
- 关键词：分子生物学逆转录聚合酶链反应极低密度脂蛋白受体脂蛋白泡沫细胞
- 血管抑素体外对兔视网膜微血管内皮细胞增生的抑制被引量：4
- 2004年
- 目的 观察血管抑素对体外培养的兔视网膜微血管内皮细胞生长的抑制作用及对细胞外信号调节蛋白激酶1(ERK 1)活化的影响。方法 利用L Lysine耦联的Sepharose 4B亲和层析柱从血浆中分离和纯化血管抑素。原代培养兔视网膜微血管内皮细胞 ,MTT法检测不同浓度的血管抑素对其生长的抑制作用 ,Westernblot检测血管抑素对血管内皮细胞生长因子刺激的视网膜微血管内皮细胞ERK 1水平的影响。结果 血管抑素在体外能显著抑制视网膜微血管内皮细胞增生 ,其ED50 约为 16 0 μg/ml。VEGF刺激兔视网膜微血管内皮细胞后 ,ERK 1被迅速激活 ,而血管抑素能使其表达量降低 35 6 %。结论 血管抑素有望成为极有临床价值的防治视网膜新生血管形成的新药。
- 孙旭芳曾水清王宇哲李晓青胡燕华
- 关键词：血管抑素微血管内皮细胞视网膜体外ERK原代培养
- 人心肌肌钙蛋白I第2和第4个密码子同义突变对其在大肠埃希菌中表达的影响被引量：2
- 2006年
- 目的对人心肌肌钙蛋白I(cTnI)基因实行定点突变并进行原核表达,观察此突变对cTnI表达量的影响。方法利用RT-PCR方法从人心肌细胞的总RNA中克隆出编码人心肌肌钙蛋白Ⅰ的cDNA片段,设计引物将其第2和第4个密码子突变后插入原核表达载体形成重组体,并导入宿主菌BL21(DE3)中,经IPTG诱导表达,Ni-NTA树脂纯化后行Westernblot鉴定,观察突变对cTnI表达的影响。结果突变后的cTnI基因与对照组相比在大肠埃希菌中得到高效表达,经纯化可获得电泳单点纯的cTnI蛋白。结论成功克隆了cTnI基因,所设计的同义突变可促进cTnl在大肠埃希菌中的高效表达。
- 刘红梅罗德生屈伸王宇哲
- 关键词：肌钙蛋白I点突变基因表达
- 人心肌肌钙蛋白I基因的克隆及其在大肠埃希菌中的表达
- 2005年
- 目的从人心肌组织中克隆出心肌肌钙蛋白I(cardiac troponin I,cTnI)的cDNA,构建成表达重组体导入特定宿主菌,以期大量表达并获得高纯度的心肌肌钙蛋白I,为临床检测心肌损伤及预后提供诊断试剂材料。方法利用RT-PCR方法从人心肌细胞的总RNA中克隆出编码人心肌肌钙蛋白I的cDNA片段,将其插入原核表达载体形成重组体并导入宿主菌BL21(DE3)中,经异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导,表达出带6个组氨酸标签的融合蛋白,Ni-NTA树脂纯化后行Western blot进行鉴定。结果成功获取了人cTnI的cDNA,并在大肠埃希菌中高效表达。经Ni-NTA树脂纯化后获得的产物可与其特异性单克隆抗体反应。结论成功克隆了cTnI基因,构建的重组体能够在大肠埃希菌中高效表达,经纯化可获得电泳单点纯的cTnI蛋白。
- 刘红梅王宇哲屈伸周小芬周玮秦瑞芳
- 关键词：基因表达纯化
- 脱唾液酸糖蛋白受体介导的vp3基因靶向性治疗肝癌的实验研究被引量：2
- 2004年
- 目的利用肝细胞表面存在特异的脱唾液酸糖蛋白受体(asialoglycoprotein receptor,ASGPR),探索ASGPR介导的vp3基因肝细胞靶向性治疗肝癌的方法。方法将携带vp3基因的质粒通过多聚左旋赖氨酸(poly-L-lysine,PLL)与该受体的天然配体脱唾液酸粘蛋白(asialoorosomucoid,Asor)结合,获得Asor-PLL-vp3复合物;通过体外转染、放射性同位素标记检测和动物实验鉴定该复合物的肝细胞靶向性。结果 成功制备了较纯的可溶性的蛋白-核酸复合物;体内外实验结果表明Asor-PLL-vp3复合物具有良好的肝细胞靶向性。结论通过制备Asor-PLL-vp3复合物,利用ASGPR介导实现了vp3的肝细胞靶向性基因转移,证实了该复合物具有体内靶向性治疗肝癌的可行性。
- 孙军王宇哲屈伸彭冬君宗义强
- 关键词：VP3基因靶向性治疗肝癌
- TRAIL基因与鸡贫血病毒vp3基因体外协同效应的研究
- 2004年
- 目的研究TRAIL基因与鸡贫血病毒vp3基因在体外协同诱导肝癌细胞系HepG2凋亡的作用。方法从人外周血淋巴细胞总RNA中扩增出TRAIL基因的cDNA序列,构建含TRAIL基因的真核表达重组体,与鸡贫血病毒vp3基因在体外共转染HepG2细胞,研究其协同诱导HepG2细胞凋亡作用。结果 单独转染TRAIL基因与vp3基因均可诱导HepG2细胞凋亡;将两种基因共转染HepG2细胞,发现其凋亡率明显增加。结论TRAIL基因与vp3基因在诱导HepG2细胞凋亡中存在正协同效应。
- 彭冬君尹燕华王宇哲孙军宗义强屈伸
- 关键词：肝脏肿瘤凋亡TRAIL基因VP3基因
