王凌雪
- 作品数：17 被引量：38H指数：3
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- 相关领域：生物学医药卫生文化科学更多>>
- 靶向CCP22基因的干扰性RNA、含有该干扰性RNA的药物组合物及其应用
- 本发明涉及靶向CCP22(complement control protein 22，CCP22)的干扰性RNA(interfering RNA)、含有该干扰性RNA的药物组合物及其医药用途。
- 叶棋浓冯帆朱翠严景华韩聚强徐小洁王凌雪
- 文献传递
- 敲减人HPIP基因表达抑制细胞生长增殖被引量：3
- 2011年
- 为了探讨人造血相关的PBX相互作用蛋白质基因(HPIP)在肿瘤发生发展中的生物学作用,构建了HPIP小干扰RNA(siRNA)的真核表达载体,验证其敲减效果并观察其对细胞生长增殖的影响.根据人HPIP的cDNA序列,设计了含有小发卡结构的寡核苷酸序列,将其克隆到siRNA表达载体上;将重组质粒转染人胚肾293T细胞,通过实时定量RT-PCR及Western印迹分析检测HPIP基因的表达水平;结晶紫实验及流式细胞技术检测敲减HPIP基因表达对细胞生长和增殖的影响,软琼脂实验检测对肿瘤细胞非锚定依赖性生长的影响.结果显示,构建的siRNA能够有效抑制HPIP基因的表达;结晶紫实验与细胞周期分析实验显示,siRNA介导的HPIP表达沉默导致细胞生长增殖的显著抑制,软琼脂实验结果表明,稳定转染HPIP siRNA能够抑制肿瘤细胞的锚定非依赖性生长.上述结果初步表明,HPIP siRNA能明显抑制肿瘤细胞的生长与增殖,可能是一个潜在的肿瘤治疗新靶点.
- 徐小洁王凌雪范忠义丁丽华张浩杨智洪李杰之叶棋浓
- 关键词：小干扰RNA细胞生长细胞增殖
- 靶向HPIP基因的干扰性RNA、含有该干扰性RNA的药物组合物及其应用
- 本发明提供了靶向HPIP基因的干扰性RNA、含有该干扰性RNA的药物组合物及其应用。
- 叶棋浓徐小洁王凌雪王朝云程龙韩永健
- 抗HER2人源化单克隆抗体在乳酸克鲁维酵母中的高效表达及其产物分析被引量：3
- 2009年
- 目的:在乳酸克鲁维酵母中实现抗HER2人源化单克隆抗体的表达。方法:应用PCR扩增抗HER2人源化单克隆抗体的轻、重链基因,将扩增产物分别克隆入酵母表达载体pYES2/ochI和pPICZαA/ura3,经限制性内切酶以及DNA序列测定分析插入片段正确后,将重组质粒转化乳酸克鲁维酵母(Δura3)。转化子用半乳糖诱导,经间接ELISA和Western blot鉴定所表达产物的产量以及和抗原结合的活性。结果:构建了抗HER2人源化单克隆抗体轻、重链表达载体pYES2/ochI+αL和pPICZαA/ura3+αH,摇瓶培养表达产量可达(120±20)mg/L;经还原和非还原SDS-PAGE分析,抗体的轻、重链能够通过分子间二硫键正确装配;所表达抗体可与HER2胞外域特异性结合。结论:实现抗HER2人源化单克隆抗体在乳酸克鲁维酵母中的表达,具有与其抗原特异性结合的能力。
- 汪丽娜刘波巩新唱韶红王凌雪宋淼徐威吴军
- 关键词：乳酸克鲁维酵母高效分泌表达
- 毕赤酵母表达系统及其在基因工程抗体中的应用
- 2008年
- 毕赤酵母具有原核生物易于培养、繁殖快、便于基因工程操作和高密度发酵等特性,同时又具有真核生物中蛋白正确折叠所需的细胞内环境和糖链加工系统,还能将外源蛋白分泌到培养液中,利于纯化,因此,毕赤巴斯德酵母成为近年来发展最为迅速,应用也最为广泛的外源基因表达系统。本文主要介绍了毕赤酵母常见表达载体,提高表达量的对策,以及该表达系统在基因工程抗体方面的一些应用现状。
- 王凌雪张惟广
- 关键词：毕赤酵母基因工程抗体
- 人Egr-1启动子的克隆及其在肿瘤细胞中的辐射诱导反应被引量：3
- 2009年
- 目的:克隆人Egr-1基因的启动子,插入荧光素酶报告基因载体中,并检测电离辐射对其活性的影响。方法:采用PCR技术从人乳腺癌细胞系MCF-7基因组中扩增出Egr-1启动子,将其克隆到pGL3-basic载体中;将重组质粒转染人肿瘤细胞,测定Egr-1启动子在不同辐射条件下转录活性的改变。结果:成功构建了Egr-1启动子的荧光素酶报告基因;在不同剂量的γ射线照射后,Egr-1的启动子活性均明显高于未照射组;在同一剂量照射后48 h,Egr-1的启动子活性达峰值。结论:本实验构建的Egr-1启动子具有辐射激活的功能,为进一步研究放射-基因治疗奠定了基础。
- 徐小洁丁丽华王凌雪秦玺程龙蒋凯叶棋浓
- 关键词：EGR-1启动子启动子活性
- 人组蛋白H1基因的原核表达、纯化及其活性检测被引量：8
- 2011年
- 目的:克隆人组蛋白H1全长编码区基因,获得其原核表达产物,并对融合蛋白进行纯化以及活性检测。方法:采用PCR技术从人乳腺文库中扩增出人组蛋白H1全长编码区基因,将其克隆到pGEX-KG载体中,在大肠杆菌Rossate中表达后,利用GST-Sepharose 4B亲和珠对原核表达产物进行纯化,以SDS-PAGE和Western blot鉴定表达与纯化产物。结果:从人乳腺文库中扩增获得约650 bp的DNA片段,并成功克隆至pGEX-KG载体上,经测序与目的序列完全一致;在Rossate菌中诱导表达出相对分子质量(Mr)约为52 000的目的蛋白,经纯化后获得了纯度较高的重组蛋白GST-H1,激酶实验证明该蛋白活性良好。结论:成功获得了活性良好的重组蛋白GST-H1,为后续研究细胞周期蛋白调控奠定了实验基础。
- 徐小洁范忠义王凌雪张浩丁丽华杜楠叶棋浓
- 关键词：原核表达纯化
- 靶向HPIP基因的干扰性RNA、含有该干扰性RNA的药物组合物及其应用
- 本发明提供了靶向HPIP基因的干扰性RNA、含有该干扰性RNA的药物组合物及其应用。
- 叶棋浓徐小洁王凌雪王朝云程龙韩永健
- 文献传递
- 慢病毒介导RNA干扰HPIP蛋白抑制肿瘤细胞增殖被引量：2
- 2011年
- 目的:建立高效稳定的造血相关的PBX相互作用蛋白质(HPIP)小干扰RNA(siRNA)细胞导入方法,检测HPIP的表达对肿瘤细胞生长增殖的影响。方法:构建人HPIP慢病毒siRNA干扰载体,将重组质粒转染人胚肾293T细胞,通过实时定量RT-PCR及Western印迹分析检测Lenti-H1 HPIP siRNA的干扰效果;将Lenti-H1 HPIPsiRNA与4个包装质粒共同转染293T细胞,包装成慢病毒后,感染宫颈癌HeLa和肝癌HepG2细胞,经嘌呤霉素筛选2周后,收集细胞进行Western印迹检测;用结晶紫实验检测其对肿瘤细胞生长增殖的影响。结果:构建的Lenti-H1 HPIP siRNA能有效抑制HPIP的表达;结晶紫实验显示,慢病毒介导的HPIP siRNA导致细胞增殖的显著抑制。结论:慢病毒介导的HPIP敲减能明显抑制肿瘤细胞的增殖,HPIP可能是一个潜在的肿瘤治疗新靶点。
- 徐小洁范忠义韩永健张浩丁丽华韩聚强王凌雪杨智洪杜楠叶棋浓
- 关键词：RNA干扰慢病毒细胞增殖
- 抗HER2人源化单克隆抗体在毕赤酵母中的表达及其产物分析被引量：7
- 2008年
- 目的:研究抗人表皮生长因子受体2(HER2)人源化单克隆抗体能否在毕赤酵母中表达,并对表达产物进行结构分析和活性测定。方法:合成抗HER2人源化单克隆抗体的全基因,构建轻重链双表达盒表达载体,转入毕赤酵母中;通过表型筛选和诱导表达实验得到抗体表达工程菌,对表达产物进行分离纯化和活性测定。结果:表达产物存在于表达上清中,摇瓶表达水平达到53.7±2.9mg/L;毕赤酵母表达的抗体的轻重链能够自发通过二硫键装配成正确的抗体结构,其中重链发生了N-糖基化;酵母表达的抗HER2人源化单克隆抗体可以抑制高表达p185erbB2肿瘤细胞SKBR-3的生长,半数有效浓度为0.17mg/L。结论:实现了抗HER2人源化单克隆抗体在毕赤酵母中的表达,为毕赤酵母表达系统成为抗体等人用剂量较大的复杂型糖蛋白的大规模、低成本制备平台提供了基础。
- 王凌雪张惟广吴军
- 关键词：基因工程抗体毕赤酵母
