目的研究与单纯疱疹病毒的糖蛋白D竞争结合单纯疱疹病毒进入介导物(herpes virus entry mediator,HVEM)的淋巴毒素类似物(homologous to lymphotoxins,exhibits inducible expression,and competes with HSV glycoprotein D for HVEM,a receptor expressed by T lymphocytes,LIGHT)基因和单纯疱疹病毒胸苷激酶(herpes simplex virus thymidine kinase,HSV-TK)基因共转染的骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)在体外的抗肿瘤免疫功能。方法将p IRES2-LIGHT基因和HSV-TK-EGFP基因共转染小鼠骨髓间充质干细胞(MSCs/LT组),以转染空载体(MSCs/mock组)和转染HSV-TK-EGFP基因(MSCs/T组)的骨髓间充质干细胞作对照。流式细胞仪检测LIGHT分子和HSV-TK-EGFP分子在稳定转染的骨髓间充质干细胞上的表达。MTT法和ELISA法检测3组骨髓间充质干细胞在体外对T淋巴细胞的增殖以及其分泌细胞因子白介素-2(interleukin-2,IL-2)、干扰素-γ(interferon-gamma,IFN-γ)和IL-10的影响,并进一步观察3组细胞在体外向乳腺癌细胞株TUBO的迁移情况。结果流式细胞仪检测发现,MSCs/LT能稳定高表达LIGHT分子和HSV-TK-EGFP分子,在加入20μmol/L更昔洛韦诱导3天后99.6%细胞发生凋亡。体外细胞共培养实验表明,与MSCs/mock和MSCs/T组比较,MSCs/LT组骨髓间充质干细胞能显著地促进抗人CD3单抗刺激的T细胞增殖(P<0.05);同时能明显促进T细胞分泌IL-2、IFN-γ和IL-10(均P<0.05)。体外迁移实验结果表明,MSCs/LT、MSCs/mock和MSCs/T组细胞均有向乳腺癌细胞株迁移的特性,3组间差异无统计学意义(P>0.05)。结论共转染人LIGHT和HSV-TK-EGFP基因的骨髓间充质干细胞稳定高表达LIGHT和HSV-TK-EGFP分子,通过促进T淋巴细胞增殖和IL-2、IFN-γ和IL-10等细胞因子的分泌而发挥抗肿瘤免疫功能。
目的研究与单纯疱疹病毒的糖蛋白D竞争结合单纯疱疹病毒进入介导物(herpes virus entry mediator,HVEM)的淋巴毒素类似物(homologous to lymphotoxins,exhibits inducible expression,and competes with HSV glycoprotein D for HVEM,a receptor expressed by T lymphocytes,LIGHT)基因和单纯疱疹病毒胸苷激酶(herpes simplex virus thymidine kinase,HSV-TK)基因共转染的骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)在体内的抗肿瘤免疫功能。方法将pIRES2-LIGHT基因和HSV-TK-EGFP基因共转染小鼠骨髓间充质干细胞(MSCs/LT组),以转染空载体和转染HSV-TK-EGFP基因的骨髓间充质干细胞作对照。流式细胞仪检测LIGHT分子和HSV-TK-EGFP分子在稳定转染的骨髓间充质干细胞上的表达。体内迁移实验观察MSCs/LT在小鼠体内迁移情况。观察更昔洛韦注射前后MSCs/LT对荷瘤小鼠体内肿瘤的治疗作用。ELISA法检测小鼠肿瘤组织中IFN-γ,IL-2和IL-10的水平。结果流式细胞仪检测发现,MSCs/LT能稳定高表达LIGHT分子。MSCs/LT有特异地向肿瘤组织趋化的特性。MSCs/LT和MSCs/T有较好的抑制肿瘤生长的能力,但在更昔洛韦诱导后,MSCs/LT的抗肿瘤效应下降甚至消失。同时,MSCs/LT可促使T细胞进入肿瘤组织,并促进T细胞分泌IL-2、IFN-γ,抑制IL-10分泌(P<0.05)。结论共转染人LIGHT和HSV-TK-EGFP基因的骨髓间充质干细胞能稳定高表达LIGHT分子,能特异性地向荷瘤小鼠体内肿瘤组织趋化并抑制肿瘤的生长,这种体内抗肿瘤功能可能与促进T淋巴细胞IL-2、IFN-γ等细胞因子的分泌,改善局部免疫抑制环境有关。
