焦健
- 作品数：9 被引量：52H指数：5
- 供职机构：中国农业科学院郑州果树研究所更多>>
- 发文基金：国家现代农业产业技术体系建设项目农业部作物种质资源保护项目国家葡萄产业技术体系建设项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学轻工技术与工程更多>>
- 中国野生种葡萄mybA转录因子SNP特征分析被引量：9
- 2013年
- 以中国野生葡萄14个种为材料,对控制花色苷合成的mybA转录因子进行克隆和序列分析,获得VvmybA1和VlmybA2两个转录因子的全长基因序列,共检测到121个SNP,表现出丰富的遗传多样性。3种中性检测方法比较序列变异模式,结果表明,中国野生种葡萄VvmybA1和VlmybA2基因没有偏离中性模型,反映出基因漂移和选择性中性突变之间的平衡。不同野生种材料的mybA基因结构存在很高的同源相似性。但是在启动子区、内含子区以及第3个外显子区存在不同程度碱基的缺失、插入和替换,而且野生种葡萄mybA基因存在一些特有序列或突变,这些突变可以作为分子标记区分不同的野生种材料。通过基因结构比对和系统进化树分析,可将野生种葡萄细分为5个类群。初步推测桦叶葡萄和变叶葡萄进化地位较为原始。
- 焦健刘崇怀樊秀彩张颖孙海生姜建福李民
- 关键词：中国野生葡萄花色苷SNP
- 不同株系赤霞珠葡萄表皮酵母菌的多样性研究
- 通过采用富集分离方法，从3 个赤霞珠株系(R5、ISV-FV5 和169)的葡萄果实表皮共分离得到酵母菌36 株.利用26S rDNA 的D1/D2 和 5.8S-ITS 区序列分析并结合形态学特征对这些菌株进行了多样性...
- 张俊杰杨旭焦健陈锦永何培新迟雷张文叶刘崇怀
- 关键词：赤霞珠酵母菌
- 山葡萄及其杂种Myb相关基因的基因型及VvmybA1片段的分析被引量：4
- 2014年
- 【目的】确定不同类型山葡萄及其杂种的Myb相关基因的基因型,分析其VvmybA1基因片段的差异,探讨山葡萄之间的遗传差异。【方法】以10个单性花山葡萄株系(品种)、3个两性花山葡萄株系(品种)、7个山欧杂种品种为材料,以欧美杂种‘巨峰’及欧亚种品种‘黑比诺’作参照,对调控花色苷合成的多个Myb转录因子的基因型进行鉴定,通过克隆VvmybA1基因片段并进行序列比对,对不同材料的VvmybA1基因片段进行进化树的构建。【结果】山葡萄中只有VvmybA1基因;欧亚种‘黑比诺’、欧美杂种‘巨峰’和山欧杂种‘北玫’和‘北方’中有VvmybA1a基因;山欧杂种‘北红’中有VvmybA1和VvmybA3基因;山欧杂种‘北醇’、‘北玫’、‘北方’和‘公酿一号’中有VvmybA1、VvmybA2和VvmybA3基因。山欧杂种‘左红一’和‘左优红’中存在VvmybA1和VlMybA2基因。山葡萄及山欧杂种VvmybA1基因片段的序列对比显示,在该基因的第3个外显子区域不存在碱基的插入和缺失但存在较多的碱基替换。【结论】不同类型山葡萄在Myb相关基因的基因型上具有一致性,都只有VvmybA1基因,并且VvmybA1基因片段序列在第3个外显子区域存在较大差异,表现出丰富的遗传多样性。两性花山葡萄株系‘双庆’应该是山葡萄内部变异产生的。不同的山欧杂种在Myb相关基因的基因型上具有较大差异。
- 付晓伟焦健刘崇怀樊秀彩姜建福张颖
- 关键词：山葡萄基因型
- 葡萄初级核心种质资源MybA基因型分析
- 2016年
- 探究MybA类基因在不同类型葡萄品种中的分布,可为葡萄品种鉴定,以及有色葡萄育种的亲本选择提供依据。本研究以欧亚种、欧美杂种、法美杂种、山欧杂种以及美洲种在内的118个葡萄初级核心种质为材料,对其MybA基因型进行分析。结果表明:欧亚种及其杂种普遍具有VvmybA1基因的等位基因VvmybA1a,仅10个欧亚种及其杂种品种中没有检测到VvmybA1a基因;欧亚种、欧美杂种以及法美杂种中普遍同时具有VvmybA1、VvmybA2和VvmybA3基因,仅少数品种未检测到VvmybA2或VvmybA3基因;山欧杂种中北玫、公酿1号和熊岳白葡萄同时具有VvmybA1、VvmybA2和VvmybA3基因,北醇和北红中仅检测到VvmybA1和VvmybA3基因;仅在具有美洲种血缘的葡萄品种中检测到VlmybA2基因,而5个认为是美洲种的品种未检测到VlmybA2基因,且检测到了欧亚种特有的VvmybA1a等位基因,推测它们为含美洲种血缘较多的欧美杂种,而非纯美洲种。
- 孙磊焦健樊秀彩姜建福张颖刘崇怀
- 关键词：葡萄初级核心种质基因型分析
- 中国野生种葡萄及种间杂种VvmybA1基因型和表达分析被引量：6
- 2013年
- 【目的】检测中国野生种葡萄以及山欧杂交品种VvmybA1基因型,并对不同材料VvmybA1基因序列进行比对分析,通过对山欧杂种VvmybA1的基因型和表达分析,揭示白色杂交品种‘熊岳白葡萄’果皮无花色苷合成的分子机理。【方法】设计特异性引物,在DNA水平上利用分子克隆手段和绝对荧光定量PCR方法,检测葡萄属的不同样品VvmybA1基因型。采用相对荧光定量PCR手段,对山欧杂交品种果实转色过程中VvmybA1和UFGT的表达量进行分析。【结果】①检测的中国野生种葡萄材料不存在VvmybA1a等位基因;②与欧亚种葡萄相比,中国野生葡萄VvmybA1基因在启动子、内含子以及第三个外显子区域存在不同程度碱基的缺失、插入和替换,表现出丰富的遗传多样性。而且许多野生种葡萄VvmybA1基因的内含子、外显子和启动子区域存在一些特有序列或突变,这些位点可筛选作为鉴别葡萄种和品种的分子标记;③在‘公酿1号’、‘北红’、‘熊岳白葡萄’等山欧杂交葡萄品种以及分类地位未定的‘宿晓红’葡萄中检测到VvmybA1a等位基因,并且‘熊岳白葡萄’为VvmybA1a纯合类型;④RT-PCR分析结果表明,在葡萄果皮转色过程中,‘公酿1号’葡萄果皮VvmybA1和UFGT的表达量增加,然而在‘熊岳白葡萄’果实成熟期未检测到VvmybA1和UFGT的表达。【结论】证明VvmybA1a等位基因是欧亚种葡萄以及其杂交种独有的基因型,不存在于中国野生种葡萄中,推测‘宿晓红’葡萄具有欧亚种葡萄血缘;葡萄属不同种的VvmybA1基因序列比对分析揭示,山欧杂交品种‘熊岳白葡萄’果皮不能合成花色苷是由于VvmybA1a纯合,VvmybA1不表达。
- 焦健刘崇怀樊秀彩张颖孙海生姜建福李民
- 关键词：中国野生葡萄花色苷基因型果皮颜色
- 不同株系赤霞珠葡萄表皮酵母菌的多样性研究被引量：7
- 2017年
- 通过采用富集分离方法,从3个赤霞珠株系(R5、ISV-FV5和169)的葡萄果实表皮共分离得到酵母菌36株。利用26S rDNA的D1/D2和5.8S-ITS区序列分析并结合形态学特征对这些菌株进行了多样性研究。共鉴定出3个酵母菌属的4个已知种群,分别为Cryptococcus magnus、Cryptococcus uzbekistanensis、Rhodosporidiobolus ruineniae和Hanseniaspora uvarum。Hanseniaspora uvarum为株系R5所特有,Cryptococcus uzbekistanensis和Rhodosporidiobolus ruineniae为株系ISV-FV5所特有,而Cryptococcus magnus同时存在于株系ISV-FV5和169上。结果表明,不同株系的赤霞珠葡萄表皮蕴含着多种类型的酵母菌资源,而且尽管其生长的客观条件是一致的,但因为株系的不同其所含酵母菌种群的组成上也存在明显的差异。
- 张俊杰杨旭焦健陈锦永何培新迟雷张文叶刘崇怀
- 关键词：赤霞珠酵母菌
- 褪黑素UPLC-MS/MS检测方法优化及其对干旱和盐胁迫下葡萄幼苗褪黑素含量的分析被引量：5
- 2017年
- 褪黑素是一种吲哚类激素,对植物的生理活动和抗逆性起到显著的调节作用。该研究建立了褪黑素超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)检测方法,并分别对干旱胁迫和盐胁迫条件下‘赤霞珠’葡萄幼苗根系和叶片中褪黑素含量的变化进行分析,以探讨葡萄中褪黑素的生理功能及其响应逆境胁迫的调控机制。结果显示:(1)褪黑素UPLC-MS/MS检测方法的优化条件为:采用超声波破碎法提取葡萄组织中的褪黑素;色谱条件为:色谱柱为Agilent Eclipse XDB-C18(1.8μm,3.0×50mm),流动相A为0.1%(v/v)的甲酸水溶液,流动相B为纯甲醇,梯度洗脱,柱温42℃,进样量1μL,流速0.2mL/min;质谱条件为:电喷雾正离子模式(ESI+)电离,多反应监测模式(MRM)检测,检测离子对为m/z 233→174。该方法测量结果的相对标准偏差(RSD)低于7%,最低检测限(LOD)和最低定量限(LOQ)分别为0.04ng/mL和0.12ng/mL。(2)干旱胁迫和盐胁迫下葡萄幼苗根系和叶片中褪黑素含量较对照组均显著增加,且胁迫程度越强增幅越大;用120mmol/L的NaCl溶液处理幼苗以后,幼苗根系和叶片中褪黑素含量分别达到627.25和3 220.42pg/g,大约都是相应对照组幼苗根系和叶片中褪黑素含量的7倍;10%PEG6000处理植株后其根系和叶片中褪黑素含量也远远高于对照组。研究表明,超高效液相色谱串联质谱法可作为一种准确、高效、简便易操作且具有较高的灵敏度和精确度的植物内源褪黑素含量检测方法;葡萄中褪黑素的合成是其对逆境胁迫的一种应激响应,暗示着褪黑素在缓解逆境胁迫方面具有重要作用。
- 吴艳迪焦健姜建福张颖樊秀彩孙海生刘崇怀
- 关键词：葡萄褪黑素超高效液相色谱-串联质谱干旱胁迫盐胁迫
- 中国野生葡萄叶绿体分离及叶绿体DNA提取的研究被引量：11
- 2016年
- 以中国野生刺葡萄、山葡萄、桑叶葡萄和东南葡萄的成熟叶片为材料,比较柱式植物叶绿体DNAout试剂盒和改良的高盐-低pH法分离叶绿体及提取cpDNA效果。结果显示:(1)2种方法均分离得到了中国野生葡萄的叶绿体,但与柱式植物叶绿体DNAout试剂盒相比,改良的高盐-低pH法得到的叶绿体浓度高、杂质少,更适合中国野生葡萄叶绿体分离。(2)柱式植物叶绿体DNAout试剂盒提取的cpDNA,其OD260/OD280在1.28~1.36之间,质量浓度为4.2~7.8ng·μL^(-1),质量低,不能满足后续测序要求;而改良的高盐-低pH法提取的cpDNA,其OD260/OD280值在1.84~1.90之间,质量浓度为2 514.4~4 133.7ng·μL^(-1),质量高,纯度好,能满足后续测序要求。研究表明,改良的高盐-低pH法能简便、快速获得中国野生葡萄完整叶绿体及高质量cpDNA,并且提取的cpDNA可满足后续测序要求,为葡萄属植物叶绿体基因组的深入研究奠定了基础。
- 谢海坤焦健樊秀彩张颖姜建福孙海生刘崇怀
- 关键词：中国野生葡萄
- 基于高通量测序组装‘赤霞珠’叶绿体基因组及其特征分析被引量：15
- 2017年
- 【目的】以欧亚种葡萄‘赤霞珠’(Cabernet Sauvignon)为试材,建立适于葡萄属(Vitis)植物完整叶绿体基因组组装及其特征分析的方法,为研究葡萄属植物的进化和系统发育提供方法指导。【方法】采用Illumina Hi Seq PE150双末端测序策略对其全基因组DNA建库测序,建库类型为350 bp DNA小片段文库,测序深度为10倍。以已发表的拟南芥(Arabidopsis thaliana)和欧亚种葡萄‘黑比诺’(Pinot Noir)的叶绿体基因组序列为参考,通过BLASTN比对提取葡萄叶绿体基因组序列,并用SOAPdenovo软件进行组装,得到‘赤霞珠’完整的叶绿体基因组并对其进行特征分析。【结果】基于高通量Illumina测序,共获得5.2 G的全基因组原始数据,其中,葡萄叶绿体基因组序列为0.42 G,约占全基因组序列的8%。用抽提出来的葡萄叶绿体基因组序列成功组装出‘赤霞珠’完整叶绿体基因组。特征分析表明,叶绿体基因组序列全长160 676 bp,包括大单拷贝区(large single copy,LSC)、小单拷贝区(small single copy,SSC)和2个反向重复序列(inverted repeat,IRA和IRB),长度分别为89 134、19 072和26 235 bp,具有典型被子植物叶绿体基因组环状四分体结构;共注释得到154个基因,包括99个蛋白编码基因、47个t RNA基因和8个r RNA基因;其叶绿体基因组的GC含量为37.43%;共检测到37个串联重复序列(tandem repeat sequence)和53个散在重复序列(dispersed repeats),其中,绝大部分串联重复序列的长度为11—42 bp,占叶绿体基因组序列的0.83%,而散在重复序列占叶绿体基因组序列的5.33%;此外,还检测到50个简单重复序列(simple sequence repeats,SSR)位点,大部分的SSRs均由A或T组成,同时SSRs在‘赤霞珠’叶绿体基因组上的分布是不均匀的,LSC区段含有39个SSRs,而SSC区段和IR区段分别仅有7个和4个SSRs;与蛋白编码基因对应的密码子偏好使用A/T碱基,并且编码亮氨酸(L)的密码子使用频率最高,而编码半
- 谢海坤焦健樊秀彩张颖姜建福孙海生刘崇怀
- 关键词：叶绿体基因组高通量测序系统发育分析
