目的:建立一条新的毕赤酵母表达乙肝表面抗原(Hepatitis B antigen,HBsAg)柱层析纯化方法,保持HBsAg结构完整性和提高免疫原性。方法:毕赤酵母发酵料液经过菌体破碎、聚乙二醇沉淀、疏水层析、超滤和凝胶分子筛精纯,收集HBsAg合格样品液适当稀释后加入铝佐剂吸附,制成乙肝疫苗半成品免疫BALB/c小鼠。结果:纯化产物经SDS-PAGE银染鉴定得单一条带,分子量在23kD左右,凝胶成像软件分析纯度超过95%;该纯化方法得到的HBsAg颗粒电镜观察得平均直径为22nm病毒样颗粒,结构较均一完整;自制疫苗免疫小鼠后,其血清抗体水平高于葛兰素史克生产的Engerix-B(安在时),存在显著性差异(P<0.05)。结论:通过该方法纯化的HBsAg结构完整性良好,疫苗免疫效果优于酵母表达的Engerix-B,纯化路径简单高效,易于放大用于工业化生产。
