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基因Ⅶ型鹅副粘病毒NA-1株全基因组克隆及演化特点: 将本实验室分离保存的NA-1株鹅副粘病毒经SPF鸡胚增殖,收集鸡胚尿囊液进行病毒纯化,提取病毒基因组RNA。参考GenBank已收录的鹅副粘病毒ZJ1株基因组序列,设计了8对特异性引物,RT-PCR法分别特异性的扩增出病...; 丁壮徐明毕玉海李志杰常爽黄海楠宋子运尹仁福杜眉; 关键词：新城疫病毒全基因组; 文献传递

基因Ⅶ型鹅副粘病毒NA-1株全基因组的克隆及特性分析: 自1997年以来,我国江苏、浙江、上海等许多省市鹅群中相继暴发一种急性高度致死性传染病,给养鹅业带来巨大的经济损失.经病原学及分子生物学鉴定,其病原是新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV),...; 徐明丁壮毕玉海李志杰常爽黄海楠宋子运尹仁福杜眉; 关键词：鹅副粘病毒全基因组基因克隆; 文献传递

基因打靶及其在体细胞和动物克隆中的应用: 基因打靶技术是一项快速发展的分子生物学技术,它是利用外源DNA与受体细胞染色体DNA上的同源序列之间发生重组,并整合在预定位点上,从而改变细胞遗传特性的方法.到目前为止,基因打靶对动物基因组的遗传修改只常用于小鼠细胞因为...; 杜眉叶克应丁壮; 关键词：基因打靶同源重组体细胞动物克隆分子生物学; 文献传递

基因Ⅶ型鹅副粘病毒NA-1株全基因组克隆及演化特点: 将本实验室分离保存的NA-1株鹅副粘病毒经SPF鸡胚增殖,收集鸡胚尿囊液进行病毒纯化,提取病毒基因组RNA。参考GenBank已收录的鹅副粘病毒ZJ1株基因组序列,设计了8对特异性引物,RT-PCR法分别特异性的扩增出病...; 丁壮徐明毕玉海李志杰常爽黄海楠宋子运尹仁福杜眉; 关键词：副粘病毒新城疫病毒全基因组核苷酸序列; 文献传递

鹅细小病毒主要免疫原性蛋白VP3基因遗传变异及其原核表达被引量：3: 2007年; 根据鹅细小病毒(GPV)B株全基因序列,设计并合成了1对特异性引物,采用PCR技术对GPVGD-01株的VP3基因进行扩增,将目的基因克隆到pGEM○R-T后测序,分析了GPV GD-01株VP3基因的遗传变异情况,并进行原核表达。结果表明,GPV GD-01株VP3基因全长1605bp,编码534个氨基酸(DQ665790),与已发表的GPV、番鸭细小病毒(MDPV)的核苷酸、氨基酸同源性分别为96.15%、80.1%,97.78%、89.13%,说明GPV VP3基因具有较高的遗传稳定性。结合亲水性、表面极性、抗原位点分析比较GPV、MDPV VP3基因,为研究GPV和MDPV感染谱差异的分子机制提供了一定的理论基础。原核表达显示,VP3蛋白的最高表达量占整个菌体蛋白含量的29.9%,经表达条件优化可产生大量可溶性VP3表达蛋白。SDS-PAGE与Western-blot分析显示,表达的VP3蛋白的相对分子质量约60000,并能与鼠抗GPV阳性血清反应,证明具有一定的反应原性,为进一步研制基因工程疫苗及诊断制品奠定了基础。; 毕玉海丁壮徐明李志杰常爽黄海楠宋子运尹仁福杜眉; 关键词：鹅细小病毒 VP3基因原核表达

鹅细小病毒GD-01株主要免疫原性蛋白VP3基因遗传变异研究及原核表达载体的构建: 本文根据ZadoriZ等[1]发表的鹅细小病毒(GPV)B株全基因序列,设计并合成了一对特异性引物,采用PCR技术对GPVGD-01株的VP3基因进行扩增,将目的基因克隆到pGEM(R)-T后测序.经序列分析、同源性比较...; 毕玉海徐明李志杰常爽黄海楠宋子运尹仁福杜眉丁壮; 关键词：鹅细小病毒 VP3基因原核表达载体; 文献传递

“拯救”NA-1株鹅源副粘病毒辅助质粒的构建及鉴定: 将本实验室保存的NA-1株鹅源副粘病毒(GPMV)经SPF鸡胚增殖,收集尿囊液进行病毒纯化,提取病毒基因组RNA。参考GenBank已收录的ZJ1株GPMV基因组序列,设计了4对特异性引物,利用RT-PCR法分别特异性的...; 宋子运丁壮常爽马爱霞杜眉徐明; 关键词：鹅源副粘病毒反向遗传操作技术间接免疫荧光; 文献传递

鹅源副粘病毒NA-1株F基因定点突变及其在Bac-to-Bac系统中的表达: 根据已发表的鹅源副粘病毒(GPMV)NA-1株F基因序列设计两对引物,引物中含有突变位点,分三次扩增F基因片段,从而得到目的基因片段,再利用酶切位点将基因片段与转座载体pFastBacⅠ连接,获得重组质粒,命名为pFas...; 杜眉丁壮徐明宋子运毕玉海尹仁福; 关键词：鹅源副粘病毒 F基因定点突变; 文献传递

“拯救”NA-1株鹅源副黏病毒辅助质粒的构建及鉴定被引量：4: 2008年; 将本实验室保存的NA-1株鹅源副黏病毒(GPMV)经SPF鸡胚增殖,收集尿囊液进行病毒纯化,提取病毒基因组RNA。参考GenBank已收录的ZJ1株GPMV基因组序列,设计了4对特异性引物,利用RT-PCR法分别特异性的扩增出病毒NP、P和L基因片段,并将目的基因片段消化、回收纯化,克隆pCI-neo表达载体,转化大肠杆菌DH5α,小提质粒选取阳性克隆酶切、PCR鉴定并进行序列测定,结果表明NP、P和L基因正确克隆到pCI-neo表达载体中,并分别命名为pCI-NP、pCI-P和pCI-L。将构建好的pCI-NP、pCI-P和pCI-L重组质粒单独转染Vero细胞,在荧光显微镜下观察到特异绿色荧光,表明NP、P和L蛋白得到成功表达。; 宋子运丁壮徐明马爱霞杜眉常爽毕玉海尹仁福; 关键词：鹅源副黏病毒反向遗传操作技术间接免疫荧光

鹅源副黏病毒NA-1株F基因定点突变及其在Bac-to-Bac系统中的表达: 2008年; 根据已发表的鹅源副黏病毒(GPMV)NA-1株F基因序列设计2对引物,引物中含有突变位点,分3次扩增F基因片段,从而得到目的基因片段,再利用酶切位点将基因片段与转座载体pFastBac 1连接,获得重组质粒,命名为pFastBac 1-F′,从而使改造后的F′基因编码的氨基酸裂解位点为112Gly-Arg-Gln-Gly-Arg-Leu117。并将pFastBac 1-F′进行测序鉴定后转化到DH10Bac宿主菌,将目的基因定向插入到Bacmid质粒中,经筛选获得的重组Bacmid F′转染Sf 9昆虫细胞,并进行表达检测。结果,表达产物经SDS-PAGE和Western-blot检测获得蛋白特异条带,相当分子量约63 kD。; 杜眉丁壮徐明宋子运毕玉海尹仁福; 关键词：鹅源副黏病毒 F基因定点突变

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杜眉