朱照辉 作品数:11 被引量:17 H指数:2 供职机构: 江苏大学附属人民医院 更多>> 发文基金: 镇江市科技支撑计划(社会发展)项目 江苏省医学重点人才培养基金 江苏省自然科学基金 更多>> 相关领域: 医药卫生 生物学 更多>>
黏着斑激酶相关性鸟苷三磷酸酶调节因子基因启动子甲基化特异性PCR法的建立与初步应用 被引量:1 2009年 目的建立甲基化特异性PCR(MSP)技术检测黏着斑激酶相关性鸟苷三磷酸酶调节因子(GRAF)基因启动子甲基化。方法设计针对GRAF基因启动子的MSP引物,建立MSP检测体系,对不同DNA模板进行检测,评价方法的特异性、重复性和灵敏度;对10例急性髓系白血病(AML)标本进行检测。结果建立的MSP方法仅能扩增出甲基化阳性模板,不能扩增出未甲基化阳性模板和未硫化处理的DNA模板;检测不同稀释度的甲基化阳性模板,其最大灵敏度可达2%;在不同时间进行MSP检测的结果均一致;对10例AML患者的初步检测发现7例存在着GRAF基因启动子甲基化。结论成功建立了检测GRAF基因启动子甲基化的MSP方法,有良好的特异性、灵敏度和重复性,可用于临床AML标本的批量检测。 钱震 林江 钱军 姚冬明 王雅丽 韩兰秀 朱照辉 肖高飞关键词:甲基化特异性PCR 甲基化 EvaGreen实时定量PCR检测急性髓系白血病GRAF基因表达 被引量:1 2010年 目的 研究急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)中粘着斑激酶相关性鸟苷三磷酸酶调节因子(GTPase regulator associated with the focal adhesion kinase,GRAF)基因的表达及其临床意义.方法 建立EvaGreen染料法实时定量聚合酶链反应(real-time quantitative PCR,RQ-PCR),对71例AML患者和21例良性血液病患者中GRAF转录本水平进行检测,分析其临床相关性.结果 所建立的EvaGreen RQ-PCR方法具有良好的特异性、重复性,敏感度达102拷贝/μL.AML患者中GRAF转录本水平(0.01%~169.75%,中位3.82%)较对照组(14.49%~126.85%,中位56.04%)显著降低(P〈0.05),GRAF基因表达量与患者性别、年龄、外周血白细胞计数、血红蛋白、血小板计数、FAB亚型、染色体核型分组均无相关性(P〉0.05).结论 AML患者中GRAF基因表达下调,可能与其发病有关. 钱震 林江 钱军 姚冬明 王雅丽 韩兰秀 朱照辉 肖高飞关键词:急性髓系白血病 实时定量聚合酶链反应 骨髓增生异常综合征中PRAME基因甲基化的研究 <正>黑色素瘤优先表达抗原(preferentially expressed antigen of melanoma,PRAME)属于一种肿瘤/睾丸抗原,在包括急性髓系白血病(AML)和慢性粒细胞白血病(CML)在内的多... 钱军 朱照辉 林江 姚冬明 李云 杨静 王翠竹文献传递 慢性髓系白血病中prame基因转录本的定量研究 被引量:1 2010年 本研究旨在分析慢性髓系白血病(CML)患者中黑色素瘤优先表达抗原(prame)的基因转录本表达状况及其临床意义。用实时定量PCR(RQ-PCR)方法对30例CML患者和15例缺铁性贫血(IDA)患者骨髓单个核细胞中prame基因转录本水平进行检测。结果表明:15例缺铁性贫血患者骨髓单个核细胞(BMMNC)中prame转录本水平为0%-1.46%(中位0.19%),30例CML患者中BMMNC中prame基因转录本水平为0%-772.25%(中位8.28%),二组之间具有显著性差异(p<0.001)。CML患者中prame基因转录本含量与bcr-abl融合基因转录本水平显著相关(r=0.708,p<0.001);6例CML加速期(AP)和急变期(BC)患者中prame基因转录本水平明显高于24例慢性期(CP)患者(p=0.007)。动态检测2例CML患者在不同病程中prame基因转录本水平变化显示,AP及BC时prame基因转录本水平增高,经治疗后恢复至CP时prame基因转录本水平降低,与bcr-abl转录本变化趋势一致。结论:CML患者中prame基因转录本表达水平增高,且与病情发展相关,可用于病情监测。 朱照辉 钱军 林江 钱震 姚冬明 王雅丽 陈芹 肖高飞关键词:慢性粒细胞白血病 实时定量PCR 四种基因甲基化特异性PCR引物设计探讨 2009年 目的:对甲基化特异性PCR(methylation-specific PCR,MSP)引物设计进行探讨。方法:使用Methyl PrimerExpress Software Version 1.0软件、"methprimer"和"MSPprimer"的网上在线软件设计的引物以及参照国外文献的MSP引物对CCAAT/增强子结合蛋白ζ(CEBPζ),CCAAT/增强子结合蛋白δ(CEBPδ)、脆性组氨酸三联体(FHIT)和死亡相关蛋白激酶(DAPK)基因启动子进行MSP扩增,然后对其MSP产物进行测序验证以比较MSP引物设计的可靠性。结果:对于CEBPζ,CEBPδ,FHIT和DAPK启动子基因所设计的MSP引物经MSP后均获得了所需要的目的条带,但经测序鉴定Methyl Primer Express和methprimer设计的CEBPδ,CEBPζ-1的MSP扩增产物为假阳性产物,而MSPprimer设计的CEBPζ-2的MSP产物为正确序列。结论:MSP引物设计的质量是保证MSP扩增成功的关键因素。 林江 姚冬明 钱军 许文荣 钱震 朱照辉 陈芹 王雅丽 肖高飞关键词:甲基化特异性PCR 引物 急性髓系白血病PRAME基因转录本的定量研究 被引量:1 2010年 目的探讨黑色素瘤优先表达抗原(preferentially expressed antigen of melanoma,PRAME)基因转录本在急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)患者中的表达和临床意义。方法建立荧光染料EvaGreen实时定量聚合酶链反应(real—time quantitative PCR,RQ~PCR)对56例初诊AMI,患者和20例对照的骨髓单个核细胞标本中PRAME转录本进行检测,分析其临床相关性。结果PRAME转录本含量在对照组和AMI,患者中分别为0~1.46%(中位0.18%)和0~21618.09%(中位9.79%)(P〈0.01);FAB亚型中M1、M2、M3和M4患者中PRAME转录本含量较对照组明显增高,而M5患者与对照组差异无统计学意义。PRAME转录本含量与染色体预后分组显著负相关(r=-0.438,P=0.001),低危组患者中PRAME转录本含量显著高于中危组和高危组患者。AML—M2患者中t(8;21)易位阳性者PRAME转录本含量(135.06%~21618.09%,中位2201.88%)明显高于无t(8;21)易位者(0.14%~1696.30%,中位17.97%)(P=0.002)。对1例AML患者不同阶段的标本检测发现诱导缓解后PRAME转录本明显下降,复发时又明显升高。结论PRAME转录本在AML患者中高表达,是患者预后良好的一个标记,可用于AML患者的随访监测。 朱照辉 钱军 林江 姚冬明 钱震 王雅丽 陈芹 韩兰秀 肖高飞关键词:实时定量聚合酶链反应 急性髓系白血病 骨髓增生异常综合征患者中死亡相关蛋白激酶基因的启动子甲基化改变 死亡相关蛋白激酶(death-associated protein kinase,DAPK)是一种160kDa、钙调蛋白依赖的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,它是一种正性细胞凋亡调节因子、通过多种途径诱导肿瘤细胞凋亡。动物模型研... 钱军 王雅丽 姚冬明 林江 韩兰秀 钱震 朱照辉 杨小飞 吴朝阳关键词:DAPK基因 骨髓增生异常综合征 DNA甲基化 文献传递 EvaGreen染料法实时定量PCR检测急性髓系白血病PRAME基因转录本 2009年 目的:采用实时定量聚合酶链反应(RQ-PCR)法检测急性髓系白血病(AML)中黑色素瘤优先表达抗原(PRAME)基因转录本,初步评价其在AML中的临床意义。方法:设计PRAME基因引物,建立扩增PRAME基因转录本的EvaGreen染料法RQ-PCR法,对PRAME转录本克隆质粒进行扩增,评价其特异性、重复性和灵敏性。并对10例AML患者的骨髓单个核细胞标本进行初步检测。结果:所建立的EvaGreen RQ-PCR法具有良好的特异性,最低可检测到10个拷贝/μl的阳性模板,但其重复性差,而10^8~10^2拷贝/μl阳模的重复性良好。10例初诊AML患者PRAME转录本绝对含量为4.91×10^2~8.07×10^5拷贝/50ng(中位7.26×10^3拷贝/50ng),ABL标化后的相对含量为4.42%~13 170.01%(中位67.98%)。而对照组8例缺铁性贫血患者中PRAME转录本相对含量为0.00%~0.01%(中位0)。1例AML患者诱导缓解后PRAME转录本下降,复发时又明显升高。结论:EvaGreen染料法RQ-PCR检测PRAME转录本方法敏感可靠,可用于AML患者临床监测。 朱照辉 林江 钱军 姚冬明 钱震 王雅丽 韩兰秀 肖高飞关键词:实时定量PCR PRAME基因 急性髓系白血病 甲基化特异性PCR检测PRAME基因启动子低甲基化30例及其临床应用 被引量:1 2010年 目的建立实时定量甲基化特异性PCR(RQ-MSP)法检测急性髓系白血病(AML)患者黑色素瘤优先表达的抗原(PRAME)基因低甲基化水平,初步评价其临床意义。方法用亚硫酸氢盐修饰后的基因组DNA为模板,建立EvaGreen染料法RQ-MSP检测PRAME基因低甲基化水平方法 ,检测18例(对照组)和30例(AML组)患者的骨髓单个核细胞中PRAME基因启动子低甲基化水平。结果 RQ-MSP融解曲线呈单一峰,标准品5×10^7-5×10^2copy/μL重复性良好;AML患者PRAME基因低甲基化水平(0.96-4 508.96,中位772.42)明显高于对照组(0-100.00,中位25.29),差异有统计学意义(P=0.002)。结论建立的PRAME基因低甲基化RQ-MSP法特异性、重复性和灵敏性良好,可用于AML初诊和病情监测。 朱照辉 林江 钱军 姚冬明 钱震 王雅丽 肖高飞关键词:甲基化特异性PCR 基因 低甲基化 56例巨幼细胞性贫血临床实验室特点分析 被引量:10 2010年 目的分析巨幼细胞性贫血(megaloblastic anemia,MA)患者的临床及实验室指标并探讨其临床意义。方法对56例巨幼细胞性贫血患者的临床和肝功能、心肌酶谱、血象和血清造血原料等实验室指标进行回顾性分析。结果 56例患者中48例(85.7%)维生素B12缺乏、5例(8.9%)叶酸缺乏;51例(91.1%)出现贫血伴白细胞和(或)血小板减少,31例(55%)平均红细胞体积(MCV)大于120fL;与正常对照相比,MA患者中乳酸脱氢酶(LDH)、α-羟丁酸脱氢酶(HBDH)、门冬氨酸氨基转移酶(AST)、总胆红素(TBIL)和间接胆红素(IBIL)明显增高,差异有高度显著性(P<0.01)。结论 LDH、HBDH、AST、TBIL和IBIL增高可作为巨幼细胞性贫血的临床实验室诊断的重要参考指标。 姚冬明 钱军 林江 钱震 朱照辉 杨小飞 肖高飞 陈芹关键词:巨幼细胞性贫血 维生素B12 乳酸脱氢酶 Α-羟丁酸脱氢酶 平均红细胞体积