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曹志伟: 作品数：11 被引量：11H指数：3; 供职机构：青岛农业大学动物科技学院更多>>; 发文基金：山东省自然科学基金国家自然科学基金现代农业产业技术体山东省现代农业产业技术体系创新团队建设专项资金系建设专项资金更多>>; 相关领域：农业科学医药卫生轻工技术与工程化学工程更多>>

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鸡Ⅰ型IFN及TLR-3和TLR-7实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立: 为检测鸡抗病毒相关基因在病毒感染过程中的动态变化规律,本研究建立了鸡IFN-α、IFN-β、TLR-3和TLR-7的实时荧光定量RT-PCR的检测方法.根据Genbank提供的鸡IFN-α、IFN-β、TLR-3和TLR...; 曹志伟孙忠晟郭学金王建琳尹燕博; 关键词：天然免疫实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应; 文献传递

不同致病性H9N2亚型禽流感病毒诱导鸡TLR-7和Mx表达的研究: 本试验研究不同致病性H9N2 亚型禽流感病毒诱导SPF 鸡、SPF 鸡胚和鸡胚成纤维细胞中TLR-7 和Mx 表达的动态变化,为不同致病性H9N2 亚型禽流感病毒诱导IFN-I 产生差异的机制提供依据.150 只6 周龄...; 王建琳曹志伟王冬冬王守春尹燕博

比格犬IFN-α和IFN-β mRNA SYBR GreenⅠ荧光定量RT-PCR检测方法的建立被引量：3: 2014年; 为检测比格犬α和β-干扰素(CaIFN-α和CaIFN-β),本研究根据GenBank中登录的IFN-α和IFN-β基因序列,分别设计合成特异性引物,以犬3-磷酸甘油脱氢酶(GAPDH)mRNA为内参,建立SYBR Green I荧光定量RT-PCR检测方法。通过RT-PCR分别扩增IFN-α、IFN-β和GAPDH的基因片段,并克隆于pMD19-T载体中制备标准品,建立荧光定量RT-PCR标准曲线。结果表明:IFN-α和IFN-β和GAPDH基因的Ct值与标准品稀释度在1×102拷贝/μL^1×108拷贝/μL内均呈良好的线性关系,相关系数均大于0.994。组内组间变异系数均小于3%,特异性和重复性较好。同时采用常规RT-PCR方法与本研究建立的方法对30份临床样品检测,结果显示IFN-α和IFN-β的阳性符合率分别为96.43%和96.55%。本研究建立的检测方法为比格犬IFN mRNA的定量分析提供了有效手段。; 潘福星王冬冬曹志伟冯培祥刘宏齐娟孙忠晟王祖荣尹燕博; 关键词：SYBR 比格犬 Β-干扰素

鸡Ⅰ型IFN及TLR-3和TLR-7实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立被引量：1: 2016年; 为检测鸡抗病毒相关基因在病毒感染过程中的动态变化规律,研究建立了鸡IFN-a、IFN-β、TLR-3和TLR-7的实时荧光定量RT-PCR的检测方法。根据GenBank提供的鸡IFN-α、IFN-β、FLR-3和TLR-7参考序列设计了相应的特异引物,用常规RT-PCR方法从鸡脾脏总RNA中扩增得到鸡相应基因。将其cDNA分别克隆到pMD19-T载体中进行测序鉴定,采用SYBR Green I染料法,建立标准曲线并分析其溶解曲线。结果表明,这4种基因的检测灵敏度可高达46 copies/μL,且具有良好的特异性和重复性。此检测方法的建立为动态定量检测及研究鸡IFN-α、IFN-β、TLR-3和TLR-7基因的表达变化提供了有效的手段。; 曹志伟孙忠晟郭学金王建琳尹燕博; 关键词：IFN-Α IFN-Β

比格犬IFN-α和IFN-β mRNA SYBR GreenⅠ荧光定量RT-PCR检测方法的建立: 　　为检测比格犬α-和β-干扰素(CAIFN-α 和CAIFN-β)，本研究根据GENBANK 中登录的IFN-α和IFN-β 基因序列，分别设计合成特异性引物，以犬3-磷酸甘油脱氢酶(GAPDH)MRNA为内参，建立S...; 潘福星王冬冬曹志伟冯培祥刘宏齐娟孙忠晟王祖荣尹燕博; 关键词：实时荧光定量RT-PCR 比格犬 Β-干扰素

鸡Ⅰ型IFN及TLR-3和TLR-7实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立: 曹志伟孙忠晟郭学金王建琳尹燕博

致犊牛出血性腹泻病原的分离与鉴定被引量：4: 2015年; 为查明山东某肉牛养殖场犊牛出血性腹泻的病因,采集患病牛粪便,进行细菌分离培养、革兰染色镜检、生化鉴定和16SrRNA测序分析,接种MDBK细胞分离病毒,运用RT-PCR方法检测分离的病毒,并进行测序分析。结果表明,分离的细菌为大肠埃希菌,血清型鉴定为O8型,且该菌耐药性严重。分离到的病毒为基因2型牛病毒性腹泻病毒。初步判定该病是由致病性大肠埃希菌O8和基因2型牛病毒性腹泻病毒混合感染引起。; 朱梅胜张新兵张毅徐守振曹志伟李超刘琳琳郭妍妍尹燕博; 关键词：犊牛出血性腹泻大肠埃希菌牛病毒性腹泻病毒

不同致病性H9N2亚型禽流感病毒诱导SPF鸡主要细胞因子的表达: 本研究拟用筛选的不同致病性H9N2亚型禽流感病毒毒株(C/SD/196/11和C/SD/818/10)感染SPF鸡,应用实时荧光定量RT-PCR方法对鸡IFN-α、TNF-和H9N2亚型禽流感病毒进行动态测定,以研究不同...; 曹志伟朱梅胜王建琳尹燕博; 关键词：细胞因子基因表达; 文献传递

不同致病性H9N2亚型禽流感病毒诱导SPF鸡主要细胞因子的表达: <正>1、研究目的:本研究拟用筛选的不同致病性H9N2亚型禽流感病毒毒株(C/SD/196/11和C/SD/818/10)感染SPF鸡,应用实时荧光定量RT-PCR方法对鸡IFN-α、TNF-α和H9N2亚型禽流感病毒进...; 曹志伟朱梅胜王建琳尹燕博; 文献传递

不同致病性H9N2亚型禽流感病毒诱导鸡TLR-7和Mx基因mRNA转录水平的差异被引量：3: 2017年; 本试验拟研究不同致病性H9N2亚型禽流感病毒诱导SPF鸡、SPF鸡胚和鸡胚成纤维细胞中TLR-7和Mx基因mRNA转录水平的动态变化,为不同致病性H9N2亚型禽流感病毒诱导IFN-Ⅰ产生差异的机制提供依据。150只6周龄SPF鸡随机分为3组,分别静脉接种PBS、105 EID50毒株SD/196和SD/818各0.2mL,分别于接种后的第1、3、5、7和10天每组剖杀8只,收集具有明显病变差异的组织;180枚10日龄SPF鸡胚分别尿囊腔接种PBS、104 EID50的SD/196毒株和SD/818毒株各0.1mL,分别于接种后的第4、8、16、24、32和48小时每组收集胚体10个;鸡胚成纤维细胞分别接种PBS、SD/196和SD/818毒株病毒液(1moi)进行37℃培养,于感染后的第4、8、16、24、32和48小时收集细胞;动态收集的病变组织、胚体和成纤维细胞通过荧光定量PCR测定TLR-7和Mx基因mRNA水平的表达。结果显示,肺、肾、十二指肠和法氏囊为主要病变差异组织,除鸡胚TLR-7的表达外,毒株SD/818大部分时间点诱导主要病变差异组织、鸡胚和成纤维细胞中TLR-7和Mx基因mRNA的表达显著高于毒株SD/196(P<0.05)。结果表明不同致病性H9N2亚型禽流感病毒明显诱导了SPF鸡主要病变差异组织、SPF鸡胚和鸡胚成纤维细胞中TLR-7和Mx基因mRNA的表达,且较高致病性毒株SD/818诱导表达量明显高于较低致病性毒株SD/196。; 王建琳曹志伟王冬冬尹燕博; 关键词：H9N2亚型禽流感病毒 SPF鸡

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