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方勤: 作品数：56 被引量：212H指数：12; 供职机构：中国科学院武汉病毒研究所更多>>; 发文基金：国家自然科学基金淡水生态与生物技术国家重点实验室开放谭题基金湖北省自然科学基金更多>>; 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>

合作作者

草鱼呼肠孤病毒基因组及蛋白结构与功能研究: 方勤陆仁后邱涛丁清泉张岚岚; 该项目属生命科学病毒学研究领域。草鱼暴发性出血病严重地威胁中国淡水养殖业的健康发展，草鱼呼肠孤病毒(GCRV)是该病的病毒病原，研究GCRV基因组及结构蛋白特性与功能是基础病毒学及抗病毒研究需要解决的重大课题。完成人在国...; 关键词：; 关键词：草鱼呼肠孤病毒免疫防治淡水鱼养殖

草鱼出血病核酸疫苗的研制及区域试验: 郝贵杰沈锦玉潘晓艺尹文林徐洋姚嘉赟钱冬曹铮方勤; 该项目建立了一种快速检测草鱼呼肠孤病毒(GCRV)的反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)方法并形成操作规程，申请发明专利一项。该方法为草鱼出血病的监控及早期诊断提供了技术支撑，提高了养殖户的经济效益。近年来，在浙江及周边...; 关键词：; 关键词：草鱼养殖出血病核酸疫苗

草鱼呼肠孤病毒逆转录聚合酶链式反应核酸检测方法: 本发明是一种草鱼呼肠孤病毒逆转录聚合酶链式反应核酸检测方法，该方法是采用RNA吸附柱离心法直接提取待测样品中总RNA，通过逆转录酶链式反应从待测样品中检测编码GCRV外衣壳结构蛋白VP7的s10基因片段；所述待测样品包括...; 方勤张岚岚丁清泉; 文献传递

草鱼呼肠孤病毒的三维重构与衣壳蛋白特性被引量：17: 2005年; 草鱼呼肠孤病毒(grass carp reovirus,GCRV)为呼肠孤病毒科水生呼肠孤病毒属一新成员.最新的基因组序列分析发现,GCRV与哺乳动物呼肠孤病毒(mammalian reovirus,MRV)具有高度的同源性.为了解GCRV致病机理,进行了分辨率达到17?的三维重构与衣壳蛋白特性研究.结果表明:GCRV颗粒呈多层排列,包括RNA核心与内壳层、中间层及外壳层.由200个按T=13对称排列的三聚体组成外衣壳,其典型特征是在5次轴上出现三聚体缺失凹陷区,暴露出中间层三聚体亚单位.内壳层由120个单体组成,按T=1排列,结构特点与呼肠孤病毒科成员内衣壳特征相一致.衣壳蛋白电泳显示,GCRV颗粒含有7种蛋白(VP1-VP7)组分,与MRV衣壳蛋白特性相近,两者在衣壳结构组成上的相似性与基因组序列的高度同源性相吻合.此结果对进一步研究GCRV与宿主细胞相互作用机理具有指导意义.; 方勤Sanket Shah Yuyao Liang Z.H.Zhou; 关键词：草鱼呼肠孤病毒呼肠孤病毒科衣壳蛋白电泳显示内壳层

两株水生呼肠孤病毒部分特性的比较被引量：9: 2003年; 水生呼肠孤病毒为感染水生动物的一类病原体,隶属于呼肠孤病毒科新建水生呼肠孤病毒属。草鱼呼肠孤病毒(Grass carp reovirus,GCRV)是引起中国南方淡水养殖草鱼暴发性出血病病原,鲅鱼呼肠孤病毒(Threadfin reovirus,TFV)是引起海水养殖鲅鱼病毒病病原。本研究将GCRV与新加坡TFV分离株进行了部分特性比较研究。结果表明,GCRV与TFV均能感染CIK细胞,但对其它鱼类细胞系的敏感性有所差异。此外,凝胶电泳与逆转录聚合酶链式扩增显示,GCRV与TFV核酸属不同的基因型。在多肽特性上,证实了GCRV的5条主要结构多肽具有与FTV及水生呼肠孤病毒相似的特性。Western blot检测显示,草鱼呼肠孤病毒与TFV结构蛋白拥有部分相同的抗原决定簇。; 方勤丁清泉汪亚平朱作言; 关键词：草鱼呼肠孤病毒

一种酵母展示草鱼出血病疫苗及其制备方法: 本发明公开了一种利用酵母表面展示技术制备的草鱼出血病疫苗，涉及基因工程疫苗制备。该疫苗通过糖基化基因敲除后的酿酒酵母细胞EBY100△Mnn9表面展示GCRV-VP7蛋白制备。酿酒酵母是真核的表达系统，其表达的病毒外壳蛋...; 袁丽方勤罗绍祥闫利明戴和平张晓华; 文献传递

小量快速浓缩病毒蛋白的研究: 2000年; 采用甘油透析浓缩及PEG - 60 0 0沉淀相结合的方法 ,对细胞病毒培养液进行处理 ,获得了较为纯化的病毒蛋白。该方法适用于病毒蛋白小量快速分析。纯化的病毒蛋白回收率约为 53μg/ml。; 邹桂平方勤; 关键词：病毒蛋白

草鱼出血病病毒抗原亚单位的研制被引量：2: 1997年; 通过比较溶液的离子浓度对病毒形态结构的影响，发现GCHV在低盐溶液低温（-20℃）保存条件下，外壳蛋白会自动降解，但不十分完全。采用含1％NP40（Nonidetp40）的稀盐溶液处理感染病毒的细胞，经冻融及差异离心，电镜下观察到纯度较高的病毒双层衣壳、核心衣壳及散在的子粒。纯化的病毒亚单位用核酸酶消化后，与等量的福氏佐剂混合，免疫家兔制备抗体。该抗血清经中和试验测定，显示了较强的中和病毒的能力。纯化的病毒亚单位在7％聚丙烯酰胺凝胶电泳条件下，未见病毒电泳条带。同时采用地高辛标记的GCHVcDNA克隆探针，与病毒RNA及亚单位样品进行斑点杂交，检测病毒RNA灵敏度达到10pg．病毒亚单位样品均为阴性结果。该亚单位制剂具有纯度高、体积小的特点，将是一种安全性能好、使用方法简便、又便于保存和运输的亚单位疫苗。; 方勤江红柯丽华; 关键词：草鱼出血病病毒病毒疫苗

应用免疫吸附电镜技术检测草鱼出血病病毒: ＜正＞免疫吸附电镜技术[ISEM]是免疫学与超微形态学相结合的一种新的检测技术。它快速,灵敏、特异性强,是可靠的病毒诊断技术之一。我们应用免疫吸附电镜技术对草鱼出血病病毒进行了检测,并获得了理想的效果。方法: 将兔抗草...; 袁爱华梁世平方勤邓红张世敏; 文献传递