张鹏杰
- 作品数：9 被引量：22H指数：3
- 供职机构：苏州大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划江苏省教育厅自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 表达短ie-1 dsRNA的转化细胞对家蚕核型多角体病毒的抑制作用被引量：9
- 2008年
- 为了利用RNAi技术提高家蚕对核型多角体病毒(BmNPV)的抗性,根据BmNPV复制必需基因ie-1设计其相应的dsRNA,构建带有ie-1 dsRNA表达盒的转基因载体piggyantiIE-Neo,结果显示:表达短ie-1 dsRNA的稳定转化Bm细胞,对BmNPV的增殖表现出抑制作用,但在病毒感染后期,由于病毒恢复增殖导致RNAi的效果被掩盖。通过反向PCR分析外源DNA片段插入基因组位点,结果显示:在转化细胞中,外源DNA可通过随机整合或按照piggyBac特定的转座位点TTAA插入细胞基因组。
- 张鹏杰薛仁宇曹广力贡成良
- 关键词：家蚕核型多角体病毒家蚕细胞PIGGYBAC转座子
- 双元表达短dsRNAs的转化细胞/家蚕对BmNPV的抗性研究
- 利用RNAi 技术提高家蚕对核型多角体病毒(BmNPV)的抗性，构建了带有BmNPV ie-1、lef-1 dsRNA双表达盒的转基因载体piggyantiIE-lef1-Neo。结果显示：表达双元dsRNA的稳定转化B...
- 张鹏杰薛仁宇曹广力贡成良
- 关键词：转基因家蚕核型多角体病毒家蚕细胞转基因家蚕PIGGYBAC转座子
- 表达短lef-1 dsRNA的转化细胞对家蚕核型多角体病毒的抗性被引量：5
- 2009年
- 为了探讨RNAi抑制家蚕核型多角体病毒(BmNPV)增殖的效果,用带有lef-1dsRNA表达盒的转基因载体pigA3-LEF-Neo转染家蚕BmN培养细胞,通过G418(750～800mg/L)筛选,获得了稳定转化细胞系.病毒感染试验显示,稳定转化细胞的病毒感染率比正常细胞低53%、转化细胞形成的多角体数量为普通细胞中的2/3、细胞培养上清中的游离病毒减少了90%以上,表明病毒在转化细胞中的增殖受到明显抑制;半定量RT-PCR结果显示,转化细胞中病毒lef-1的转录水平仅为正常细胞的2/5～3/5,表明转化细胞表达的lef-1dsRNA抑制了病毒lef-1基因的表达.通过反向PCR分析外源DNA片段插入基因组位点,结果表明,在转化细胞中外源DNA可通过随机整合或按照piggyBac特定的转座位点TTAA插入细胞基因组.
- 鲁银松薛仁宇曹广力张鹏杰刘波贡成良
- 关键词：RNA干扰家蚕核型多角体病毒培养细胞PIGGYBAC转座子
- RNAi提高家蚕对BmNPV的抗性及家蚕精细胞发育相关基因Achi功能的研究
- 本研究构建了基于piggyBac转座子、表达有BmNPV复制必需基因ie-1和lef-1短片段dsRNA和双筛选基因(gfp和neo基因)的转基因载体piggyantiIE-lef1-neo。转染有该载体的稳定转化细胞在...
- 张鹏杰
- 关键词：家蚕减数分裂
- 表达短Lef-1 dsRNA转基因家蚕抑制BmNPV增殖的研究
- 为了提高家蚕对核型多角体病毒（BmNPV）的抵抗能力，将带有lef-1 dsRNA 表达盒和neo 基因表达盒的转 基因载体pigA3-LEF-Neo 通过精子介导法导入蚕卵，经G418 和GFP 的双重筛选结合分子生物...
- 叶秋霞薛仁宇曹广力张鹏杰潘中华郑小坚贡成良
- 关键词：家蚕核型多角体病毒转基因抗性经济性状
- 表达短ie-lef1 dsRNA的转化细胞对家蚕核型多角体病毒的抗性
- 为了利用RNAi技术提高家蚕对核型多角体病毒（BmNPV）抗性,根据BmNPV复制必需基因ie-1,lef-1设计其相应的ie-1、lef1dsRNA,构建同时带有ie-1、lef1dsRNA表达盒的转基因载体piggy...
- 张鹏杰薛仁宇曹广力贡成良
- 关键词：家蚕核型多角体病毒家蚕细胞PIGGYBAC转座子
- 文献传递
- 表达短lef-1 dsRNA转基因家蚕对BmNPV的抵抗能力与主要经济性状被引量：7
- 2011年
- 为了提高家蚕对核型多角体病毒(BmNPV)的抵抗能力,将带有BmNPV晚期表达因子基因(lef-1)dsRNA表达盒和新霉素抗性基因(neo)表达盒的转基因载体pigA3-LEF-Neo通过精子介导法导入家蚕卵,经G418和GFP双重筛选并结合分子生物学鉴定,证实获得了转基因家蚕。对G6代转基因家蚕2龄幼虫接种BmNPV,结果显示转基因家蚕的死亡率比正常家蚕(对照组)下降了10～30个百分点,表明转基因家蚕对BmNPV的抗性有所提高;对接种BmNPV的5龄转基因家蚕A、B系统的定量PCR检测结果显示,2个系统体内的lef-1 mRNA转录水平比对照组平均降低了72倍和26.5倍,最高下降了104倍,进一步表明表达lef-1 dsRNA的转基因家蚕抑制了BmNPV lef-1基因的表达。转基因家蚕的饲养成绩显示其全茧量、茧层量和茧层率等主要经济性状与正常家蚕无明显差异。
- 叶秋霞薛仁宇曹广力张鹏杰潘中华郑小坚贡成良
- 关键词：家蚕核型多角体病毒双链RNA转基因家蚕经济性状
- 家蚕卵巢肿瘤基因Bmotu及其可变剪接被引量：3
- 2011年
- 已知卵巢肿瘤基因(ovarian tumor gene,otu)在果蝇(Drosophila melanogaster)卵巢发育过程中发挥极其重要的作用,该基因突变会扰乱卵子形成的正常过程。为探究家蚕(Bombyx mori)是否具有类似果蝇生殖发育相关基因otu的同源基因,以及基因存在的可变剪接形式,在电子克隆的基础上,应用RT-PCR从家蚕精巢组织中获得了4条不同长度的Bmotu cDNA片段(GenBank登录号:HQ831341,HQ831342,HQ999998,HQ831343),其中3条由于无义突变导致翻译提前终止;而从卵巢组织中仅获得了1条Bmotu cDNA片段,该片段序列与精巢中扩增的登录号为HQ831343片段序列的5'端相同。结果表明Bmotu基因存在可变剪接,且雌、雄之间的剪接方式可能存在差异。生物信息学分析发现Bmotu基因编码蛋白与果蝇Otu的结构类似,含有半胱氨酸蛋白酶结构域(Otu结构域)、Tudor结构域、脯氨酸基序。研究结果有助于进一步探讨家蚕生殖发育机制。
- 薛高旭曹广力张鹏杰张瑶瑶薛仁宇贡成良
- 关键词：家蚕生殖发育可变剪接
- 利用RNAi及转基因技术抑制BmNPV增殖的研究
- RNAi，又称RNA干预或者RNA干涉，是dsRNA介导的特异性基因表达沉默现象。为了利用RNAi技术提高家蚕对核型多角体病毒(BmNPV)的抗性，根据BmNPV复制必需基因．ie-1、lef-1设计其相应的dsRNA(...
- 张鹏杰
- 关键词：转基因技术核型多角体病毒细胞增殖家蚕
- 文献传递
