张淑雅 作品数:26 被引量:43 H指数:3 供职机构: 宁夏医科大学基础医学院 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 宁夏回族自治区自然科学基金 国家重点基础研究发展计划 更多>> 相关领域: 医药卫生 生物学 文化科学 更多>>
Sparc基因的克隆及其在HEK293细胞中的表达 2013年 目的:为探讨SPARC(secreted protein acidic and rich in cysteine)在人恶性肿瘤发生、发展中的作用及其分子机制,进一步明确SPARC发挥作用的方式及其与肿瘤发生类型的关系。方法:我们首先提取了人乳腺癌细胞系MCF-7的总RNA,在对总RNA进行纯度与定量检测后,利用RT-PCR的方法,以该总RNA为模板,将其反转录为cDNA;再设计引物,以该cDNA为模板,利用PCR扩增出包含Sparc编码区的DNA片段,将该产物纯化后通过T-A克隆连接入pMD20-T载体,利用菌落PCR及DNA测序进行鉴定。以pMD20-T-Sparc为模板,我们设计了特异的针对Sparc全长编码区的引物,并在引物5'端分别加入BamHI、HindIII酶切位点,通过PCR将Sparc编码区扩增出来,经纯化及双酶切后与真核表达载体pcDNA3.1myc-his(-)相连,再经菌落PCR和DNA测序进行鉴定。通过瞬时转染的方法,利用脂质体将所构建的重组SPARC真核表达载体转染HEK293细胞,48h后裂解所培养的细胞,使用western blot检测有无SPARC的表达。结果:测序证实所克隆的Sparc编码区cDNA正确地插入pcDNA3.1myc-his(-)中,western blot检测证实其在HEK293细胞中得到表达,而空载体转染的细胞则无表达,说明所构建的pcDNA3.1myc-his(-)-Sparc能够成功表达。结论:我们成功克隆了人Sparc cDNA,构建了其真核表达载体,并在HEK293细胞中得到有效表达,从而为进一步研究人SPARC的功能及其与肿瘤的关系奠定了基础。 卜歆 赵虎 张淑雅 王涛 苏金关键词:SPARC 真核表达 克隆 CDNA 鞘氨醇-1-磷酸干预对小鼠玻璃化冻融卵巢移植后凋亡的影响 被引量:3 2021年 目的探讨鞘氨醇-1-磷酸(sphingosine-1-phosphate,S1P)干预对小鼠玻璃化冻融卵巢移植后卵泡形态和凋亡的影响。方法取21日龄ICR雌性小鼠卵巢分为新鲜对照组、冻存对照组和2μmol·L-1 S1P干预组,新鲜卵巢及两组冻存卵巢解冻后移植于6~8周龄ICR雌性去势小鼠肾被膜下2 d、14 d后,通过HE染色观察移植后卵巢的卵泡形态,TUNEL检测移植后卵巢的凋亡率;实时荧光定量PCR检测卵巢移植后Caspase3、Bax、Bcl-2的基因表达情况。结果移植2 d和14 d后,与新鲜对照组相比,冻存对照组和S1P干预组卵泡形态的完整性较差,闭锁卵泡多,正常卵泡明显减少,卵泡凋亡率较高(P均<0.05)。与冻存对照组相比,S1P干预组卵泡形态较完整,闭锁较少,卵泡发育良好,原始卵泡较多,卵泡凋亡率降低(P均<0.05),促凋亡基因Bax和凋亡基因Caspase3表达降低(P均<0.05);抗凋亡基因Bcl-2表达增高(P<0.05)。结论小鼠玻璃化冻融卵巢移植后S1P的干预可维持较好的卵泡发育,抑制卵泡闭锁,降低移植后卵巢凋亡,抵抗玻璃化冷冻移植对卵巢的损伤。 秦天 田媛 杨延周 杨延周 张淑雅 王燕蓉关键词:凋亡 护肝灵胶囊对酒精中毒大鼠和小鼠的保护作用 2009年 目的通过观察护肝灵胶囊对酒精中毒动物模型自发活动、学习记忆、血液乙醇浓度及肝胃损伤的影响,评价护肝灵胶囊解酒毒作用的强度和范围,为临床合理用药提供理论依据。方法通过小鼠自发活动、跳台和大鼠水迷宫试验,检测大鼠血液乙醇浓度及对大鼠胃、十二指肠粘膜,肝损伤和记忆的影响。结果护肝灵胶囊能显著降低酒精中毒小鼠的自发活动,对抗酒精所致小鼠的兴奋作用,改善酒精中毒小鼠症状;能显著缩短酒精所致记忆再现障碍小鼠的跳台潜伏期及受电击时间,减少酒精所致记忆再现障碍大鼠水迷宫游泳时间;能显著降低急性酒精中毒大鼠的血乙醇浓度;对肝功能及肝组织损伤具有一定的保护作用;显著减轻酒精中毒大鼠的急性胃、十二指肠粘膜损伤。结论护肝灵胶囊具有明显的解酒毒、逆转肝和胃十二指肠粘膜损伤作用。 张淑雅 王小萍 裴秀英 贾敏关键词:酒精中毒 动物 MCP-1基因多态性与海原回族结核病遗传易感性的关联性研究 目的结核病的发生与发展是结核分枝杆菌与宿主之间相互作用的结果,宿主免疫遗传因素在结核病发生发展过程中起着非常重要的作用。本研究选择结核病主要候选基因单核细胞趋化蛋白-1/(MCP-1/)基因的2个SNPs rs10246... 张淑雅关键词:MCP-1 基因多态性 遗传易感性 结核病 文献传递 基于多因子降维法的肺结核易感基因—基因交互作用研究 被引量:1 2011年 目的分析宁夏银川地区肺结核易感基因间的交互作用。方法结合前期病例对照研究结果(PCR-RFLP法检测肺结核易感基因MCP-1、CCR2、VDR、NRAMP1-3’UTR、NRAMP1D543N、NRAMP1INT4及MBL-G54A分型,银川地区肺结核病例271例,健康对照299例),运用MDR法分析肺结核易感基因—基因交互作用模型。结果有统计学意义的最佳交互模型包含VDR基因和CCR2基因,该模型的检验样本准确度为0.6248,交叉验证一致性的结果为10/10。结论 VDR基因和CCR2基因可能协同增强了宿主对结核杆菌的易感性,从而增加了宿主肺结核病的患病风险。 李岩 裴秀英 张淑雅 随瑞枝关键词:多因子降维法 肺结核 FSH对缺血缺氧诱导的小鼠卵巢颗粒细胞凋亡的保护作用 被引量:1 2022年 目的探究促卵泡刺激素(FSH)对缺血缺氧损伤的小鼠原代卵巢颗粒细胞的保护作用。方法21日龄雌性ICR小鼠注射孕马血清(PMSG)42 h后,体外分离并培养小鼠原代卵巢颗粒细胞,分为对照组、单纯缺血缺氧组、缺血缺氧FSH干预组(0.1、0.2、0.4、0.6 IU·mL^(-1) FSH)。对单纯缺血缺氧组及缺血缺氧FSH干预组的细胞分别进行缺血缺氧处理及不同浓度FSH干预,通过TUNEL染色及流式细胞术检测细胞凋亡情况;通过Western blot检测抗凋亡蛋白Bcl-2、凋亡蛋白Bax的表达情况。结果TUNEL检测细胞结果显示:单纯缺血缺氧组TUNEL阳性细胞数最多、细胞凋亡率最高,FSH干预能够减少细胞凋亡,其中0.4、0.6 IU·mL^(-1) FSH干预组TUNEL阳性细胞较其他干预组减少,细胞凋亡率降低(P均<0.01);流式细胞术结果显示:除对照组外,其余各组凋亡率均有所增加(P均<0.01),在添加不同浓度FSH干预后,细胞凋亡被抑制,其中0.4 IU·mL^(-1) FSH干预组细胞凋亡率低于单纯缺血缺氧组和0.1 IU·mL^(-1) FSH干预组(P均<0.05);Western blot检测凋亡相关蛋白结果显示:与对照组相比,其余各组Bax蛋白表达均上调,Bcl-2蛋白表达量、Bcl-2/Bax比值均降低,0.4 IU·mL^(-1) FSH干预组的Bcl-2蛋白表达量、Bcl-2/Bax比值均高于单纯缺血缺氧组和其他干预组(P均<0.01)。结论添加FSH能抑制缺血缺氧诱导的小鼠颗粒细胞凋亡,降低细胞凋亡率,增强细胞的抗凋亡能力。 王菲 田媛 郝耀 刘心蕊 张淑雅 杨延周 裴承斌 王燕蓉 裴秀英关键词:缺血缺氧 促卵泡刺激素 细胞凋亡 定量研究血管新生的Matrigel plug体内模型建立 2015年 目的建立能够定性、定量检测血管新生的Matrigel plug体内模型,为抗肿瘤血管药物筛选提供在体研究平台。方法在小鼠皮下建立Matrigel plug实验模型,从Matrigel大体标本观察血管网络,运用免疫荧光法检测血管密度,通过三维立体成像检测血管内皮细胞的成管能力,并通过实时荧光定量PCR(q PCR)对血管内皮细胞表达的标记分子CD31与VE-Cadeherin进行定量分析。结果用上述方法能够定性、定量检测到血管密度、成管能力及血管内皮细胞标记分子CD31、VE-Cadehrin的表达与Matrigel plug中血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)浓度成正相关,能够客观的反映血管新生的程度。结论建立了能够定性、定量分析Matrigel plug内血管新生程度的体内模型,为血管新生研究及抗肿瘤血管药物研发提供新的策略和平台。 陈昕 裴秀英 马建军 刘欢 马雯 刘京瑞 姜飞娥 安继祥 李媛 张淑雅关键词:MATRIGEL PLUG 血管新生 RA滑膜成纤维细胞的原代培养及鉴定 被引量:9 2012年 目的:改良体外分离、培养类风湿性关节炎滑膜成纤维细胞的方法,并进行鉴定。方法:取关节镜手术中获得RA患者滑膜组织进行机械分离、胶原酶消化后直接将所有消化产物置于细胞培养皿两次贴壁培养,差速消化法纯化成纤维细胞,倒置显微镜观察细胞形态、流式细胞术及免疫细胞化学的方法鉴定细胞纯度。结果:胶原酶消化后直接贴壁结合差速消化纯化法分离获得的原代滑膜细胞中呈梭形的成纤维样细胞占98%以上,细胞核呈椭圆形位于细胞中央,偶见少量圆形的滑膜巨噬细胞。流式细胞术显示98%以上的滑膜细胞具有vimeintin+CD68的成纤维细胞特征。免疫细胞化学提示滑膜细胞vimentin表达阳性、CD68不表达。结论:成功分离获得了纯度和活性很高的人滑膜成纤维样细胞,方法更简便,效率更高,为后续类风湿性关节炎滑膜侵袭机制的研究奠定了基础。 丁娟 王志军 董晓薇 张淑雅 芦晓红 赵薇关键词:类风湿性关节炎 滑膜成纤维样细胞 原代培养 宁夏回汉族人群RANTES基因多态性的分布特征 被引量:1 2012年 目的研究宁夏回汉族人群RANTES基因多态性的分布特征。方法应用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术,检测176例回族和214例汉族人群RANTES基因-403(G/A)、-28(C/G)多态性位点的基因型。结果宁夏回族群体RANTES基因两个SNP各基因型频率及等位基因频率分别为-403G/A(GG:37.5%;GA:46.6%;AA:15.9%;G:60.8%;A:39.2%);-28C/G(CC:71.0%;CG:27.3%;GG:2.7%;C:84.7%;G:15.3%)。宁夏汉族群体RANTES基因两个SNP各基因型频率及等位基因频率分别为-403G/A(GG:43.9%;GA:43.9%;AA:12.1%;G:65.9%;A:34.1%);-28C/G(CC:75.7%;CG:22.0%;GG:2.3%;C:86.7%;G:13.3%)。两组间差异均无统计学意义(P>0.05)。结论 RANTES基因-403、-28两个多态性位点在宁夏回、汉族人群间差异无统计学意义。 王兴 随瑞枝 张淑雅 裴秀英关键词:RANTES基因 回族 汉族 胶原盘状结构域受体2基因缺失对小鼠卵巢功能的影响 2013年 目的利用胶原盘状结构域受体2(Discoidin domain receptor 2,DDR2)基因缺失小鼠,研究DDR2缺失对卵巢功能的影响,探索DDR2缺失小鼠不孕的原因。方法①阴道脱落细胞涂片结合改良巴氏染色法检测DDR2基因缺失纯合子(SLIE)与野生型(WT)小鼠动情周期的差异。②PMSG+HCG促排卵后在体式显微镜下计数排卵数量差异,HE染色法观察SLIE小鼠与WT小鼠促排卵后卵巢与子宫形态及结构的差异。结果①成年SLIE小鼠缺乏明显的动情期,绝大多数处于动情间期,缺乏规律的动情周期。②促排卵实验发现,SLIE小鼠促排卵数量显著减少;③排卵后黄体生成早期,SLIE小鼠子宫壁薄,体积小;卵巢切片中没有黄体生成;子宫切片HE染色显示子宫内膜薄,腺体及间质增生不明显,未见分泌粘液,未能进入分泌期。结论DDR2缺失导致卵巢对促性腺激素的反应能力降低,促排卵后黄体生成障碍。 张淑雅 陈昕 桑旭东 卜歆 王燕蓉 苏金 裴秀英关键词:细胞外基质 不孕