张志东
- 作品数：142 被引量：193H指数：7
- 供职机构：中国农业科学院兰州兽医研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家肉羊产业技术体系建设项目国家现代农业产业技术体系建设项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生环境科学与工程更多>>
- 一种用于增强PPRV复制的敏感细胞亚克隆Vero/Slam/V的制备方法
- 一种用于增强PPRV复制的敏感细胞亚克隆Vero/Slam/V的制备方法，包含山羊淋巴细胞信号活化因子Slam/V引物序列，slam/V慢病毒表达载体构建，slam/V复制缺陷型慢病毒的获得，slam/V慢病毒感染靶标细...
- 吴锦艳张志东尚佑军田宏陈妍王光祥刘湘涛王耀杰张吉利
- 固有免疫学的研究进展及其对研制新型免疫佐剂的启示被引量：1
- 2011年
- 近年来,亚单位疫苗、DNA重组疫苗、合成肽疫苗等新型疫苗不断涌现,这些疫苗纯度高、特异性强。但其分子小,免疫原性较差,难以诱导机体产生有效的免疫应答,需添加佐剂来增强其免疫原性或增强宿主对抗原的保护性应答。免疫学的研究阐明了固有免疫如何调节适应性免疫。随着固有免疫学的发展和生化技术的提高,开发特异性更强、生物安全性更高的免疫佐剂越来越受到重视。对佐剂的分类、作用机理,固有免疫学的研究进展进行了综述,并就未来发展趋势提出自己的观点,为临床应用和进一步研制高效、低毒的免疫佐剂提供了参考。
- 孙英军张艳吴琼郑海学张志东
- 关键词：免疫佐剂TLR固有免疫疫苗
- 小反刍兽疫病毒感染外周血单个核细胞凋亡相关基因的筛选鉴定被引量：3
- 2021年
- 细胞凋亡、自噬、坏死及炎症反应是机体重要的抗病毒反应机制,尤其淋巴细胞凋亡是小反刍兽疫病毒(PPRV)引起宿主免疫抑制的重要因素,但其分子机制尚不清楚。本研究分别在绵羊外周血单个核细胞(PBMCs)体外感染PPRV后经24、48和72 h收样,利用PCR芯片检测共84个与凋亡、自噬、坏死及炎症有关的通路相关关键分子的变化。结果表明,感染PPRV后经24、48和72 h上调表达的基因个数分别为29、30、3,下调表达的基因个数分别为24、12、28;qPCR验证结果表明,细胞凋亡相关基因FASLG、BID、APAF1、BCL2L1、BCL2L10、CASP9、BAK1、BCL2、FAS、XIAP等随着PPRV感染时间的延长,表达量逐渐升高,CASP8随着PPRV感染时间的延长,表达量逐渐下降,与PCR芯片检测结果一致。这为进一步阐明PPRV引起的细胞凋亡及动物免疫抑制的分子机制提供理论依据。
- 苏乾隆赵帅阳李彦敏张瑞张志雄孙跃峰张志东
- 关键词：小反刍兽疫病毒外周血单个核细胞凋亡免疫抑制
- 一种山羊痘、绵羊痘二价细胞弱毒疫苗及其制备方法和应用
- 本发明提供一种山羊痘、绵羊痘二价细胞弱毒疫苗，有效成分包括山羊痘病毒细胞传代致弱毒以及绵羊痘病毒细胞传代致弱毒；其中，山羊痘病毒细胞传代致弱毒为山羊痘病毒细胞传代致弱疫苗株Goatpox Virus HN-XY2010F...
- 刘相涛王光祥尚佑军张志东王艳华吴锦艳陈妍田宏栾志舫逯忠新
- 快速检测羊痘病毒的实时荧光RPA试剂盒、试纸条RPA试剂盒及其用途
- 本发明公开了一种快速检测羊痘病毒的实时荧光RPA试剂盒及其用途，还公开了一种快速检测羊痘病毒的试纸条RPA试剂盒及其用途。该两种试剂盒分别包括SEQ？ID？NO.1及SEQ？ID？NO.2所示的引物及各自的探针，虽然针对...
- 张志东杨洋张向乐秦晓东赵志荀张强
- 文献传递
- 慢病毒介导稳定表达增强小反刍兽疫病毒复制的山羊Vero/SLAM细胞系的建立被引量：4
- 2019年
- 利用Gateway技术和慢病毒表达系统将山羊淋巴细胞信号活化因子SLAM稳定整合在Vero细胞基因组染色体上,建立稳定表达可增强小反刍兽疫病毒(PPRV)复制的SLAM的Vero阳性细胞亚克隆,并验证阳性细胞亚克隆Vero/SLAM表达SLAM的活性、遗传稳定性及其对PPRV复制的增殖效果。分离山羊外周血淋巴细胞,提取基因组Total RNA,一步RT-PCR获得完整ORF的SLAM基因,采用BP及LR位点的基因重组技术,构建入门载体pDONR/SLAM并获得表达骨架pDEST/SLAM,与Packaging Mix pLP1、pLP2及VSV-G共转染293-FT细胞,获得SLAM复制缺陷型慢病毒样粒子,用其感染Vero细胞,杀稻瘟菌素抗性筛选获得阳性细胞克隆,通过靶标基因扩增、间接免疫荧光、激光扫描共聚焦显微技术、Western blot免疫印迹检测技术、致细胞病变效应及Realtime RT-PCR等技术分别验证SLAM基因组整合、转录,SLAM蛋白表达、反应活性以及PPRV在表达SLAM阳性细胞亚克隆上的增殖效果。结果显示:SLAM受体基因被稳定整合在Vero细胞基因组染色体上,该受体蛋白表达于细胞周质,建立的细胞连续传代不丢失,接种病毒后致细胞病变时间由4～7d缩短为3.5d,TCID_(50)·0.1mL^(-1)由4.25增加为5.67,相对于正常Vero细胞,整合有SLAM的Vero细胞,由于表达了PPRV特异的细胞受体使PPRV对其易感性显著增强。成功建立一株稳定表达靶向增强PPRV复制的Vero/SLAM细胞:该细胞表达的SLAM具有明显增强PPRV复制的功能,不仅可以从细胞模型水平阐明增强PPRV复制的关键靶基因,也为PPRV感染引起宿主细胞的变化以及对机体的致病机制等提供研究工具。
- 吴锦艳田宏蒙学莲惠小婷王耀杰关玉华尚佑军刘永生张志东
- 关键词：小反刍兽疫病毒SLAMGATEWAY技术
- 小反刍兽疫病毒H蛋白抗体iELISA检测方法及应用
- 本发明以筛选的小反刍兽疫病毒(Peste Des Petits Ruminants Virus,PPRV)H蛋白B细胞表位为基础，选择其中反应原性较好的4个抗原表位肽串联后合成作为包被抗原，建立针对PPRV H蛋白抗体的...
- 窦永喜钱榜李彦敏朱学亮张志东张学燕
- 文献传递
- 共表达FMDV和PPRV抗原基因重组病毒的构建方法
- 本发明公开了一种共表达FMDV和PPRV抗原基因重组病毒的构建方法。属于重组病毒技术领域。包括如下步骤：rMVA‑GFP重组病毒的构建→rMVA‑FMDVOP1‑2A/3C‑PPRVF/H重组病毒的构建。本发明取得的有益...
- 赵志荀张强黄彩云朱学亮张志东刘在新卢曾军
- 文献传递
- 针对Asia-1型FMDV的qRT-PCR终点法中和试验的建立及初步研究被引量：2
- 2016年
- 为了缩短病毒中和试验(VNT)在口蹄疫病毒(FMDV)疫苗毒株选择以及病原检测中的时间,减少结果判断时人为因素的影响,试验采用qRT-PCR方法改进了传统的VNT,首先建立基于FMDV 3D序列的Taqman探针法qRT-PCR,之后使用FMDV Asia-1/JSL/06毒株感染IBRS-2细胞,提取不同时间收集的细胞病毒混合物的RNA进行qRT-PCR定量检测,获得FMDV Asia-1/JSL/06毒株在IBRS-2细胞中的病毒复制曲线,确定病毒复制的终点时间,即病毒中和试验中加入细胞维持液之后的第20小时,此时使用TRIzol裂解细胞并提取RNA进行qRT-PCR定量检测。以6作为拷贝浓度对数的临界值,拷贝浓度对数大于6的最低稀释度作为终点稀释度,建立了qRTPCR-VNT方法的终点稀释度判断标准,并应用该方法对19份阴性血清以及4份阳性血清进行qRT-PCR-VNT检测。结果表明:该方法获得的阴性、阳性结果与传统VNT检测获得的结果完全相符。说明该方法具有快速、有效、重复性好等优点,具有代替传统VNT的潜能。
- 宋一鸣杨洋张志东
- 关键词：病毒中和试验终点法
- 一种绵羊痘、羊口疮二联细胞弱毒疫苗及其制备方法和用途
- 本发明公开了一种绵羊痘、羊口疮二联细胞弱毒疫苗及其制备方法和用途。本发明的一种绵羊痘、羊口疮二联细胞弱毒疫苗，其有效成分为本发明发明人自行分离且经传代致弱培养后获得的绵羊痘病毒、羊传染性脓疱病毒细胞传代致弱毒或其传代毒，...
- 王光祥张志东尚佑军刘湘涛王艳华吴锦艳陈妍张克山田宏尹双辉
- 文献传递
