张京生
- 作品数：35 被引量：174H指数：7
- 供职机构：军事医学科学院生物工程研究所更多>>
- 发文基金：“十一五”国家科技攻关计划国家高技术研究发展计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学自动化与计算机技术更多>>
- CT－B信号肽基因的化学合成及克隆
- 1994年
- 利用固相化学合成的方法合成了霍乱毒素Ｂ亚单位信号肽基因，并将该基因插入到ｐＢＲ３２２载体上，构建成一个可在不同相位插入异源基因的分泌表达载体。经菌落原位杂交和酶切等方法筛选出正确的克隆，为进一步研究异源表达蛋白的分泌提供了条件。
- 施维马清钧刘传暄张京生
- 关键词：信号肽化学合成克隆
- 新型低基础表达Tet-on基因表达系统的构建与鉴定被引量：3
- 2008年
- 目的:构建一种新型的具有更低基础表达的Tet-on调控系统,以用于毒性蛋白及+RNA病毒的真核细胞调控合成。方法:对目前常用的Tet-on系统中的四环素调控蛋白(rtTA、tTS)的表达途径进行改进,使得在非诱导条件下调控蛋白的基础诱导活性进一步降低。结果:相比原有的Tet-on系统,新构建的Tet-on系统非诱导状态下的基础表达值下降了一半以上。结论:成功构建基础表达值更低的Tet-on调控系统,为真核调控表达毒性蛋白或合成+RNA病毒打下了基础。
- 胡伟李玉霞凌焱毛赟赟宋兰高原段海清周围张京生陈惠鹏梁龙
- 关键词：TET-ON
- 用Red系统敲除大肠杆菌O157∶H7的ecs4553以及ecs4563基因被引量：6
- 2007年
- 目的:用Red系统快速敲除肠出血性大肠杆菌O157∶H7中的分子伴侣基因,构建EHEC O157∶H7的突变体。方法:本研究首先合成一对引物(每一条的5′端与ecs4553或者ecs4563基因同源,3′端与卡那霉素抗性基因同源),用pKD4为模板扩增出带有卡那霉素抗性基因的PCR产物,然后电击转化至大肠杆菌中,在λRed重组系统的帮助下,通过卡那霉素抗性基因两侧的ecs4553或者ecs4563基因序列在体内与ecs4553或者ecs4563基因发生同源重组,置换掉基因组中的ecs4553或者ecs4563基因,最后利用卡那霉素抗性基因两端的FRT位点,通过FLP位点专一性重组将卡那霉素抗性基因剔除。结果:获得了ecs4553或者ecs4563基因被精确敲除且不带卡那霉素抗性基因的EHEC O157∶H7突变菌株。结论:为进一步研究EHEC O157∶H7的致病机制奠定了基础。
- 刘徐兵周围李玉霞张京生凌焱胡伟张书祥张部昌段海清梁龙
- 关键词：大肠杆菌O157:H7RED同源重组
- 薄层扫描法测定寡核苷酸含量被引量：4
- 1993年
- 建立了薄层扫描测定寡核苷酸含量的新方法.与传统方法相比,该方法具有简单、微量、样品间无交叉污染等优点,该方法的线性方程 Y=—155.7+0.1428X),相关系数(r=0.9989),线性范围(10—3000ng),平均回收率(97.33%)及平均变异系数(5.5%)均属优良.
- 王升启马立人张京生石成华
- 关键词：薄层扫描寡核苷酸
- CTB与HCV抗原决定簇融合蛋白的抗原性及其在抗HCV ELISA试剂盒中的应用
- 1994年
- 系统研究了通过霍乱毒素B亚基与HCV的4个抗原决定簇进行基因融合所表达的12种融合蛋白中HCV抗原决定簇的反应原性,探索了以融合蛋白为抗原,进行抗-HCV检测的途径。结果表明,多数融合蛋白中HCV抗原决定簇均能与对应的HCV抗体结合。以融合蛋白95082为抗原研制的抗-HCV ELISA试剂检测122名献血员血清,结果与美国雅培公司抗-HCV ELISA试剂检测的结果完全一致,经药品生物制品检定所检定,其特异性、灵敏度、精密性及稳定性均达到国家卫生部抗-HCV ELISA试剂的暂行检定标准。
- 曹诚马清钧于公义石成华李平李杰之佟义贞张艳红张京生
- 关键词：基因融合丙型肝炎病毒
- 乙肝PreS_2抗原决定簇和霍乱毒素B亚基基因的融合与表达
- 1994年
- 本研究通过全化学法按大肠杆菌密码偏性合成了HBV PreS_2抗原决定簇基因,与ctxB基因的3’端融合。重组质粒转化大肠杆菌后融合基因得到高效表达,表达量达30μg/ml,表达产物95％以上分泌到胞外。表达的融合蛋白能与神经节苷脂GM1结合,说明融合蛋白保持了CTB的基本高级结构和生物学功能;ELISA实验证明融合蛋白具有CTB和HBV PreS_2的抗原性;应用亲和层析纯化后得到了电泳纯融合蛋白制品,为研究融合蛋白的免疫原性并进一步构建基因工程肽苗奠定了基础。
- 石成华曹诚张京生马清钧
- 关键词：基因融合乙型肝炎病毒抗原决定簇
- 丙肝抗原决定簇与CTB的融合、表达及融合蛋白的纯化
- 1994年
- 通过固相化学合成法合成了编码丙型肝炎病毒(HCV)结构区和非结构区的4个抗原决定簇基因,这些抗原决定簇基因片段以不同方式串联后与ctxB基因融合,构建了12种表达不同嵌合蛋白的重组质粒,各重组质粒转化大肠杆菌后均能高效分泌性表达融合蛋白,表达产量在10～50μg/ml之间,随所融合的抗原决定簇不同而不同,表达水平主要与抗原决定簇的氨基酸组成有关,而与抗原决定簇的大小及串联次数关系不大。融合蛋白通过亲和层析纯化,达到了电泳纯,为进一步研究融合蛋白的抗原性及用作抗-HCV ELISA诊断试剂抗原打下了基础。
- 曹诚马清钧于公义石成华李平李杰之张艳红张京生
- 关键词：基因融合抗-HCVELISA丙型肝炎病毒
- 恶性疟原虫多抗原表位基因的融合与表达被引量：3
- 1996年
- 以霍乱毒素Ｂ亚基（ＣＴＢ）基因为载体，构建了含不同抗原表位的恶性疟原虫的融合基因ＣＴＢ／ＡＴＥ和ＣＴＢ／ＡＷＴＥ。前者除含有恶性疟原虫裂殖子表面主要抗原表位杂合多肽基因ＳＰｆ６６外，还含有很强的Ｔ辅助细胞表位ＣＳＴ３和Ｔｃ细胞表位；后者在此基础上将我国发现的Ｂ细胞表位ＮＫＮＤＤ基因经８次串联后融合其中。两种形式的融合基因经测序正确后转入大肠杆菌ＴＫ１０４６中，产量分别为１０ｍｇ／Ｌ及５ｍｇ／Ｌ。表达产物ＣＴＢ／ＡＷＴＥ经亲和层析纯化双抗夹心ＥＬＩＳＡ测定表明，该融合蛋白在保留了与抗ＣＴＢ抗体结合的同时，与抗ＮＫＮＤＤ单抗的结合效价达１：８０００。
- 袁清安石成华曹诚张京生马清钧
- 关键词：恶性疟原虫抗原表位融合基因抗原性
- EGFR基因突变及HER2/HER3蛋白表达水平与吉非替尼治疗晚期非小细胞肺癌疗效的关系被引量：9
- 2010年
- 背景与目的:吉非替尼治疗非小细胞肺癌(NSCLC)的疗效不一,如何选择对吉非替尼敏感的患者,提高药物的疗效是临床中的难点。本研究探讨了中国人群中表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)的突变及HER2/HER3蛋白表达与吉非替尼治疗局部晚期或转移性NSCLC疗效的关系。方法:2002年5月至2005年2月,符合入组条件的106例患者每日口服250mg吉非替尼一次,直至疾病进展或出现不可耐受的毒副反应。收集吉非替尼治疗前的肿瘤组织。提取基因组DNA后,采用nest PCR技术扩增EGFR基因的18～24外显子,并从正反两个方向进行DNA测序和分析。同时采用免疫组化法检测84例肿瘤组织中的HER2/HER3蛋白的表达。结果:106例肿瘤标本中32例(30.2%)发生了突变。HER2高表达患者的有效率显著高于低表达的患者(36.8%vs.17.4%,P=0.044)。HER2/HER3的表达水平与疾病进展时间(TTP)及总生存期(OS)无关,但HER2/HER3高表达的患者生存期较低表达组略长(9.1个月vs.6.1个月,P=0.725;9.0个月vs.6.1个月,P=0.862)。而HER2和HER3同时高表达的患者,这种趋势更为明显。EGFR基因突变伴HER2高表达及HER2/HER3同时高表达的患者对吉非替尼更敏感。结论:对于中国人群,联合检测肿瘤组织中EGFR基因突变及HER2/HER3蛋白表达水平可以更好地预测吉非替尼对晚期NSCLC的疗效。
- 韩宇徐建明段海清张杨刘晓晴张京生
- 关键词：吉非替尼基因突变疗效
- 恶性疟原虫杂合多肽抗原与霍乱毒素B亚单位融合基因在大肠杆菌中的表达
- 1994年
- 目前疟疾因其发病率较高,分布范围广,恶性疟病程凶险和无特效疫苗用于预防而倍受关注,研制有效的疫苗刻不容缓。由于用常规方法难以研制抗疟疫苗,不少实验室都在尝试用多肽化学合成和基因重组等生物高技术来解决这一世界性难题。
- 夏东翔马清钧李杰之曹诚张京生石成华王昌才钟雄霖陈仕荣
- 关键词：霍乱毒素恶性疟原虫融合基因疟病
