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Fas基因mRNA反义靶点筛选和体外验证: 2006年; 应用PARASS(poly-A anchored RNA accessible sites screening)技术筛选Fas基因mRNA获得3个潜在反义作用靶点,靶点1、2、3分别位于Fas基因297nt-317m、619nt～639nt和662nt- 682nt。设计了对应靶点的反义寡核苷酸A1、A2、A3和10-23型DNAzyme D1、D2和D3。将反义寡核苷酸和Fas基因RNA结合再加入RNase H进行反应,10-23型DNAzyme则直接与Fas基因 RNA作用,结果表明:3个靶点的反义寡核苷酸组及DNAzyme均能降解Fas基因RNA,为有效靶点,其靶点反应优势次序为靶点3>靶点1>靶点2。而非靶点对照组和有效靶点突变了2个碱基的对照组均没有反应。靶点2和靶点3与ISIS公司经过多次实验筛选到的Fas反义作用靶点位置基本相同,表明PARASS技术的有效性和可靠性。获得的有效反义寡核苷酸和DNAzyme为后续研究打下基础。; 左刚韩慧明田晓丽王全会毛建平; 关键词：FAS

减肥与新型植物蛋白Phase II: 2005年; “减肥是时尚，药物减肥是热点。本文作者例述了各种化学药物减肥的利弊之余，把人们的视线拉向了Phase II——一种应用于减肥的新型植物蛋白。”; 左刚; 关键词：PHASE 植物蛋白减肥 II 化学药物

硒与金属硫蛋白对小鼠肝损伤的防护作用研究被引量：2: 2006年; 应用蛋白质芯片和RT-PCR技术研究硒对小鼠肝脏金属硫蛋白(Metallothionein,MT)的诱导表达;以蛋白质芯片技术为主要实验手段研究CCl4诱导的小鼠肝脏损伤后血清及肝脏蛋白质图谱变化,寻找小鼠血清及肝脏组织损伤标志物,同时观察有机硒(麦硒康,Organ-Se)对损伤的防护作用,结果表明与对照组相比给予有机硒后的小鼠肝脏MT表达明显;比较肝损伤组及用药组(Organ-Se)的血清及组织蛋白质表达图谱变化,发现血清中存在3个具有统计学意义的标志物:5062.5Da、5566.5Da、6358.5Da;肝脏组织中有4个具有统计学意义的标志物:5449.6Da、7131·5Da、9903.2Da和10767.3Da;与损伤组相比预先保护组(Organ-Se)的血清及肝脏标志物的表达水平接近正常组。实验表明非金属元素硒,尤其是有机硒同金属元素(如锌)一样,能够有效诱导MT的表达,为今后进一步开展硒代金属硫蛋白的机制研究奠定了基础;同时在对小鼠肝损伤保护的研究中发现,有机硒具有明显的肝损伤保护作用,是一种较有前途的值得开发的肝损伤防护药。; 田晓丽唐欣左刚毛建平郭军华; 关键词：硒金属硫蛋白蛋白质芯片

10-23型脱氧核酶对mRNA表达的双重抑制作用被引量：2: 2005年; 目的:10-23型脱氧核酶是脱氧核糖核酸酶中的一种,能主动在RNA分子嘌呤-嘧啶结合点切割所有RNA分子,通过比较反义寡核苷酸的作用,初步研究10-23型脱氧核酶对基因表达抑制作用的发生机制。方法:采用体外转录GFP mRNA与脱氧核酶反应,以及GFP表达质粒与脱氧核酶共转染HeLa细胞,观察脱氧核酶对GFP的抑制作用。结果:体外和胞内实验均显示据靶点设计的10-23型脱氧核酶对绿色荧光蛋白mRNA具有切割作用。当10-23型脱氧核酶的两翼结合臂各具有连续8碱基互补而处在两翼结合臂和酶解核心连接处的2碱基错配时,尽管不能切割mRNA但是在胞内仍然有表达抑制作用;而当两翼结合臂具有4互补碱基紧接1错配碱基和4互补碱基时,10-23型脱氧核酶体外和胞内均丧失作用。结论:10-23型脱氧核酶对基因较强的表达抑制作用来自结合臂的反义寡核苷酸依赖的RNase H降解,和本身对mRNA直接切割作用的叠加,即10-23型脱氧核酶在细胞内具有对基因识别切割和诱导RNase H进行再切割的双重作用。; 王全会左刚施水兰赵增强崔玉芳毛建平; 关键词：MRNA 反义寡核苷酸基因表达

绿色荧光蛋白基因mRNA反义寡核苷酸的筛选和应用被引量：6: 2005年; 基因mRNA的靶点筛选是设计反义寡核苷酸的关键.建立了PARASS(polyAanchoredRNAaccessiblesitesscreening)方法,即通过在mRNA末端引入polyA,与生物素标记的polyT退火结合,将其同链亲和素磁珠混合,使mRNA通过3’末端得到固定,保持mRNA的自然伸展和折叠,与寡核苷酸文库杂交筛选mRNA的结合靶点.PARASS筛选获得了绿色荧光蛋白(GFP)mRNA的3个反义寡核苷酸结合靶点,据其设计了多条反义寡核苷酸,与对照组相比,体外RNaseH分析显示3个靶点均为有效,在HeLa细胞内针对靶点的反义寡核苷酸能抑制GFP的表达,得到了Northern印迹结果支持.PARASS对反义寡核苷酸药物设计具有应用价值.; 毛建平王全会施水兰袁国刚左刚崔玉芳毛秉智; 关键词：MRNA 反义寡核苷酸靶点 GFP

转录水平siRNA介导的基因沉默被引量：4: 2005年; siRNA(smallinterferenceRNA)在转录后水平有效地沉默基因表达的现象称为RNAi(RNAinterference,RNA干涉),传统认为它能在转录后水平上有效地沉默基因的表达(posttranscriptionalgenesilence,PTGS)。然而,最近实验研究表明,siRNA是一些甲基化转移酶活化的起始信号,在siRNA的作用下,甲基化转移酶使DNA区域包括胞嘧啶鸟嘌呤核苷酸连续区(称为CG岛),CNG(N:A/T/C/G),CHH(H:A/C/T)中的胞嘧啶核苷C和组蛋白H3亚基第9个赖氨酸K(lysineresidueK9inhistoneH3,H3K9)发生甲基化,基因表达为此而受到抑制,即siRNA能在转录水平调控基因的表达(transcriptionalgenesilence,TGS).同时,siRNA在异染色质的形成中也起着重要的作用,RNAi突变会激活原异染色质区域中沉默基因的表达。; 左刚毛建平; 关键词：SIRNA 表观遗传异染色质

10-23型DNA酶作为鉴定mRNA靶点有效性的新工具被引量：5: 2005年; 10-23DNA酶是能主动切割mRNA的一类反义寡核苷酸.利用10-23DNA酶的直接切割作用验证mRNA结构靶点的有效性.对筛选的绿色荧光蛋白(GFP)基因mRNA的4个靶点平行设计了4条反义寡核苷酸和4条10-23DNA酶,对照组反义寡核苷酸将最佳靶点——靶点2的反义寡核苷酸突变2个碱基,对照组10-23DNA酶将靶点2的10-23DNA酶结合臂中央突变2个碱基.体外4条10-23DNA酶切割mRNA的结果和相应的4条反义寡核苷酸依赖的RNaseH降解结果完全相似,细胞内4条10-23DNA酶对绿色荧光蛋白的表达抑制作用与相应的4条反义寡核苷酸相似,表明10-23DNA酶显示的最佳作用靶点同样是最佳作用效果的反义寡核苷酸结合靶.10-23DNA酶可以作为评价mRNA结构靶点有效性的新工具.; 毛建平王全会韩慧明袁国刚左刚邵世和毛秉智; 关键词：DNA酶 MRNA 靶点有效性反义寡核苷酸绿色荧光蛋白

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左刚