孔霞
- 作品数：56 被引量：244H指数：9
- 供职机构：湖北医药学院附属人民医院更多>>
- 发文基金：湖北省自然科学基金国家自然科学基金湖北省高等学校优秀中青年科技创新团队计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 携带绿色荧光蛋白基因的重组腺病毒的构建及其在人血管平滑肌细胞中的表达被引量：6
- 2009年
- 目的:构建携带绿色荧光蛋白(Green Fluorescent Protein,GFP)基因的重组腺病毒质粒pAd-GFP,制备重组腺病毒Ad-GFP,并使GFP在血管平滑肌细胞中得到高效表达。方法:将线性化的穿梭质粒pRNAT-H1.1与腺病毒骨架质粒pAdeasy-1在感受态BJ5183内进行同源重组,并筛选出阳性重组子pAd-GFP;用Pac I酶切线性化pAd-GFP,线性化的腺病毒质粒经脂质体转染AD293细胞,进行重组腺病毒的包装和扩增。采用CsC1密度梯度离心进行病毒浓缩和纯化。获得的腺病毒感染人血管平滑肌细胞(human vascular smooth muscle cell,hVSMC),观察其感染效率和GFP表达水平。结果:通过Pac I酶切证实腺病毒载体构建成功,包装出携带GFP基因的腺病毒,滴度达到4.5×1012pfu/mL,获得的腺病毒对hVSMC的感染效率约为100%。结论:利用细菌内同源重组方法成功地构建了携带绿色荧光蛋白的重组腺病毒,并能够在hVSMC细胞中高效地表达,为利用GFP作为报告基因的研究奠定了实验基础。
- 张蕾王家宁郭凌郧孔霞杨建业唐俊明黄永章郑飞
- 关键词：报告基因绿色荧光蛋白人血管平滑肌细胞RNA干扰
- 35例成人水痘临床分析被引量：3
- 2012年
- 目的分析成人水痘临床表现的特点,为预防和治疗成人水痘提供有效的经验。方法对我院皮肤科在2006年1月—2011年1月收治的35例成人水痘患者进行回顾性分析。结果成人水痘的临床表现与儿童患者相比病程长、全身症状重伴高热。结论成人水痘起病急、高热、皮损重、全身症状明显,应注意成人水痘的鉴别诊断;在高发季节,对高发人群应做好预防工作。
- 孔霞王雄
- 关键词：成人水痘症状
- hSDF-1α/CXCR4介导骨髓源间充质干细胞迁移的信号转导被引量：5
- 2007年
- 目的:利用Boyden chamber体外迁移体系初步探索基质细胞衍生因子-1(SDF-1)在骨髓源间充质干细胞(MSC)迁移中的作用及其信号转导机制.方法:采用经典的全骨髓贴壁法培养MSC,通过成骨、成脂肪等多向诱导分化以及流式细胞仪分析其表面标记(CD133,CD34,CD90,CD105)等鉴定MSC特征;以P3-MSC为实验材料,利用Boyden chamber体外迁移体系,观察不同浓度的hSDF-1对MSC迁移的影响,以50nmol渥曼青霉素,10mmol LY294002,50mmol PD98059,10mmol U73122,0.1g/L AMD3100等不同处理P3-MSC,观察最适宜浓度的hSDF-1对MSC迁移影响的信号转导机制.结果:培养的MSC呈现出CD90,CD105强阳性,具有成骨、成脂肪等多向分化能力;MSC体外迁移能力随着hSDF-1α浓度(1,10,100,500μg/L)的递增而逐渐增强,并且hSDF-1α浓度在100μg/L时,MSC迁移到滤膜上的细胞数接近于峰值;渥曼青霉素,LY294002,PD98059,U70312,AMD3100,维拉帕米对MSC迁移均有影响,其中U73122,AMD3100对MSC迁移阻断的效应最显著.结论:SDF-1/CXCR4所介导的MSC迁移与丝裂原活化蛋白激酶(MAPK),磷脂酰肌醇特异性磷脂酶C和蛋白激酶C(PKC)等信号途径有关,且PKC途径可能处于中心环节.
- 王新均唐俊明孔霞郭凌郧杨建业郑飞陈龙黄永章王家宁
- 关键词：间充质干细胞迁移蛋白激酶C信号转导
- 丹参酮Ⅱ A联合顺铂对Hela细胞生长及p53蛋白表达水平的影响被引量：3
- 2007年
- 目的:研究丹参酮Ⅱ A联合顺铂在体外对宫颈癌Hela细胞生长的影响及细胞中p53蛋白表达水平的变化。方法:采用MTT法测定丹参酮Ⅱ A联合顺铂对Hela细胞增殖的影响;HE染色法观察细胞的形态学变化;流式细胞仪检测药物作用后的细胞凋亡情况;Western Blot测定p53蛋白水平的表达。结果:丹参酮ⅡA联合顺铂用药组比同等剂量的两药单用组及对照组对Hela细胞的增殖抑制率高(P<0.05);对照组细胞未见凋亡,而两药单用组及联合组均可见细胞凋亡;药物处理组均可检测到细胞亚G1峰,两药联合组细胞亚G1峰与单药组差异显著;在只含溶媒组、丹参酮Ⅱ A组、顺铂组及丹参酮Ⅱ A联合顺铂组中p53蛋白水平表达逐步升高。结论:丹参酮Ⅱ A联合顺铂比两药单用能显著抑制Hela细胞的生长;二者通过增加p53蛋白的表达,促进细胞凋亡。
- 周爱枝胡平任青周玉萍黄光荣孔霞郭凌郧郑飞
- 关键词：顺铂P53子宫颈癌
- 不同转染方式对腺病毒介导的基因转染效率的影响
- 2010年
- 目的:研究携带绿色荧光蛋白(Green Fluorescent Protein,GFP)基因的重组腺病毒在大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)中的表达。方法:将纯化的GFP重组腺病毒分别用单次转染和多次转染两种不同方法转染MSC,观察其感染效率和GFP表达水平。结果:培养的MSC呈CD90和CD105强阳性,且具有成骨、成脂肪等多向分化能力;携带绿色荧光蛋白基因的重组腺病毒单次转染和多次转染P3代MSC都呈现出浓度依赖性;单次转染在80MOI时转染效率最高,而多次转染在20MOI时转染效率即已达90%。结论:建立稳定、高效表达Ad-GFP的骨髓间充质干细胞实验体系,为MSC的标记及示踪奠定基础。
- 孔霞郭凌郧张蕾郑飞杨建业黄永章唐俊明王家宁
- 关键词：腺病毒绿色荧光蛋白转染骨髓间充质干细胞
- 融合蛋白PEP-1-SOD1预处理对缺氧/复氧人脐静脉内皮细胞保护作用的实验研究被引量：9
- 2007年
- 目的构建原核表达载体 pET15b-PEP-1-SOD1,观察表达的融合蛋白 PEP-1-SOD1能否转导入人脐静脉内皮细胞,以及转导的 PEP-1-SOD1融合蛋白能否减轻人脐静脉内皮细胞的缺氧/复氧损伤。方法构建原核表达载体 pET15b-SOD1和 pET15b-PEP-1-SOD1,分别转化基因工程菌 BL21(DE3),表达出 N 端带有6个组氨酸"标签"的 SOD1和 PEP-1-SOD1融合蛋白。将纯化后的融合蛋白加入体外培养的人脐静脉内皮细胞,观察这种融合蛋白的转导能力及其在细胞内的活性。采用体外培养的人脐静脉内皮细胞建立缺氧/复氧损伤模型,检测不同浓度的 PEP-1-SOD1对氧化应激损伤的人脐静脉内皮细胞的生存率、乳酸脱氢酶和丙二醛含量的影响。结果 PEP-1-SOD1融合蛋白能高效地转导入体外培养的人脐静脉内皮细胞,并表现出剂量依赖性和时间依赖性的特点,2μmol/L PEP-1-SOD1-30 min 组 SOD1酶活性为(60.88±6.73)U/ml,显著高于对照组酶活性(41.06±4.19)U/ml,P<0.01,转导入细胞内的 PEP-1-SOD1融合蛋白的活性可以维持至24 h。PEP-1-SOD1各浓度组均提高缺氧/复氧人脐静脉内皮细胞的生存率,减少乳酸脱氢酶的释放量,降低丙二醛含量。结论 PEP-1-SOD1融合蛋白能直接以天然有活性的形式转导入人脐静脉内皮细胞内,且能明显减轻人脐静脉内皮细胞的缺氧/复氧损伤。这种蛋白转导方式,为用 SOD1防止在体缺血/再灌注损伤的研究奠定了基础。
- 王家宁丁鹏黄永章骆丽娜郭凌郧孔霞邵芳
- 关键词：再灌注损伤超氧化物歧化酶人脐静脉内皮细胞
- HPV亚型外周血T细胞亚群与尖锐湿疣复发关系的研究
- 王雄王珏孔霞鲁英陈荣川张敏张青松梁晓红陈玉杰等
- 尖锐湿疣又称为尖圭湿疣或性病疣，是一种主要发生在男女性外生殖器和肛门部位皮肤粘膜的疾病。除发病率高，危害大外，尖锐湿疣另一个棘手的问题是容易复发。多数尖锐湿疣患者在其损害被治愈后会再发，而且有少数患者尖锐湿疣复发可反复复...
- 关键词：
- 关键词：尖锐湿疣外周血T细胞亚群分子生物学方法复发原因分析
- 丹参酮ⅡA对人卵巢癌A2780细胞增殖抑制及诱导凋亡的作用被引量：13
- 2009年
- 目的研究丹参酮ⅡA(TanⅡA)对人卵巢癌A2780细胞增殖抑制及诱导凋亡的作用。方法以四甲基偶氮唑蓝(M TT)法测定TanⅡA对人卵巢癌A2780细胞的增殖抑制;流式细胞仪检测细胞周期。结果TanⅡA对人卵巢癌A2780细胞的生长具有抑制作用,其作用强度随药物作用时间及浓度的增加而增强。实验组较对照组G0/G1期细胞数量增多,而S期细胞数量减少。4.0mg/L TanⅡA作用0、24、48、72h后的凋亡率分别为4.52%、19.7%、25.3%、40.4%,随时间的延长而凋亡细胞增多。结论TanⅡA对人卵巢癌A2780细胞有明显的增殖抑制和诱导凋亡的作用,且其作用呈时间-剂量依赖性。
- 祝敏陈萍陈丹石小燕孔霞郭凌郧郑飞
- 关键词：TAN卵巢癌
- 鸦胆子油乳对人卵巢癌耐药细胞A2780/DDP的耐药逆转作用被引量：5
- 2009年
- 目的研究鸦胆子油乳对人卵巢癌耐药细胞A2780/DDP的耐药逆转作用。方法四甲基偶氮唑蓝(MTT)法观察顺铂及鸦胆子油乳对A2780/DDP细胞的生长抑制作用。结果卵巢癌耐药细胞株A2780/DDP对顺铂产生耐药性,顺铂对A2780/DDP的耐药倍数为5.6倍。经鸦胆子油乳预处理24h后,顺铂对A2780/DDP的耐药倍数显著下降。结论鸦胆子油乳可逆转卵巢癌耐药细胞A2780/DDP的耐药性。
- 陈丹陈萍祝敏石小燕潘东风孔霞郑飞郭凌郧
- 关键词：鸦胆子油乳卵巢癌耐药逆转剂
- 间充质干细胞条件培养液对人脐静脉内皮细胞增殖、迁移和黏附的影响被引量：2
- 2012年
- 本研究探索间充质干细胞(MSC)条件培养液对人脐静脉内皮细胞增殖、迁移和黏附能力的影响及其可能的机制。采用经典全骨髓贴壁法培养MSC,用流式细胞术鉴定MSC表面标志特征。收集MSC条件培养液(MSC-CM),过表达基质细胞细胞衍生因子1(SDF-1)的MSC条件培养液(Ad-SDF-1-MSC-CM),以2%FBS-DMEM、15%FBS-DMEM培养液为对照,将MSC-CM、Ad-SDF-1-MSC-CM等条件培养液加入人脐静脉内皮细胞株(CRL1730)作用24 h后,用MTT法检测CRL1730细胞的增殖情况,利用划痕法和黏附模型评价MSC-CM对CRL1730细胞迁移能力和黏附能力的影响。结果表明,与MSC-CM相比,Ad-SDF-1-MSC-CM处理的CRL1730细胞表现出更强的增殖能力,加入阻断剂AMD3100后,MSC-CM所介导的促增殖效应明显降低。MSC-CM、Ad-SDF-1-MSC-CM促进CRL1730细胞的迁移,AMD3100明显抑制其所介导的CRL1730细胞迁移。与MSC-CM相比,Ad-SDF-1-MSC-CM处理的CRL1730细胞黏附能力明显增强,AMD3100能显著降低其增强CRL1730黏附能力的作用。结论:MSC-CM对CRL1730细胞的促增殖、迁移和黏附能力与其分泌的细胞因子SDF-1密切相关。
- 郑飞李霞张蕾孔霞郭凌陨杨建业黄永章唐俊明王家宁
- 关键词：间充质干细胞条件培养液脐静脉内皮细胞细胞增殖细胞黏附细胞迁移
