姚立红
- 作品数：23 被引量：309H指数：5
- 供职机构：中国预防医学科学院更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家杰出青年科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子cDNA 5'端的修饰提高其在大肠杆菌的表达被引量：19
- 1993年
- 应用聚合酶链反应(PCR)法和人工合成的寡聚DNA引物,对人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)的cDNA作了修饰。在不改变氨基酸的前提下,将一些G或C改成A或T,以避免形成不利的二级结构,并将一些密码子换成大肠杆菌喜用的密码子。修饰后的GMCSF cDNA在大肠杆菌的表达水平高于其母株。SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳表明其表达量约占菌体总蛋白的20％,免疫学和生物学活性检测表明该表达产物具有天然GM-CSF的构型和生物学活性。部分纯化的重组人GM-CSF已用于维持依赖人GM-CSF的TF-1细胞系的生长。
- 张智清张颖路秀华王世骢邵魁马丽娟李玉英周圆姚立红贺秉坤侯云德
- 关键词：粒细胞巨噬细胞集落刺激因子
- 甲状旁腺素相关蛋白cDNA的克隆及其在大肠杆菌中的表达被引量：2
- 1999年
- 采用ＲＴＰＣＲ方法从中国人肾癌细胞株中克隆到甲状旁腺素相关蛋白（Ｐａｒａｔｈｙｒｏｉｄｈｏｒｍｎｏｅｒｅｌａｔｅｄｐｒｏｔｅｉｎ，ＰＴＨｒＰ）ｃＤＮＡ，其核苷酸序列与国外发表资料相比，有６个核苷酸不同，其中仅９２位密码子的不同导致氨基酸变异，即由脯氨酸变为丝氨酸。将克隆的ＰＴＨｒＰｃＤＮＡ插到原核表达载体ｐＥＴ３ａ的Ｔ７噬菌体启动子下游，转化大肠杆菌后得到高效表达，并经Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ和生物学活性检测对表达产物作了鉴定。
- 刘红兵熊卫东安乃莉姚立红钭理强张智清
- 关键词：甲状旁腺素相关蛋白克隆
- 利用噬菌体抗体库技术制备抗甲状旁腺激素相关蛋白Fab小分子抗体
- 2000年
- 目的 利用噬菌体抗体库技术制备抗甲状旁腺激素相关蛋白 (PTHrP)Fab抗体。方法从经PTHrP免疫的Balb/C小鼠脾细胞提取总RNA ,用逆转录 聚合酶链反应 (RT -PCR)扩增一组Ⅰg轻链和重链Fab段基因 ,插入噬菌体载体pComb3,构建了抗PTHrPFab抗体基因库。用合成短肽和重组PTHrP对抗体库进行了富集筛选 ,获得鼠源抗PTHrPFab段基因后 ,进一步在大肠埃希菌表达 ,并对表达产物的特异性作了鉴定。结果 成功构建了抗PTHrP抗体基因库 ,且筛选到PTHrP特异的鼠源单抗Fab段基因。结论 所获得的Fab抗体能特异性地识别PTHrP抗原。
- 钭理强梁米芳安乃莉姚立红郭应禄张智清
- 关键词：甲状旁腺激素相关蛋白噬菌体FAB段
- 流行性感冒病毒M2蛋白可溶性表达及其免疫原性的研究被引量：6
- 2001年
- 流行性感冒 (流感 )病毒的M2蛋白是其保护性抗原之一 ,在几乎所有甲型流感病毒中高度保守 ,因此可以用来研究具有交叉保护能力的流感疫苗。然而M2分子在病毒颗粒中含量非常少 ,用从病毒中纯化的方法很难获得足够的免疫原。在原核表达时发现 ,M2蛋白对宿主菌具有很强的毒性作用 ,导致其死亡 ,因此很难获得高表达。在本研究中 ,采用RT PCR方法从病毒感染的MDCK细胞中克隆了A1/PR/ 8/ 34毒株的M 2基因 ,然后通过基因工程手段缺失了M 2蛋白的跨膜区 2 6～ 5 5位氨基酸的编码序列 ,将其克隆到 pET 32a中 ,与硫氧还蛋白融合 ,在大肠杆菌中获得了高效表达 ,并且表达产物以可溶形式存在 ,不形成包涵体。利用硫酸铵盐析结合金属离子鏊和柱亲和层析的方法纯化了表达的融合蛋白。免疫荧光实验表明 ,融合蛋白免疫小鼠后产生的抗血清能够与流感病毒感染的细胞发生特异性的结合 ,证明表达产物具有流感病毒M2蛋白的抗原性。
- 张立国曾革非董婕陈爱君姚立红郭元吉张智清
- 关键词：流行性感冒病毒可溶性表达免疫原性
- 人血管内皮细胞生长因子在大肠杆菌中的表达及纯化
- 2000年
- 目的 为了获得大量重组人血管内皮细胞生长因子（ Ｈｕｍａｎ Ｖａｓｃｕｌａｒ ＥｎｄｏｔｈｅｌｉａｌＧｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ， ｈＶＥＧＦ），以研究其在心血管和药学领域具有的潜在药用价值。方法 用ＰＣＲ方法扩增目的基因ｈＶＥＧＦ１６５，连接到 ｐＥＴ－３ａ载体上，并转化到大肠杆菌ＢＬ２１（ＤＥ３）中，建立可高效表达的ｐＥＴ－３ａ／ｈＥＶＧＦ１６５重组质粒，经ＩＰＴＧ诱导表达， Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ检测表达产物的抗原性，通过 Ｍｏｎｏ Ｑ阴离子层析和ＦＰＬＧ Ｓｕｐｅｒｏｓｅ１２分子筛柱层析，进行初步纯化，用 ＭＴＴ法检测其生物学活性。结果 ｐＥＴ－３ａ／ｈＥＶＧＦ表达产物经纯化后，其纯度可达到９０％以上，表达的ｒｈＥＶＧＦ１６５能 呈剂量依赖性地促进人静脉内皮细胞（ＨＵＶＥＣ）的增殖。结论组建了天然形式ｈＥＶＧＦ１６５的大肠杆菌菌株，并摸索 出一套纯化工艺，为大规模生产重组ｈＥＶＧＦ１６５奠定了基础。
- 周小明曾革非钭理强安乃莉姚立红陈爱君张智清
- 关键词：血管内皮细胞因子纯化大肠杆菌
- 含P_RP_L启动子的原核高效表达载体的组建及其应用被引量：229
- 1990年
- 我们组建了一个含P_RP_L自动子的原核高效表达载体,它同时含有cI调控基因、多酶切点和两个强的转录终止序列。带起始密码子ATG的外源基因可以插入启动子下游的多酶切点,表达非融合蛋白,产品可供临床使用。我们实验室已用它成功地表达了人γ干扰素、人白细胞介素-2和人肿瘤坏死因子等,表达量均占菌体总蛋白的20％以上。
- 张智清姚立红侯云德
- 人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子在重组痘苗病毒中的表达及对重组病毒免疫效果的影响
- 1998年
- 目的观察人ＧＭ－ＣＳＦ（粒细胞－巨噬细胞集落刺激因子）对重组痘苗病毒免疫效果的影响。方法大鼠体内观察。结果从核酸和蛋白水平均证实重组痘苗病毒ＲＶＪＳＢ１１７５Ｄ／ＧＭ－ＣＳＦ可同时表达ＧＭ－ＣＳＦ及ＨＳＶ－１ｇＤ（单纯疱疹病毒ｇＤ糖蛋白），但ＲＶＪＳＢ１１７５Ｄ／ＧＭ－ＣＳＦ免疫大鼠产生的抗－ＨＳＶ１ｇＤ特异性抗体水平与ＲＶＪＳＢ１１７５Ｄ组相比无显著性差异。结论人ＧＭ－ＣＳＦ在大鼠体内对特异免疫调节作用不明显，可能与ＧＭ－ＣＳＦ主要促使非特异性细胞免疫增强所致有关。
- 刘红兵张智清姚立红侯云德
- 关键词：痘苗病毒单纯疱疹病毒GM-CSF
- 应用硫氧还蛋白促进外源蛋白在大肠杆菌的可溶性表达被引量：21
- 1999年
- 为了观察硫氧还蛋白（ＴｒｘＡ）促进外源蛋白在大肠杆菌中可溶性表达的作用，我们从质粒ｐＥＴ－３２ａ（＋）上克隆了ｔｒｘＡ基因，构建了ＴｒｘＡ表达质粒ｐＴ－ＴｒｘＡ。将该质粒与其它蛋白基因的表达质粒共同转化Ｅｃｏｌｉ并同时获得表达。结果表明，共表达ＴｒｘＡ可以明显促进外源蛋白，如甲状旁腺激素相关蛋白（ＰＴＨｒＰ）、ＰＴＨｒＰ受体（ＰＴＨｒＰ－Ｒ）和血管内皮生长因子（ＶＥＧＦ）的可溶性表达。说明共表达ＴｒｘＡ有助于外源蛋白的正确折叠，防止包涵体的形成。
- 安乃莉张智清王嵩刘红兵曾革非姚立红陈爱君
- 关键词：硫氧还蛋白共表达外源蛋白大肠杆菌
- TNF受体(P55)和IgGFc的融合蛋白在哺乳动物细胞中的表达被引量：1
- 2001年
- 目的 在真核细胞表达具有生物活性的可溶性肿瘤坏死因子 (TNF)受体蛋白 ,用于中和TNF的毒性。方法 将TNFR(P5 5 )的胞外区基因和人IgGFc段基因通过 18个碱基的凝血酶切点连接 ,克隆入真核表达载体pcDNA3 1(+ ) ,在COS7和BHK细胞分别得到目的蛋白的表达。结果 在真核表达系统表达了TNFR(P5 5 )胞外区与人IgGFc段的融合蛋白 ,免疫学实验及L92 9细胞体外实验均表明该蛋白具有TNFR(P5 5 )特异的抗原性、与TNF结合的活性以及抑制TNF的活性。结论 真核表达的融合蛋白产物具有可溶性TNF受体 (P5 5 )的生物学活性。
- 安乃莉徐春晓姚立红陈爱君曾革非张立国张智清
- 关键词：肿瘤坏死因子真核表达系统
- 重组人肿瘤坏死因子可溶性受体Ⅱ(sTNFRⅡ)的纯化被引量：1
- 2002年
- 目的 从大肠杆菌破碎液中纯化可溶性肿瘤坏死因子受体Ⅱ,获得能够中和TNF活性的受体蛋白。方法 菌体破碎液经热沉淀处理后,用金属鳌合层析柱纯化重组蛋白。并对蛋白的理化特性和生物学活性进行分析。结果 纯化的重组蛋白纯度大于95％,并且能中和TNF的生物学活性,抑制其对细胞的杀伤作用。结论该工艺能简便有效地纯化出TNF受体蛋白,为进一步深入研究奠定了基础。
- 徐春晓姚立红祖东黄国锦严馨蕊柴映爽陈爱珺张智清
- 关键词：重组人肿瘤坏死因子纯化大肠杆菌生物学活性
