刘玉刚
- 作品数：22 被引量：66H指数：6
- 供职机构：第三军医大学新桥医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金重庆市自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生文化科学更多>>
- 动物关节软骨组织总RNA提取方法
- 本发明涉及一种动物关节软骨组织总RNA提取方法，该方法有以下步骤：(1)取动物关节软骨组织，研磨，加入变性液，β-巯基乙醇，匀浆；(2)冰水浴下，加酸性水饱和酚，摇匀，加醋酸钠，氯仿、异戊醇混合液，冰水浴上15min；(...
- 初同伟刘玉刚周跃欧娟娟
- 文献传递
- 幼年新西兰白兔损伤关节软骨再生相关基因的鉴定与分析
- 2008年
- 目的克隆幼年新西兰白兔膝关节软骨损伤后主导修复的相关基因,探讨关节软骨损伤后修复机制。方法应用抑制性消减杂交技术(suppression subtractive hybridization,SSH)获得差异表达基因片断,通过PCR筛选、杂交验证、同源性检索对差异表达基因进行分析。结果成功地克隆了17个差异表达基因片断,鉴定了11个,发现6个新基因片断,在GeneBank登录并获得注册。结论所得到的差异表达基因与关节软骨细胞关系密切,为进一步研究关节软骨损伤后修复机制奠定了基础。
- 刘玉刚初同伟周跃钱奕明付建军
- 关键词：抑制性差减杂交关节软骨差异表达基因
- 应用抑制性差减杂交技术克隆幼年兔损伤关节软骨再生相关基因
- 目的构建幼年新西兰白兔软骨再生修复因子的抑制性差减基因片断文库,克隆筛选主导幼年新西兰白兔膝关节软骨损伤后自然修复的相关基因。方法应用抑制性消减杂交技术(suppression subtractivehybridizat...
- 刘玉刚初同伟
- 强直性脊柱炎活动期VEGF和TNF-α在棘间韧带组织中mRNA表达水平的检测被引量：9
- 2008年
- 目的探讨血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)和肿瘤坏死因子(tumor nerosis factor,TNF-α)在强直性脊柱炎(ankylosing spondylitis,AS)活动期患者棘间韧带的病理性表达水平。方法通过原位杂交技术检测活动期AS患者与对照组棘间韧带组织中TNF-αmRNA、VEGF mRNA的表达,用图像分析系统比较它们的表达差异,并与疾病的活动指数、CRP进行相关性分析。结果在活动期AS患者棘间韧带组织中TNF-α mRNA、VEGF mRNA呈阳性表达,而对照组棘间韧带组织中TNF-α mRNA、VEGF mRNA呈阴性表达,阳性细胞计数和图像灰度值比较有统计学差异(P<0.01)。VEGF mRNA、TNF-α mRNA的表达与AS疾病活动指数(BASDAI)和CRP显著相关(r=0.53,r=0.42,P<0.05)。结论VEGF可能是强直性脊柱炎发病过程中的重要因子之一,TNF-α作为1个核心的调控因子,在强直性脊柱炎发病机制中也起着重要作用。
- 钱奕铭初同伟李建明刘玉刚
- 关键词：强直性脊柱炎TNF-ΑVEGF原位杂交技术
- 经后路椎间盘椎弓根间截骨矫正胸腰段脊柱后凸畸形被引量：11
- 2011年
- 目的探讨经后路途径矫正胸腰段脊柱后凸畸形安全有效的手术方式。方法利用改良的经后路椎间盘椎弓根截骨椎弓根钉棒系统固定技术矫正胸腰段脊柱后凸畸形16例，男11例，女5例；年龄13岁～53岁，平均26．5岁。其中陈旧性胸腰椎骨折9例，强直性脊柱炎4例，先天性发育不良2例，椎体结核1例，X线术前Cobb角45。～85。，平均58．1°。后凸畸形部位：T10 2例，T11 2例，T12 6例，L1 3例，L2 3例。主要临床表现为腰背部不同程度疼痛，畸形进行性加重，影响工作和生活。病程4—17年，平均8．5年，所有患者均行I期截骨、植骨融合、椎弓根钉内固定术，术后卧床休息4周，外支具制动3个月。结果经后路椎间盘椎弓根截骨手术时间平均190min（125～240min），失血量平均750m1（450～1900m1），48h引流量平均170ml（100—280m1）。所有病例均为单节段截骨，截骨过程未发生椎体移位，无脊髓损伤并发症。术后矢状面畸形得到矫正，矫正度数平均55°（44°～76°），矫正率平均83％。随访10～24个月，x线片示内固定牢固，脊柱融合好，无假关节形成，无内固定松动，矫正度未见明显丢失。全部患者外观畸形明显改善，腰背部疼痛消失，生活质量大大提高。结论Ⅱ期后路经椎间盘椎弓根截骨椎弓根钉棒系统内固定技术可使脊柱后凸畸形得到一次性矫正，降低了神经、血管损伤的发生率，是一种治疗胸腰段脊柱后凸畸形安全有效的外科手术方法。
- 初同伟刘玉刚钱奕铭周跃潘勇王建李长青张正丰
- 关键词：胸椎后凸畸形截骨
- 强直性脊柱炎滑膜细胞破骨表型及分化因素的研究被引量：6
- 2008年
- 目的通过检测破骨细胞(osteoclast,OC)在强直性脊柱炎(ankylosing spondylitis,AS)骶髂关节及髋关节滑膜组织中的表达及分化因素的研究,探讨AS骨与软骨破坏机制。方法酶组织化学染色技术(TRAP染色)检测滑膜细胞破骨表型,原位杂交技术检测滑膜组织中TNF-α mRNA、VEGF mRNA、MMP-3 mRNA的表达;培养正常滑膜成纤维细胞,加入TNF-α、VEGF,培养AS滑膜成纤维细胞,加入抗TNF-α、抗VEGF,钙钴法检测碱性磷酸酶(ALP)表达,放射免疫法检测骨钙素(bone gla protein,BGP)含量,分析其在AS滑膜成纤维细胞成骨中的作用。结果经TRAP染色,TNF-α mRNA、VEGF mRNA和MMP-3 mRNA在AS滑膜组织中阳性表达,而对照组阴性表达,两组比较有统计学差异(P<0.01);AS组滑膜TRAP染色阳性细胞同时表达MMP-3;AS组滑膜成纤维细胞培养ALP染色阳性数、BGP分泌增加值与正常对照组比较有统计学差异(P<0.01);TNF-α、VEGF单克隆抗体可以抑制滑膜成纤维细胞骨钙素的分泌。结论AS滑膜组织中表达TNF-α、VEGF,两种因子可以诱导滑膜成纤维细胞分化为成骨细胞(osteoblast,OB),在这种OB存在的条件下,滑膜组织内破骨细胞前体可以分化为成熟的OC并表达MMP-3。
- 钱奕铭初同伟周跃张峡刘玉刚李建明
- 关键词：强直性脊柱炎滑膜细胞破骨细胞原位杂交技术
- 新生大鼠脊髓损伤后大脑皮层cDNA文库中一条新基因的克隆及其相关蛋白功能的初步探讨
- 2008年
- 目的从已构建的新生大鼠脊髓损伤后大脑皮层再生相关基因文库中克隆并鉴定一条再生相关基因H3（CA854305），并对其相关蛋白功能进行初步探讨。方法用Northern印迹技术观察新基因在体内存在及其表达变化。并用电子克隆（in silico cloning）技术对该基因进行全长克隆，用DNAstar对所获序列进行生物信息学分析，用RT—PCR技术对最长的开放阅读框（ORF）进行初步验证。结果Northern印迹显示新生大鼠脊髓损伤后5d，胚胎脊髓移植组对侧大脑皮层中的H3表达与损伤组和对照组比较，差异有统计学意义，移植组强于损伤组，损伤组强于对照组，提示H3可能与再生密切相关。电子克隆获得序列的最大长度为1635bp，最大ORF位于49—591bp，结构分析符合Cozak规则。RT—PCR实验证实最大ORF序列。结论新生大鼠皮层神经元轴突中断后的再生过程中有H3基因表达增强，可能与神经元再生有关。
- 初同伟刘玉刚马海涵廖维宏伍亚民
- 关键词：基因文库脊髓损伤电子克隆
- 经后路全脊椎整块切除术在胸腰椎肿瘤中的应用被引量：6
- 2012年
- 目的探讨经后路全脊椎整块切除术(total en-bloc spondylectomy,TES)治疗脊椎肿瘤的方法与临床价值。方法我科2009年1月至2010年2月应用全脊椎整块切除术治疗脊柱肿瘤患者6例,其中男4性例,女性2例,年龄43～64岁,脊椎原发性恶性肿瘤2例,转移性脊柱肿瘤4例。病变发生在T112例,T121例,L42例,L51例。6例患者均采用单纯后侧入路,同时采用前方钛网植骨重建+椎弓根钉系统后方固定。结果 6例患者术中、术后无严重手术并发症,术后近期临床症状改善明显。随访12～24个月,均未出现局部复发,2例原发病例未出现远处转移。结论经后路脊柱肿瘤全脊椎整块切除术是治疗胸腰椎肿瘤的一种可行的手术方法,技术优势明显,能提高病灶切除率、降低局部复发率,近期随访疗效满意。
- 初同伟张莹刘玉刚潘勇周跃
- 关键词：胸腰椎肿瘤
- CD147对体外破骨细胞分化成熟的影响被引量：6
- 2010年
- 目的建立破骨细胞(osteoclasts,OCs)体外分化成熟的模型,研究CD147对OCs分化成熟的影响。方法从外周血分离单个核细胞贴壁培养,使用破骨细胞分化因子(receptor activator of nuclear factor-κβligand,RANKL)和巨噬细胞集落刺激因子(macrophage colony stimulating factor,M-CSF)诱导OCs生成。实验分为对照组、诱导组(RANKL+M-CSF)及阻断组(RANKL+M-CSF+CD147Ab),应用免疫荧光染色和流式细胞术检测CD147在破骨前体细胞(osteo-clast precursor cells,OPCs)的表达;抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate-resistant acid phosphatase,TRAP)染色观察OCs的分化成熟情况及Real-time PCR技术检测CD147及TRAP mRNA在OPCs中的表达变化。结果①CD147分子在OPCs细胞膜上表达。②流式细胞术测得细胞膜表面平均荧光强度对照组(159.55±1.65)、诱导24 h组(171.18±3.46)、诱导48 h组(178.47±4.59)逐渐增强(P<0.05),而阻断24 h组(117.69±9.01)显著减弱(P<0.01)。③阻断组TRAP染色阳性细胞(细胞核≥3)数显著少于诱导组(P<0.01),且OCs体积小。④在24、48 h诱导组CD147 mRNA相对表达量[(1.393±0.248)、(1.772+0.326)]及TRAP mRNA的相对表达量[(1.810±0.398)、(2.608±0.906)]在OPCs诱导分化过程逐渐增高,均高于相应时相点阻断组(P<0.05);且TRAP mRNA相对表达量与CD147 mRNA相对表达量呈正相关(r=0.833,P<0.01)。结论 CD147分子在OPCs细胞膜上表达且参与OCs分化成熟;抑制CD147的表达,OCs出现成熟障碍。
- 廖通权刘玉刚胡旭张莹余世明初同伟周跃
- 关键词：破骨细胞CD147分化成熟
- VEGF在强直性脊柱炎活动期病理性表达及意义
- 目的探讨血管内皮生长因子 （vascular endothelial growth factor,VEGF）在强直性脊柱炎（ankylosing spondylitis,AS）活动期骶髂关节滑膜的病理性表达及意义。方法通...
- 钱奕铭初同伟李建明刘玉刚
- 关键词：强直性脊柱炎原位杂交技术
- 文献传递
