一种具有功能性的双超分子相互作用水凝胶、制备方法及应用 本发明公开了一种具有功能性的双超分子相互作用水凝胶、制备方法及应用。水凝胶是由荧光蛋白‑高分子聚合物结合体、纳米抗体多聚体和α‑环糊精反应得到,荧光蛋白‑高分子聚合物结合体由修饰有反应位点的绿色荧光蛋白GFP和马来酰亚胺... 陈国颂 姚琳通 丁澦 胡榕婷基于多重非共价相互作用的荧光融合蛋白质微米环 被引量:2 2019年 利用蛋白质融合技术,将绿色荧光蛋白(GFP)与可二聚化的链酶亲和素突变体(SA)融合,形成二聚化融合蛋白质GFP-SA,并以此作为生物大分子自组装的构筑基元.同时,设计并合成了相应的配体分子RhYBio2,该配体中的2个生物素分子能特异性结合相邻融合蛋白中的SA,并将2个以上的二聚化融合蛋白GFP-SA排列成纳米线,随后该纳米线再通过配体中的罗丹明B分子二聚,进一步组装形成荧光蛋白质微米环.采用动态光散射(DLS)对其粒径及分布进行了表征,并利用透射电子显微镜(TEM)和激光共聚焦显微镜(confocal microscope)观察了组装体的形貌,即蛋白质微米环,其形貌规整并具有较强的荧光. 胡榕婷 王珏 杨静 丁澦 陈国颂关键词:融合蛋白 绿色荧光蛋白 自组装 筛选用于治疗或预防mHTT相关的神经退行性疾病的化合物的方法,靶蛋白,以及化合物 一种筛选用于治疗或预防mHTT相关的神经退行性疾病的化合物的方法,用于筛选的靶蛋白,以及相应的化合物。 鲁伯埙 费义艳 丁澦 党永军一种低温碱性磷酸酶及其制备方法 本发明属于基因工程领域,涉及一种新的碱性磷酸酶及其制备方法。本发明将如序列表SEQ ID NO 1所示的低温碱性磷酸酶的cDNA序列克隆到基因工程载体,表达,获得低温碱性磷酸酶。本发明依据大肠杆菌的密码子偏爱理论对TAB... 丁澦 陆致晟重组人血红素加氧酶2的表达、纯化及性质鉴定 2013年 血红素加氧酶是广泛存在于哺乳动物细胞中的一类氧化酶,催化血红素氧化生成胆绿素,同时生成三价铁离子和一氧化碳,对调节体内离子平衡,参与机体免疫反应及调节神经系统功能均有重要影响.血红素加氧酶2 (HMOX2)与血红素加氧酶1的功能相似,但分布不同且有着不同的反应动力学,但目前国内外对其研究较少.本文在获得HMOX2全长cDNA的基础上,将其克隆至高表达载体,通过自动诱导系统表达了人血红素加氧酶2重组蛋白(His10-HMOX2).每升菌液通过Ni-NTA亲和层析和Mono Q阴离子交换层析纯化,最终约可获得92.6 mg纯度为92%蛋白质样品.通过酶活检测,其活性可达到69.51 u/mg,与已报道的血红素加氧酶活性相比较,我们得到的HMOX2具有与之相当的酶活性.同时,通过改变反应温度(20 ~ 95℃),pH值(pH 6 ~9)等条件,检测了重组His10-HMOX2的催化活性,在温度为40℃和pH为8时,其活性最高.本研究为将来进一步深入了解HMOX2的生化功能及与相关疾病的关系奠定了基础. 周传文 李益鹏 丁澦关键词:原核表达 纯化 酶活 用于预防或治疗脂质代谢相关疾病的化合物 本发明涉及生物医药领域,并且具体地涉及将能够结合LC3的结构与能够结合脂滴的结构通过共价连接连接在一起,从而形成的“LC3结合部分‑脂滴结合部分‑偶联物”,其药学上可接受的盐、立体异构体、溶剂化物、多晶型、互变异构体、同... 鲁伯埙 付玉华 丁澦文献传递 用于预防或治疗脂质代谢相关疾病的化合物 本发明涉及生物医药领域,并且具体地涉及将能够结合LC3的结构与能够结合脂滴的结构通过共价连接连接在一起,从而形成的“LC3结合部分‑脂滴结合部分‑偶联物”,其药学上可接受的盐、立体异构体、溶剂化物、多晶型、互变异构体、同... 鲁伯埙 付玉华 丁澦降解致病亨廷顿蛋白的新策略 被引量:1 2019年 靶向"不可成药靶点"已成为近年原创性药物开发的一个新方向,其中,通过降解致病蛋白是最具前景的方向,目前已有方法主要是PROTAC(proteolysis targeting chimera)等技术。复旦大学鲁伯埙、费义艳及丁澦合作研究团队的最新研究通过基于化合物芯片和前沿光学方法的筛选发现了特异性靶向自噬降低亨廷顿病致病蛋白的小分子化合物,并在小鼠神经元、亨廷顿病病人细胞以及亨廷顿病果蝇模型中得到验证。以上基于自噬小体绑定化合物(autophagosome tethering compounds,ATTEC)的药物研发原创概念有望为亨廷顿病和其他多种疾病的临床治疗提供了切入点。 李朝阳 朱成钢 丁澦 费义艳 鲁伯埙关键词:靶向药物 神经退行性疾病 亨廷顿病 蛋白降解 绿色荧光蛋白结合蛋白的表达纯化与鉴定 被引量:3 2019年 绿色荧光蛋白(GFP)及其衍生物已经被广泛应用于生物化学和分子生物学研究,其纳米抗体(GBP)也已在近期被鉴定,但GBP大规模表达及纯化流程优化尚未见报道,并且GBP与不同荧光蛋白之间的亲和力尚未被测定.我们首先构建了GBP基因(GBP1)的原核表达系统,然后通过Ni-NTA亲和层析和Mono Q阴离子交换层析纯化,每升菌液能够得到超过43mg、纯度超过95%的重组GBP1蛋白.我们通过MALDI-TOF/TOF质谱法测定纯化的GBP1的精确分子量,通过微量热泳动(MST)和等温滴定量热(ITC)实验检测GBP1与7种不同来源荧光蛋白的亲和力.结果显示GBP1特异性地与源自Aequorea victoria的荧光蛋白及其衍生荧光蛋白相互作用,与RFP和Zoanthus GFP等无相互作用.GBP1与EGFP和sfGFP的亲和力最高,与YPet和T-Sapphire的亲和力稍弱,与CyPet的亲和力最低. 胡业辉 李益鹏 王紫英 陈勖 任真 丁澦关键词:荧光蛋白 蛋白纯化 基于高通量筛选的双特异性抗体纯化方法开发 2023年 双特异性抗体(BsAbs),简称双抗,是一种能同时结合两个不同靶点或表位的抗体,BsAbs在表达过程中通常伴随产生多种副产物,在纯化工艺中很难被去除。本研究运用高通量筛选技术,通过对SP Sepharose Fast Flow填料的纯化条件进行探索,建立基于Sepharose Fast Flow填料的双特异性抗体纯化方法开发的通用流程,每个筛选条件只需要0.4 mg双抗样品,可同时筛选多达32个条件,筛选过程总耗时2 h,而传统柱层析需耗时64 h。通过高通量迅速筛选方法可以有效去除双抗分子副产物,为解决纯化工艺难题提供了一种新的工艺路线。 甘远春 梁忠爽 丁澦 张为杰关键词:双特异性抗体