高玉洁
- 作品数：10 被引量：27H指数：3
- 供职机构：重庆医科大学检验医学院临床检验诊断学省部共建教育部重点实验室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金重庆市教育委员会科学技术研究项目重庆市自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 核仁磷酸蛋白突变基因表达对NIH3T3细胞增殖和凋亡的影响被引量：4
- 2010年
- 目的探讨核仁磷酸蛋白(nucleophosmin,NPM)突变基因对小鼠NIH3T3成纤维细胞系体外增殖和凋亡的影响以及其分子机制。方法通过脂质体介导将真核表达载体pEGFP-C1-NPMc+转染NIH3T3细胞,G418筛选稳定表达NPM突变蛋白细胞株,RT-PCR和Western blot检测NPM突变基因和蛋白的表达。MTT、克隆形成实验检测细胞体外增殖能力;FCM检测细胞周期分布及凋亡水平的改变,并通过对周期调控因子p21及凋亡相关分子Caspase-3活性检测,初步探讨NPM突变参与细胞恶性增殖的分子机制。结果建立了稳定表达NPM突变基因的NIH3T3细胞株。NPM-mA实验组细胞较对照组细胞增殖能力及平板克隆形成率明显增高(P<0.05);甲基纤维素集落形成实验显示各组细胞在甲基纤维素上均不能形成集落;与对照组比较,NPM-mA实验组细胞中G1期细胞比例(42.27±0.86)%显著减低(P<0.01),S期细胞比例(43.08±0.74)%显著增加(P<0.01),同时伴有p21 mRNA水平下降,稳定表达NPM突变基因的NIH3T3细胞凋亡率(1.00±0.13)%明显降低(P<0.01),Caspase-3活性(0.784±0.080)下降(P<0.01)。结论NPM突变基因可促进NIH3T3细胞体外增殖,抑制细胞凋亡发生。
- 邵会媛杨再林高玉洁苗宗玉覃凤娴陈先春蔡晓钟张伶
- 关键词：细胞增殖细胞凋亡NIH3T3细胞
- 5-FU富集人白血病细胞系KG-1a中肿瘤干细胞样亚群细胞被引量：2
- 2008年
- 探讨利用细胞周期特异性药物5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-FU)从人白血病细胞系KG-1a中富集肿瘤干细胞样亚群细胞。体外药物敏感试验确定5-FU的最佳作用浓度和作用时间;KG-1a细胞经5-FU药物处理后,流式细胞术检测存活细胞群中CD34+CD38-亚群细胞比例;吖啶橙染色观察细胞内的核酸组成;RT-PCR半定量检测细胞内三磷酸腺苷结合转运蛋白G超家族成员2(ATP-binding cassette superfamily Gmember2,ABCG2)mRNA的表达;半固体培养观察细胞的集落形成能力。结果显示,50μg/ml5-FU作用KG-1a细胞4天后,CD34+CD38-亚群细胞比例提高10倍以上;吖啶橙染色可见大部分细胞核酸以发出绿色荧光的DNA为主,RNA含量低;此类细胞高表达ABCG2 mRNA水平;而药物处理后细胞集落形成数量较未处理细胞明显减少。研究结果表明,利用5-FU能够杀死增殖期细胞的性质,成功建立体外药物筛选富集人白血病细胞系KG-1a中肿瘤干细胞样亚群细胞的方法。
- 杨松钟晓明张伶高玉洁骆展鹏何鹏
- 关键词：白血病干细胞5-氟尿嘧啶集落形成
- 白血病血浆循环DNA完整性和NPM1突变基因定量检测及其临床意义
- 目的:探讨白血病患者血浆循环DNA的总量和完整性及其临床意义。
方法:提取白血病及各对照组血浆样本中的循环DNA,以斑点染色法和实时荧光定量检测血浆循环DNA总量。采用琼脂糖凝胶电泳分析血浆循环DNA片段的完...
- 高玉洁
- 关键词：急性白血病循环DNA血浆急性髓系白血病循环DNA
- 文献传递
- 人白血病细胞系KG-1a中肿瘤干细胞样亚群细胞的初步研究被引量：3
- 2008年
- 探讨人白血病细胞系KG-1a中是否存在具有肿瘤干细胞样生物学特性的亚群细胞。瑞氏染色和吖啶橙染色分别观察白血病细胞系KG-1a细胞形态和RNA含量;流式细胞术检测细胞周期分布;免疫组化和流式细胞术检测KG-1a细胞CD34的表达;流式细胞术检测CD34+CD38–亚群细胞;烟酸己可碱Hoechst33342染色后用荧光显微镜观察KG-1a细胞中侧群(side population,SP)样细胞所占比例。结果显示,白血病细胞系KG-1a细胞核仁易见,形态原始;部分细胞RNA含量低,细胞处于G0/G1期的比例占15.5%。绝大多数细胞的胞浆和胞膜皆表达CD34抗原,KG-1a中CD34+细胞占96.3%,CD34+CD38–亚群细胞占7.02%;SP样细胞大致比例为7.60%。本研究表明,人白血病细胞系KG-1a中存在具有肿瘤干细胞样生物学特性的亚群细胞。
- 杨松钟晓明张伶骆展鹏何鹏高玉洁
- 关键词：肿瘤干细胞免疫表型侧群细胞
- 白血病患者循环DNA定量和完整性分析及其临床意义被引量：8
- 2010年
- 目的分析白血病患者血浆DNA的含量及完整性,并探讨其临床意义。方法以2008年6月-2009年3月收治的60例白血病患者作为实验组,同期在门诊行体检的健康正常人20例、血液系统良性病变者20例、淋巴瘤患者10例、实体肿瘤患者20例(食管癌6例、原发性肝癌4例、鼻咽癌5例、乳腺癌5例)作为对照组(n=70)。测定两组患者的血浆DNA含量,比较两组间、不同FAB分型的急性髓细胞白血病患者间、实验组不同年龄段及不同病程患者间血浆DNA水平的差异。采用聚合酶链反应扩增β-actin大片段和小片段产物并行琼脂糖凝胶电泳观察,比较实验组患者与对照组中正常人血浆DNA的差异。结果实验组患者血浆DNA浓度(413.2±118.4μg/L)约为对照组中正常人(19.6±7.9μg/L)的21倍(P<0.05),且高于对照组的其他疾病患者(P<0.05)。实验组血浆DNA浓度与年龄及疾病病程有关,不同FAB型别的急性髓细胞白血病患者血浆DNA含量无显著差异。实验组血浆DNA电泳呈现大小不一的片段,而且其血浆DNA中可扩增出β-actin的大、小片段产物,完整性较高。正常人仅可见少量小片段DNA。结论白血病患者血浆DNA含量和完整性明显增高,对白血病的诊断及预后判断具有重要价值。
- 高玉洁杨再林钟晓明邵会媛杨松肖玲白垚蔡晓钟张伶
- 关键词：白血病DNA血浆
- 稳定表达核仁磷酸蛋白1突变基因的白血病细胞株的构建及鉴定
- 2011年
- 目的构建稳定表达人核仁磷酸蛋白1(Nucleophosmin 1,NPM1)A型突变蛋白(NPM1-mA)的白血病髓性细胞系,并进行鉴定。方法利用xfectTM转染试剂将含人NPM1-mA基因的重组质粒pEGFP-C1-NPM1-mA分别转染THP-1和K562细胞系,G418筛选阳性克隆,建立稳定表达NPM1-mA的白血病细胞株THP-1-mA和K562-mA。采用RT-PCR和Western blot检测细胞NPM1-mA mRNA和蛋白水平的表达,细胞免疫化学法检测NPM1-mA蛋白的亚细胞定位,细胞生长曲线观察细胞体外增殖能力的改变。结果构建的白血病细胞株THP-1-mA和K562-mA的RT-PCR产物均可见446 bp的NPM1-mA基因条带;NPM1-mA蛋白的表达量明显升高;NPM1-mA蛋白存在于构建的2株白血病细胞胞浆中;与空载体转染组和未转染组细胞相比,转染NPM1-mA基因后,THP-1细胞体外增殖能力增强,K562细胞体外增殖能力减弱。结论已成功构建了稳定表达NPM1-mA的两株白血病细胞株THP-1-mA和K562-mA,为进一步研究NPM1基因突变对白血病细胞生物学特性的影响提供了良好的细胞模型。
- 邵会媛覃凤娴苗宗玉陈先春谭诗高玉洁张伶
- 关键词：白血病突变K562细胞系
- RNAi重组体抑制白血病K562细胞系中NPM1基因的表达被引量：3
- 2008年
- 目的构建核仁磷酸蛋白1(nucleophosmin1,NPM1)特异性的RNAi真核表达载体,观察对白血病K562细胞系NPM1表达的抑制作用。方法采用RT-PCR检测白血病细胞系(THP1和K562)和急性髓系白血病(AML)细胞NPM1mRNA水平。设计合成2条针对NPM1基因并具有小发夹结构的DNA序列,经退火形成互补双链,再克隆至载体pGenSil-1中构建含NPM1的RNAi重组体,经酶切及测序鉴定后通过脂质体转染K562细胞,同时设立pGenSil-1转染组和pGenSil-1/neg转染组。采用RT-PCR检测各组转染细胞中NPM1的mRNA水平。结果白血病细胞系和AML细胞均高表达NPM1 mRNA。针对人NPM1基因的RNAi重组体构建成功,并能够稳定转染K562细胞,导致白血病细胞NPM1mR-NA相对表达量下降64%,而pGenSil-1转染组和pGenSil-1/neg转染组未能下调NPM1表达。结论白血病细胞高表达NPM1基因,其mRNA表达水平能够被靶向NPM1的RNAi重组体特异性地下调。
- 何鹏骆展鹏张伶杨松钟晓明高玉洁
- 关键词：RNA干扰白血病K562细胞
- 核磷蛋白A型突变体对髓性白血病细胞系增殖的影响被引量：1
- 2008年
- 目的研究核磷蛋白A型突变体基因转染对人髓性白血病细胞系体外增殖的影响。方法构建含核磷蛋白A型突变基因(NPM-mA)的真核表达质粒pEGFPC1-NPM-mA,选择NPM-mA阴性、抑癌基因p14ARF有无缺失的两株人髓性白血病细胞KG-1a和K562作为靶细胞,将pEGFPC1-NPM-mA重组质粒和pEGFPC1空质粒分别转染白血病细胞,以未转染组为对照。用RT-PCR和免疫组化来分析转染细胞目的基因mRNA和蛋白质的表达。采用台盼蓝拒染法计数活细胞,绘制转染前后生长曲线,观察细胞体外生长的改变。结果转染后的两种白血病细胞株表达NPM-mA mRNA,胞浆内NPM-mA蛋白阳性,符合NPM突变蛋白胞质移位的特点。细胞生长曲线显示,转染NPM-mA质粒的KG-1a细胞较空质粒转染和未转染组细胞生长速度明显加快,而转染NPM-mA质粒的K562细胞则较对照组细胞生长明显受抑制(P<0.05)。结论NPM-mA基因稳定转染可影响白血病细胞的增殖活性,在无ARF缺失时NPM-mA突变体可促进白血病细胞体外生长。
- 骆展鹏何鹏张伶杨松钟晓明高玉洁
- 关键词：白血病核磷蛋白基因突变
- 肿瘤循环核酸的提取检测及临床应用被引量：4
- 2009年
- 循环核酸是一种细胞外游离状态的核酸,肿瘤患者血浆/血清中存在循环DNA、RNA和微RNA,具有片段小和含量低的特点。采用酚-氯仿抽提、硅胶或者磁珠载体分离法可提取微量的核酸片段,运用荧光分光光度法和PCR技术可观察循环核酸的改变。循环核酸检测可作为一种无创性的检测手段,应用于临床上肿瘤的早期诊断与鉴别、预后判断及疗效观察。
- 高玉洁张伶
- 关键词：循环核酸血液微小RNA肿瘤
- NPM1基因突变对急性白血病细胞系体外侵袭能力的影响被引量：3
- 2010年
- 核仁磷酸蛋白基因(nucleophosmin,NPM1)突变是目前急性髓系白血病发生突变率最高的基因改变,与白血病的发生发展密切相关。为探讨NPM1突变对白血病细胞体外侵袭能力的影响,将载体pEGFPC1-NPM1-mA转染THP-1白血病细胞系,筛选稳定表达NPM A型突变蛋白(NPM1-mA)的白血病细胞株(THP-1-mA)。通过transwell迁移实验、Matrigel侵袭实验以及细胞粘附实验来观察THP-1-mA细胞体外浸润转移能力的改变。结果发现,THP-1-mA细胞的体外迁移能力和侵袭能力明显高于亲代THP-1细胞;此外,THP-1-mA细胞对纤维连接蛋白的粘附能力也显著高于THP-1细胞。因此,我们的研究结果提示,NPMI突变可增强白血病细胞的体外侵袭能力,这有利于进一步明确NPM1突变基因在白血病细胞恶性转化中的调控作用。
- 邵会媛苗宗玉覃凤娴陈先春谭诗高玉洁张伶
- 关键词：白血病基因突变细胞侵袭
