高洋
- 作品数：26 被引量：52H指数：5
- 供职机构：西北农林科技大学动物科技学院更多>>
- 发文基金：陕西省科技统筹创新工程计划项目国际科技合作与交流专项项目陕西省农业科技攻关项目更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生经济管理更多>>
- 陕西榆林某羊场羊口疮病毒的分离鉴定被引量：4
- 2016年
- 为获得陕西榆林地区羊口疮病毒野毒株,以榆林地区某羊场疑似羊口疮(Orf)的山羊口唇部结痂为材料,将结痂研磨悬液接种于犊牛睾丸原代细胞进行传代培养,通过特征性细胞病变(CPE)观察、PCR检测、动物回归试验等对分离的毒株进行鉴定。结果表明,经研磨的病料悬液接种于犊牛睾丸原代细胞后,盲传至第4代时产生细胞病变,测得病毒滴度为10^(7.66) TCID_(50)/mL。对分离毒株的B2L基因克隆测序、同源性对比分析结果显示,该毒株与与国内报道的多株羊口疮毒株核苷酸序列均具有较高的同源性,其中与甘肃株(KC485343.1)福建株(KC568399.1)的同源性均达到99%。用纯化病毒液划痕接种2月龄羔羊后,在其唇部和腹股沟内侧出现丘疹和脓疱等ORFV感染的典型的羊口疮症状。表明成功获得了羊口疮病毒陕西榆林株。
- 周铭岳进华刘鹤媛高洋李雯丽杨启明陈德坤
- 关键词：羊口疮病毒聚合酶链反应动物回归试验
- L-17单克隆抗体的制备与鉴定
- 为制备山羊IL-17单克隆抗体,诱导重组菌rIL-17-pET32a-TransB(DE3)表达山羊IL-17重组蛋白(rIL-17),纯化后免疫BALB/c小鼠,取免疫合格的小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行细胞融合...
- 桑锋锋高洋张洪杰朱伟英王毅陈德坤
- 关键词：山羊杂交瘤细胞ELISA
- 羊口疮病毒低含量样品的病毒分离方法
- 本发明涉及羊口疮病毒低含量样品的病毒分离方法。传统的羊口疮病毒都是从结痂和患病羊的口唇皮屑中分离的，分离周期长，需要盲传5代后才会有病变，同时，病料来源范围小，限制的羊口疮病毒的研究工作。本发明使用特有的Virus ho...
- 陈德坤周铭刘方刘鹤媛高洋赵燕青
- 文献传递
- 小熊猫IL-17的克隆及原核表达被引量：1
- 2014年
- 为制备小熊猫白介素17(IL-17)表达产物,提取活化的小熊猫外周血单个核细胞总RNA,合成cDNA,以此为模板克隆IL-17的成熟肽编码序列,将其重组到原核表达载体pET-32a,并将其转入到BL-21(DE3)中,进行序列分析。重组载体经IPTG诱导表达,表达产物经镍柱纯化。结果显示,小熊猫IL-17的CDS区由462bp组成,含23个氨基酸组成的信号肽,重组IL-17由130个氨基酸组成。SDS-PAGE显示,原核表达产物在诱导温度25℃,IPTG浓度0.5mmol/L,诱导时间20h的条件下,能够获得最佳表达。
- 赵玄多徐素慧杨雯昱高洋修云芳陈玉村陈德坤
- 关键词：小熊猫白介素基因克隆原核表达IL-17
- 原核表达小熊猫IFN-γ的免疫活性研究被引量：1
- 2014年
- 为鉴定小熊猫IFN-γ原核表达产物的免疫活性,以纯化的小熊猫IFN-γ原核表达产物为材料,采用淋巴细胞增殖试验和ELISA,分别测定了IFN-γ对小熊猫淋巴细胞增殖及其分泌IFN-γ的影响。结果显示,与对照组相比,100μL浓度分别为10-1×1.56mg/mL、10-2×1.56mg/mL的纯化IFN-γ能够显著刺激淋巴细胞增殖(P<0.05);经热变性处理(煮沸10min)、浓度为10-1×1.56mg/mL的IFN-γ刺激淋巴细胞增殖的效果与空白对照无显著差异(P>0.05),但明显低于未处理组(P<0.05);淋巴细胞培养系统中加入浓度为10-1×1.56mg/mL的等体积IFN-γ,60h之内培养上清中的IFN-γ含量均显著高于对照组(P<0.01或P<0.05)。结果表明,原核表达的小熊猫IFN-γ产物具有刺激同种淋巴细胞增殖及分泌IFN-γ的活性。
- 徐素慧高洋赵玄多邵良平陈玉村陈德坤
- 关键词：小熊猫Γ干扰素原核表达免疫活性
- 羊伪结核抗体间接ELISA检测方法的建立被引量：7
- 2016年
- 【目的】建立羊伪结核棒状杆菌抗体的间接ELISA检测方法。【方法】分别用不同浓度的伪结核棒状杆菌菌体抗原和培养上清可溶性抗原包被酶标板,用脱脂奶粉封闭酶标板,设置封闭时间分别为1.0,1.5和2h,再用不同稀释度的血清(1∶100,1∶200,1∶400和1∶800)与之反应,以此优化间接ELISA反应条件,确定阳性结果判定的临界值。对间接ELISA方法的特异性和重复性进行考察,并在此基础上对采集的临床样本进行检测。【结果】选用伪结核棒状杆菌菌体为包被抗原,最佳包被抗原菌体密度为OD600=0.08,血清的最佳稀释度为1∶400,封闭时间为2h,阳性血清的临界值为0.329。该抗体检测方法可特异性地检测出伪结核阳性血清,羊口疮阳性血清、羊痘阳性血清、乳房炎阳性血清均呈阴性反应;组内,组间变异系数<10%。该方法对临床样本的检测结果与实际患病状况一致。【结论】成功建立了伪结核抗体间接ELISA检测方法,该方法特异性强、重复性好,可用于临床诊断和批量血清学检测。
- 霍宁宁朱伟英高洋杨雯昱岳进华赵燕清陈德坤
- 关键词：伪结核棒状杆菌间接酶联免疫吸附试验
- 山羊IFN-γ基因的克隆表达与多克隆抗体制备被引量：1
- 2014年
- 为获得山羊IFN-γ重组蛋白,提取山羊外周血淋巴细胞总RNA,反转录得到cDNA,以此为模板经PCR扩增获得IFN-γ的ORF区,构建重组克隆载体。经PCR扩增得到编码山羊IFN-γ成熟肽的基因序列,连入重组表达载体pET-32a,转入BL21(Codon Plus)感受态细胞中,测序并分析。重组表达载体经IPTG诱导后,对产物进行SDS-PAGE分析,并过镍柱纯化。用获得的纯化蛋白免疫家兔制备抗体。结果显示,编码山羊IFN-γ成熟肽部分的片段长432bp;SDS-PAGE分析显示,融合蛋白大小约为34.9ku,在30℃条件下,以0.3mmol/L的IPTG诱导6h,可得到大量可溶性表达的目的蛋白;间接ELISA测定制得的多克隆抗体效价为1∶106。
- 安贝赵玄多杨雯昱侯伟杰高洋陈德坤
- 关键词：山羊IFN-Γ原核表达抗体制备
- IL-17单克隆抗体的制备与鉴定被引量：2
- 2017年
- 为制备山羊IL-17单克隆抗体,诱导重组菌rIL-17-pET32a-TransB(DE3)表达山羊IL-17重组蛋白(rIL-17),纯化后免疫BALB/c小鼠,取免疫合格的小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行细胞融合,采用间接ELISA方法筛选阳性克隆细胞株。对获得的杂交瘤细胞进行染色体组型分析,并对其分泌的IL-17单克隆抗体进行抗体特异性、抗体类别等分析。结果显示,成功获得了纯化的山羊IL-17原核表达产物;筛选到1株能特异性分泌山羊IL-17单克隆抗体的杂交瘤细胞株-B6,其分泌的单克隆抗体亚型为IgG1,抗体轻链为κ。
- 桑锋锋高洋张洪杰朱伟英王毅陈德坤
- 关键词：山羊杂交瘤细胞酶联免疫吸附试验
- 山羊IL-17A的可溶性表达与单克隆抗体制备及其对山羊乳腺上皮细胞作用的研究
- 白细胞介素-17(Interleukin-17，IL-17)是Th17细胞的特征性细胞因子，被认为是一种关键的促炎性细胞因子，在宿主抵抗胞外菌、真菌感染，以及炎症、超敏反应、自身免疫病等多种疾病过程中均起到了重要的作用。...
- 高洋
- 关键词：山羊白细胞介素-17A可溶性表达单克隆抗体
- 文献传递
- IL-17A对山羊乳腺上皮细胞分泌免疫防御因子功能的影响
- 2020年
- 白细胞介素17(interleukin-17,IL-17)是Th17细胞的特征性细胞因子,被认为是一种关键的炎性细胞因子,在宿主抵抗胞外菌、真菌感染,以及炎症、超敏反应、自身免疫性疾病等多种疾病的病程中起到了重要的作用。为研究IL-17A对山羊乳腺上皮细胞免疫防御功能的影响,本研究根据GenBank公布的奶山羊IL-17A完全CDS区序列设计了真核表达引物,从Con A活化的奶山羊外周血单个核细胞(PBMCs)中提取总RNA,反转录PCR法扩增目的序列。扩增出的目的片段连接于真核表达载体pEGFP-N1,并转入大肠杆菌Trans5α感受态细胞保存,将鉴定正确的重组质粒命名为IL-17A-pEGFP-N1。将重组质粒转染入HEK293T细胞进行瞬时表达,收取真核表达上清作为刺激物。选取成年健康奶山羊,通过组织块贴壁法制备原代山羊乳腺上皮细胞(GMEC)。用IL-17A真核表达上清(终质量浓度:15 mg/L)刺激山羊乳腺上皮细胞,通过Real-time PCR方法检测GMEC分泌的各种促炎性细胞因子、趋化因子以及防御性蛋白表达水平的变化。结果表明,IL-17A可以促进山羊乳腺上皮原代细胞分泌多种促炎性细胞因子、趋化因子和防御性蛋白,暗示IL-17A可能参与了奶山羊乳腺炎的发生,并在山羊乳腺免疫防御中起到了一定的调节作用。
- 高洋同娟珍谷奎高飞马文涛陈德坤
- 关键词：山羊白细胞介素-17A真核表达
