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高春萍: 作品数：14 被引量：37H指数：5; 供职机构：清华大学深圳研究生院更多>>; 发文基金：国家高技术研究发展计划国家重点基础研究发展计划国家自然科学基金更多>>; 相关领域：农业科学生物学社会学经济管理更多>>

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黑鲷转铁蛋白基因的分子特征研究被引量：1: 2014年; 目的:克隆黑鲷转铁蛋白全基因并分析其分子特征。方法:采用同源克隆的方法,对黑鲷转铁蛋白全基因编码序列进行克隆,在cDNA获得了部分转铁蛋白基因的同源片段。经RACE PCR方法,分别对该基因的3’和5’末端进行扩增,获得的扩增片段经拼接后得到全基因片段。结果:黑鲷转铁蛋白全长2431bp,可编码691个氨基酸,分子量(MW)约为74.3kDa,等电点(PI)为5.63。它与鱼类转铁蛋白的同源性最高,约为65%-89%>;与其它动物(哺乳类、两栖类等)也有一定的相识性。进化分析表明黑鲷转铁蛋白与其它鱼类和哺乳类的转铁蛋白是由早期转铁蛋白共同的祖先进化来的。结论:黑鲷转铁蛋白主要在肝脏中成组成型表达,在大脑等器官中也有少量表达。该基因的表达受病原刺激的影响,表现为经病原刺激后转铁蛋白基因的组织分布显著增多。; 陈艳萍王立红高春萍晋慧周进; 关键词：黑鲷转铁蛋白分子特征

黑鲷肿瘤坏死因子α基因的重组表达方法: 本发明涉及分子生物学技术领域，是黑鲷肿瘤坏死因子α(BS TNFα)基因的体外表达与纯化技术。本发明包括重组表达载体的构建、转化、转化子筛选和表达产物的分离纯化和鉴定等技术环节。其中重组体的构建是根据黑鲷肿瘤坏死因子α预...; 宋林生蔡中华高春萍相建海; 文献传递

鸡IFN-γ基因在大肠杆菌中的表达及表达产物对鸡的免疫保护被引量：6: 2008年; 将鸡干扰素-γ(ChIFN-γ)成熟肽基因编码区序列亚克隆到原核表达载体pQE30上,并转化大肠杆菌M15感受态细胞。经诱导后,以镍金属亲和层析法对表达蛋白进行纯化,采用SDS-PAGE与Western-blot对表达蛋白进行鉴定。结果显示,经诱导的转化子在体外获得了高效表达,表达蛋白约占菌体蛋白的23%。0.5ng/mL以上的重组ChIFN-γ(rChIFN-γ)能显著抑制鸡新城疫病毒对细胞的侵染与伤害;但是,细胞先感染病毒后,再以不同剂量rChIFN-γ作用于细胞,则不具有对细胞的保护作用,说明rChIFN-γ对细胞的保护是通过调节机体免疫能力、干扰病毒入侵实现的。1ng/mL的rChIFN-γ可显著提高新城疫疫苗的免疫效价,具有较强的免疫协同作用。表明,原核表达的rChIFN-γ具有显著的生物学活性。; 王立红高春萍邢克智王红英郭永军; 关键词：体外表达生物学活性

黑鲷肿瘤坏死因子cDNA的克隆与体外表达的研究: 肿瘤坏死因子/(TNF α/)是一种具有广谱生物学活性的细胞因子，在不影响正常细胞的前提下，于体内外均能杀伤肿瘤细胞并抑制肿瘤细胞的增殖；并且可以通过刺激T细胞，诱导MHC的表达，参与和调控机体的免疫应答、炎症及发热反应...; 高春萍; 关键词：分子克隆; 文献传递

真鲷肿瘤坏死因子（TNFα）基因的体外重组与纯化研究被引量：2: 2004年; 将真鲷肿瘤坏死因子(TNFα)基因的成熟肽区域克隆到表达载体pQE30中，并转化到大肠杆菌XL-blue中进行表达。转化子经载体和基因特异性引物进行PCR双向筛选，并将筛选到的阳性克隆经质粒纯化后，进行序列测定。序列测定结果显示，该基因结构正确，且准确插入到表达载体启动子的下游，获得了结构和组成正确的重组子。重、组子经IPTG诱导后，以SDS-PAGE电泳鉴定，电泳结果表明，该基因在大肠杆菌XL-blue中实现了表达。通过对诱导条件的调整，在体外获得了高效表达的重组蛋白，高效表达的重组蛋白约占菌体蛋白的25％-30％。不同诱导时间对重组蛋白影响实验显示，随诱导时间的增加，重组蛋白产量逐渐增高，经4h诱导，其表达量可以达到平台期，过长时间的诱导，对表达产量没有影响。重组蛋白经镍金属亲和层析纯化，获得了纯度较高的重组蛋白。采用交换缓冲液的方法，用Sephadex G150，对重组蛋白进行脱盐复性，使重组蛋白得到了进一步纯化。; 蔡中华宋林生高春萍吴龙涛邱丽华; 关键词：真鲷肿瘤坏死因子基因重组体外重组纯化

大学生医疗保险过渡期存在的问题及建议——以北京、深圳两地大学生医疗保险为例被引量：2: 2012年; 2009年起全国18个省份先后开始大学生社会医疗保险的试点工作。各地大学生医疗保险主要是将大学生直接并入当地城镇少年儿童保险中,但是缺乏专门针对大学生群体的医疗保险制度。本文对2009-2011年北京、深圳大学生医疗保险的主要特点进行对比,分析了两地大学生医疗保险政策存在的不足,并从政府和高校两个方面提出了建议和对策。; 高春萍杨瑞东张轩彭媛媛; 关键词：大学生医疗保险

黑鲷(Acanthopagrus schlegeli)CXC型趋化因子的体外表达及其生物学活性被引量：2: 2008年; 采用 DNA 体外重组技术,将一个黑鲷 CXC 趋化因子基因亚克隆到 pQE30表达载体并转化到大肠杆菌(M15)中诱导表达后,利用 pn 递降的缓冲液从金属亲和柱洗脱含6xHis 标签蛋白的方法得以纯化,纯化产物的分子量约为8kDa,表达量约占蛋白总量的25%,以6xHis 单抗为一抗,采用 Western-blotting 方法鉴定获得的蛋白为目的蛋白。对表达产物进行生物活性鉴定表明,该蛋白具有显著的嗜中性粒细胞和巨噬细胞的趋化活性(P<0.01,P<0.05),它对嗜中性粒细胞和头肾巨噬细胞的趋化能力呈剂量依赖性,且对嗜中性粒细胞的趋化能力大于对头肾巨噬细胞的作用,还能诱导改变嗜中性粒细胞和巨噬细胞对细菌的吞噬活性,但对嗜中性粒细胞吞噬能力的改变小于巨噬细胞。该趋化性因子在结构和功能上属不完全 ELR+CXC 型趋化因子,兼具 ELR^+CXC 和 ELR^-CXC 趋化因子的活性,是一种不成熟 ELR+CXC 型趋化因子。; 张勇蔡中华高春萍邢克智; 关键词：黑鲷免疫应答

黑鲷(Acanthopagrus schlegeli)肿瘤坏死因子α cDNA的克隆及特征分析被引量：6: 2005年; 采用同源克隆的方法,从黑鲷中获得肿瘤坏死因子(TNFα)全长cDNA序列。该序列含1288个核苷酸,可编码253个氨基酸的TNF前体蛋白。它是一种跨膜蛋白,无糖基化位点和信号肽结构。黑鲷TNFα与其它鱼类的TNFα的相似性很高,占据进化上独立的分支;与哺乳类TNFα和TNFβ源于共同的祖先。基因结构分析显示,该基因含有TNF家族profile和TNF家族的标签序列;在参与TNFα基因二硫键形成的两个半胱氨酸和TNFα三聚体形成的位点高度保守;空间结构模拟显示,它与哺乳类TNFα的空间结构相似,都是由两个β折叠片组成,每个折叠片包含5个反向平行的β链。表达研究结果表明,黑鲷TNFα在检测的各个组织中均为组成型表达,表现为在刺激与非刺激鱼体中,都可以检测到黑鲷TNFα的表达,但是其表达水平在不同组织中有很大差异。黑鲷TNFα在头肾、脾脏和鳃的表达量较高,而在心脏、肝脏、血液、肾脏和大脑中表达量较低。; 高春萍蔡中华宋林生吴龙涛池振明; 关键词：黑鲷克隆

黑鲷肿瘤坏死因子α基因的重组表达方法: 本发明涉及分子生物学技术领域，是黑鲷肿瘤坏死因子α(BS TNFα)基因的体外表达与纯化技术。本发明包括重组表达载体的构建、转化、转化子筛选和表达产物的分离纯化和鉴定等技术环节。其中重组体的构建是根据黑鲷肿瘤坏死因子α预...; 宋林生蔡中华高春萍相建海; 文献传递

真鲷转铁蛋白基因的克隆与表达特征分析被引量：7: 2005年; 采用同源克隆的方法,根据相近物种转铁蛋白(Transferrin, TF)基因的序列设计简并引物,在经感染真鲷的cDNA上进行PCR扩增,获得了真鲷TF的全基因编码序列(GeneBank Accession No.AY335444).该序列由2444bp核苷酸组成,含31 bp 5′非编码区和340 bp 3′非编码区以及2073 bp的开放阅读框,可编码691个氨基酸,预测分子量约为74.3kD,等电点为5.63.同源性分析表明,真鲷TF与鱼类TF的相似性很高,约为65%～75%;与哺乳类转铁蛋白和乳铁蛋白的相似性约40%～50%;与脊索动物海鞘和无脊椎动物昆虫也有一定的相似性.进化分析表明,该基因是转铁蛋白而不是乳铁蛋白.真鲷TF与其它动物TF结构相似,是由两叶相似的结构域构成的单一肽链;该基因有一信号肽序列,缺乏糖基化位点,在它的两个结构域上,分别有三个TF家族的标签序列及一个MHC分子标签序列;与哺乳类相比,参与蛋白二硫键形成的半胱氨酸以及铁离子结合位点高度保守.RT-PCR结果显示,真鲷TF在肝脏成组成型表达,但在其它组织中的表达可受病原调控,表现为经病原刺激后转铁蛋白基因的组织分布显著增多.; 蔡忠华宋林生高春萍吴龙涛; 关键词：真鲷转铁蛋白核苷酸组成组成型表达同源克隆脊索动物

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