阳莉
- 作品数：23 被引量：15H指数：2
- 供职机构：中山大学附属第三医院更多>>
- 发文基金：广东省科技计划工业攻关项目国家高技术研究发展计划广东省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 外周血NK细胞培养的扩增效率及杀伤活性的变化趋势
- 2021年
- 目的:研究外周血自然杀伤(NK)细胞培养的扩增效率及杀伤活性的变化趋势。方法:采集10份健康供血者的外周血,采用无血清培养法对NK细胞进行扩增培养,并分别在培养的第0天、第4天、第8天、第12天、第16天、第20天进行细胞观察及计数、细胞表型分析和杀伤活性检测,总结外周血NK细胞培养的扩增效率及杀伤活性的变化趋势。结果:外周血单个核细胞(PBMCs)经诱导培养2~3 d即出现细胞集落。随着培养时间的延长,NK细胞的数量逐渐增加,不同培养时间点(第4天、第8天、第12天、第16天和第20天)NK细胞的数量相比,P<0.05;NK细胞的杀伤活性从培养第8天开始升高,至第12天达到峰值后开始下降,不同培养时间点NK细胞的杀伤活性相比,P<0.05;NK细胞的比例先增加后下降(在培养至16 d达到峰值后开始下降),其比例的下降趋势较杀伤活性的下降趋势滞后,不同培养时间点NK细胞的比例相比,P<0.05;各时间点NK细胞的存活率均大于95%。结论:采用无血清培养法对外周血NK细胞进行培养时,随着培养时间的延长,外周血NK细胞的数量呈逐渐增加的趋势。外周血NK细胞的杀伤活性在培养12 d后出现下降的趋势。在培养的第12天~第16天,NK细胞的杀伤活性较强,细胞数量较多,细胞纯度较高。采用无血清培养法体外扩增NK细胞的效率较高。
- 阳莉胡元陈晓燕黄梦淳卢建溪
- 关键词：自然杀伤细胞细胞培养杀伤活性免疫治疗
- 17例中晚期非小细胞肺癌患者同种异体半相合CIK联合化疗的疗效观察
- 2015年
- 方法:17例中晚期非小细胞肺癌患者,经过含铂两药化疗后,在体外诱导成异体半相合CIK细胞后回输给患者,分析治疗前后半年患者生活质量及疗效初步观察。结果:17例患者共接受了2周期同种异体半相合CIK细胞回输,并随访半年,所有患者生活质量有明显提高,半年存活率为94.11%(16/17),部分缓解4例,稳定11例,进展2例,部分缓解率23.52%(4/17),疾病稳定率64.70%(11/17),疾病进展率11.76%(2/17),未见完全缓解,有效率23.52%,临床受益率88.23%。结论:初步临床观察显示同种异体半相合CIK细胞对中晚期非小细胞肺癌疗效可,但疗效尚有待大样本随机对照试验进行进一步证实。
- 杨帆谢淑娟郑小芳刘畅程锦涛阳莉
- 关键词：非小细胞肺癌
- 携带红色荧光蛋白报告基因的重组腺病毒载体的构建及其体外试验研究
- 2011年
- 目的:采用体外连接技术构建含红色荧光蛋白(RFP)报告基因的重组腺病毒载体,为基因治疗与基因疫苗研究提供重要工具。方法:将pTurboRFP-N上的含RFP基因片段,经酶切连接定向克隆至转移载体pShuttle上,构成重组质粒pShuttle-TurboRFP-N。用I-Ceu I/PI-Sce I双酶切重组质粒pShuttle-TurboRFP-N和骨架质粒pH5'040 pkGFP-Ⅱ,回收目的片段,连接,获得重组腺病毒载体AdH5'.040.CMV.RFP-N。将其线性化后,经脂质体介导转染至AD293细胞内包装出重组腺病毒颗粒。通过荧光显微镜观察其在AD293细胞内的包装效率和RFP表达情况。扩增并再次感染AD293细胞检测病毒颗粒感染能力,并测定其生物活性及滴度。将所构建的重组腺病毒载体AdH5'.040.CMV.RFP-N与对照腺病毒载体AdH5.CMV.EGFP在体外感染人肺癌细胞系A549和乳腺癌细胞系MDA-MB-231。通过荧光蛋白RFP和EGFP的表达,比较它们对以上肿瘤细胞的感染效率。结果:经酶切鉴定,证明已正确构建重组腺病毒载体AdH5'.040.CMV.RFP-N;经AD293细胞包装成具有感染性的病毒颗粒,并能在真核细胞中高效表达目的基因;扩增纯化后获得重组腺病毒颗粒数为3.6×1015vp/L,滴度达1.8×1013pfu/L。重组腺病毒载体AdH5'.040.CMV.RFP-N感染人肺癌细胞系A549和乳腺癌细胞系MDA-MB-231的感染效率,高于对照腺病毒载体AdH5.CMV.EGFP(P<0.05)。结论:成功构建了携带RFP报告基因的重组腺病毒载体,并能够在AD293细胞中高效地表达,对肿瘤细胞的感染效率高。RFP对GFP是一种很好的代替和补充,为基因治疗与基因疫苗研究提供更多的荧光标签。
- 卢建溪阳莉钱师宇王强
- 关键词：腺病毒载体基因重组
- 广州地区非腹泻人群肠道腺病毒的分子流行病学研究
- 2010年
- 目的研究广州地区非腹泻人群肠道腺病毒的分布特点。方法采集73例成人、41例儿童共114例非腹泻人群的粪便样本,进行体外细胞感染实验,同时提取粪便悬液过滤上清基因组DNA进行巢式PCR扩增,对PCR阳性者进行克隆、测序以及基因型分型。结果 114份样本中,共有12份样本检出腺病毒,阳性率为10.5%(12/114)。其中儿童组阳性率为14.6%(6/41),成人组阳性率为8.2%(6/71),两组间比较差异显著有统计学意义(P<0.05)。经序列分析显示,12份样本分别属于人腺病毒5型(3份)、7型(2份)、12型(3份)及48型(4份)。成人的人腺病毒型别为5型、7型、及48型,婴幼儿的人腺病毒型别为12型、48型。结论广州地区人群粪便样本中检测到人腺病毒5型、7型、12型及48型的存在,其中12型及48型为首次发现,并且12型仅在婴幼儿中发现。此外,文献报道人腺病毒48型为罕见血清型,但其占本研究中阳性样本的33%,其在我国是否属于罕见,需要慎重对待。
- 阳莉卢建溪王强黄建华周才
- 关键词：腺病毒基因型病毒分离流行病学
- 我国非腹泻患者肠道内腺病毒感染的分子流行病学初步研究被引量：1
- 2009年
- 目的研究非腹泻人群肠道内腺病毒感染的分子流行病学情况。方法采集非腹泻患者的粪便样本,在A549细胞中进行培养,提取病变细胞的基因组DNA进行PCR扩增,然后进行克隆、测序,确定病毒基因型。结果114份样本中,细胞培养结合PCR分型方法检测出12份样本中存在腺病毒,阳性率为10.5%。序列分析显示,其中人腺病毒5型占25.0%(3/12)、7型占16.7%(2/12)、12型占25.0%(3/12)、48型占33.3%(4/12)。结论本研究在我国非腹泻的一般人群粪便样本中检测到人腺病毒5型、7型、12型及48型的存在。文献报道人腺病毒48型为罕见血清型,但其占本研究中阳性样本的33.3%,其在我国是否属于罕见,需要慎重对待。
- 卢建溪阳莉李雪玲黄建华周才王强
- 关键词：腺病毒流行病学肠道
- 双色法和三色法检测NK细胞杀伤功能的实用性比较
- 2022年
- 目的 比较双色法和三色法检测自然杀伤细胞(NK cell)的体外杀伤功能。方法 选取20例自2019年至2021年于中山大学附属第三医院献血者外周血,体外诱导扩增NK细胞(效应细胞),在培养第14天按10∶1、20∶1效靶比分别与K562细胞(靶细胞)混合共培养,且在1 h、2 h、3 h、4 h共4个时间组取样,分别采用CFSE/PI双色法和CFSE/Annexin-V/7-AAD三色法进行流式染色,检测K562细胞的凋亡。结果 在不同效靶比实验组,两种染色方法都能检测出NK细胞在效靶比20∶1杀伤功能显著高于效靶比10∶1,差异有统计学意义(P<0.05),在4个时间点实验组中,效靶细胞共培养4 h时NK细胞杀伤功能最强。其中,三色法检测出细胞杀伤功能显著高于双色法,差异有统计学意义(P<0.05)。结论三色荧光染色法比双色法能更灵敏更特异地检测NK细胞杀伤功能,结果更为可靠。
- 陈晓燕阳莉蔡惠宁李翠平卢建溪
- 关键词：双色法NK细胞杀伤功能
- 人脐带间充质干细胞抑制T细胞免疫作用被引量：1
- 2022年
- 目的研究人脐带间充质干细胞(hUC-MSCs)在体外对淋巴细胞增殖和免疫调控功能的影响。方法采用组织块贴壁法分离健康捐献者来源的脐带进行分离培养。培养至第3~5代时,进行多向分化和细胞表型鉴定。获取健康供者外周血单个核细胞,并通过CD3免疫磁珠分选出T淋巴细胞,进行荧光染料CFSE标记,然后分成单独培养组(T细胞)和共培养组(按T∶MSC=5∶1的比例共培养),两组均采用CD3/CD28单克隆抗体活化,培养3 d后通过流式细胞术检测T淋巴细胞的增殖情况,并检测Th1/Th17细胞亚群的变化以及对Treg细胞亚群的影响。结果健康捐献者来源的hUC-MSCs高表达CD29、CD44、CD73、CD90、CD105、CD166、HLA-DR,不表达CD31、CD34、CD45,并具有多向分化潜能。与单独培养组比较,共培养组中的T淋巴细胞增殖率和Th1、Th17细胞亚群比例明显降低,Treg细胞比例明显升高。结论hUC-MSCs通过抑制T淋巴细胞的增殖、下调Th1/Th17和上调Treg细胞参与免疫调节,发挥免疫抑制作用。
- 阳莉林惠珠钱师宇陈晓燕陈文捷卢建溪
- 关键词：间充质干细胞淋巴细胞亚群免疫调节
- 不同代次人脐带间充质干细胞生物学特性评估
- 2022年
- 目的明确传代扩增代次对人脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells,hUC-MSCs)生物学特性的影响。方法采用组织块法分离HUC-MSCs,体外传代培养后比较P3、P5、P10细胞的生物学特性:采用细胞计数法与流式细胞仪检测细胞增殖活性和表面免疫标志物;染色体核型分析检测基因稳定性;成脂、成骨诱导分化检测多向分化潜能;SA-β-gal活性检测细胞衰老情况;蛋白芯片检测胞内及培养上清细胞因子表达水平。结果3个代次的hUC-MSCs形态特征及生长曲线相似,随着扩增代次的增加,细胞的增殖活性降低。3个代次的hUC-MSCs均高表达CD105、CD90、CD73等表面免疫标志物,不表达或低表达CD11b、CD19、CD34、CD45及HLA-DR。染色体核型分析证实3个代次的hUC-MSCs均为正常二倍体核型,染色体核型未发生结构畸形改变。3个代次的hUC-MSCs成脂和成骨分化潜能均未见显著性差异。SA-β-gal活性检测显示,随着扩增代次的增加,HUC-MSCs开始呈现衰老趋势。hUC-MSCs胞内及培养上清均能检测到IL-6、IL-1β、TNF-α、G-CSF和GM-CSF,胞内IL-6和IL-1β随着扩增代次增加升高;培养上清GM-CSF随着扩增代次增加下降。结论不同代次HUC-MSCs在表面免疫标志物、基因稳定性及其多向分化潜能等基本生物学特性方面均无显著性变化。随着扩增代次增加会分泌SASP,而致细胞老化,增殖活性降低。
- 林惠珠李翠平钱师宇阳莉陈晓燕陈文捷卢建溪
- 关键词：人脐带间充质干细胞染色体核型分析Β-半乳糖苷酶活性细胞因子
- 我国恒河猴粪便腺病毒聚合酶基因片段的序列分析
- 2011年
- 目的研究非人灵长类动物猴子腺病毒的分子多样性。方法采集圈养的恒河猴粪便样本,以腺病毒聚合酶基因为目的基因,用PCR方法进行扩增,对PCR阳性产物进行克隆、测序,并进行系统进化分析。结果 57只恒河猴粪便样本有12份存在腺病毒DNA,系统进化分析提示这些序列主要可分为两大组:类SAdV-6组(2个非重复序列)和类SAdV-7组(9个非重复序列)。此外,有3个克隆,其最相似序列分别为:SAdV-1,SAdV-3和HAdV-52。结论研究证实腺病毒在非人灵长类粪便中普遍存在,揭示这些动物肠道内腺病毒的多样性以及系统进化情况。
- 卢建溪钱师宇王强阳莉李刚
- 关键词：恒河猴基因组多样性
- 同种异体半相合细胞因子诱导的杀伤细胞治疗晚期肝癌的疗效及安全性评估
- 2015年
- 目的探讨同种异体半相合细胞因子诱导的杀伤(CIK)细胞治疗晚期肝癌的疗效及安全性。方法采集21例晚期肝细胞癌(肝癌)患者健康一级直系亲属的外周血单个核细胞,在体外诱导成异体半相合CIK细胞后回输给患者,回输4个周期。评估治疗效果和安全性。结果随访半年,21例患者的存活率为81%(17/21),疾病稳定患者11例,疾病进展患者10例(含4例死亡病例)。6例患者治疗期间出现不同程度的发热,1例出现皮疹。与治疗前相比,患者治疗后第4周期的血小板数量降低,差异有统计学意义(P<0.05),而患者治疗后第1、4周期的白细胞、中性粒细胞、淋巴细胞、血红蛋白,肝、肾功能差异均无统计学意义(均为P>0.05)。结论同种异体半相合CIK细胞治疗晚期肝癌患者能够有效改善生活质量,不良反应大都在可耐受范围,是一种较安全的治疗方法。
- 杨帆郑小芳刘畅陈文捷程锦涛阳莉卢建溪张琪
- 关键词：肝细胞癌细胞治疗
