路伟
- 作品数：12 被引量：40H指数：5
- 供职机构：中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室更多>>
- 发文基金：甘肃省自然科学基金中国博士后科学基金甘肃省科技攻关计划更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生生物学更多>>
- 细胞型朊蛋白(PrP^c)研究进展被引量：5
- 2008年
- 张杰路伟刘永生
- 关键词：海绵状脑病慢性消耗性疾病动物体内蛋白构象疯牛病
- 牛结核病体外免疫诊断技术被引量：7
- 2005年
- 牛分支杆菌感染的主要特征是引起 细胞免疫反应。现在牛结核病的诊断试验是 以T细胞反应机制为基础的。低敏感性的结 核血清学试验是不值得提倡的,血清学试验 最好作为细胞学试验的补充而不是替代。最 近,发现了牛结核γ干扰素试验是一种快速 的(24h)惟一使用全血的体外试验,该方法 在澳大利亚应用,结果表明,比传统的结核菌 素法诊断牛结核更敏感。假阳性反应的难题 归因于所使用的抗原制品间的交叉反应特 性,设动物对牛PPD和禽PPD的γ干扰素反 应作对照可解决假阳性的问题。虽然牛结核 特异性蛋白已确认并被分类,这些特异性蛋 白可能在血清学或细胞学诊断试验中使用, 但是它们可能因牛对牛分支杆菌感染的免疫 反应的遗传多样性而受到限制。
- 张秀华沈国顺路伟王牟平王春来彭永刚刘思国
- 关键词：牛分支杆菌酶联免疫吸附试验Γ干扰素
- 人、牛和羊叠朊基因的表达及牛叠朊蛋白抗血清的制备
- 2008年
- 叠朊(Dpl)是朊蛋白(PrP)的横向同源物,两者的功能密切相关。本研究旨在制备能够特异检测重组表达的或者动物组织中Dpl的抗血清,以用于研究Dpl的功能及其与PrP的关系。根据已克隆的汉族人、中国黄牛、甘肃土种羊的Dpl基因,将其Dpl成熟蛋白编码区分别定向克隆到表达载体pET-30a(+)上,将重组表达载体转入E.coliBL21(DE3)pLysS,IPTG诱导表达。将表达并纯化的牛重组Dpl免疫4只青紫蓝兔,制备牛Dpl的抗血清,SDS-PAGE分析表明人、牛和羊的重组Dpl在E.coli中获得了高效表达。用Ni-NTA树脂亲和层析和胶洗脱法纯化了上述表达产物,ELISA和West-blot分析表明,制备的牛Dpl抗血清与重组人、牛和羊的Dpl以及牛和羊睾丸组织的Dpl发生了特异性反应,却不与重组人、牛和羊的PrP发生反应。上述结果表明制备的Dpl抗血清可以作为人、牛和羊Dpl的检测试剂和研究材料。
- 刘永生唐江山路伟陈豪泰孙德惠才学鹏张杰
- 关键词：传染性海绵状脑病朊蛋白基因表达抗血清
- 牛结核病被引量：8
- 2005年
- 牛结核病是牛分支杆菌引起的人畜共患传染病, 全球每年因结核病而死亡的人数是其他传染病的死亡人数之和。除了人和牛外, 还有很多动物对牛分支杆菌敏感, 如一些哺乳动物和禽类。家养牛被认为是牛分支杆菌的宿主, 但很多野生动物是贮存宿主。为了控制牛结核, 需要作到预防、检疫、根除、治疗。
- 张秀华刘思国沈国顺路伟
- 关键词：牛结核牛分支杆菌
- 牛成熟叠朊蛋白基因的克隆表达及抗血清的制备
- 本研究以牛血液的总DNA为模板，PCR扩增牛叠朊编码基因(PRND)的ORF，克隆至pMD18T载体构建重组质粒BoPRND-T。再以BoPRND-T质粒为模板，扩增出编码牛成熟叠朊(bomDpl)的基因片段，与表达载体...
- 路伟
- 关键词：蛋白基因克隆表达
- 文献传递
- 三种哺乳动物朊蛋白基因的克隆与分析被引量：5
- 2006年
- 以外周血液的总DNA为模板,运用PCR方法克隆了汉族人、秦川黄牛和甘肃土种绵羊的Prnp基因,运用分子生物学软件对这些序列进行了分析比较。结果表明,获得的3种哺乳动物的Prnp基因均位于1个单一的外显子内,与GenBank中登录的相应序列具有高度同源性,达99.0%。牛与绵羊Prnp基因同源性为97.3%,推导氨基酸序列同源性为96.5%。人Prnp基因与黄牛和绵羊Prnp基因的同源性分别为86.7%和87.1%,其氨基酸序列的同源性均为90.0%。3种Prnp基因均有富含G-C的重复区,编码的PrP蛋白均由氨基端的信号肽、中间的成熟蛋白和羧基端的GPⅠ锚结合位点组成。基因型分析表明,秦川黄牛和甘肃土种绵羊可能存在感染海绵状脑病的风险。
- 张杰刘永生陈豪泰姜海霞路伟朱小玲谢庆阁
- 关键词：海绵状脑病朊蛋白基因朊病毒绵羊
- 牛朊蛋白27-30基因的克隆与表达被引量：3
- 2007年
- 利用PCR技术,从含有牛朊蛋白(Prion protein,PrP)基因Prnp的开放阅读框的克隆质粒BoPrnp-T中扩增出约420 bp的目的基因(PrP^(27-30)基因)。将PrP^(27-30)基因和载体pPIC9K分别用限制性核酸内切酶EcoR I和Not I进行双酶切,T4 DNA连接酶作用后,转化至E.coli JM109中,构建重组表达载体pPIC9K-boPrP^(27-30) pPIC9K-boPrP^(27-30)经限制性核酸内切酶Sal I线性化后电转至毕赤酵母GS115中,经G418筛选后得到高拷贝的重组菌株GS115/pPIC9K-boPrP^(27-30)。GW115/pPIC9K_boPrP^(27-30)经1.0%甲醇诱导后,表达产物用SDS-PAGE和Western blot分析,结果表明牛PrP^(27-30)基因在毕赤酵母细胞中获得表达,表达产物的分子量约为27 Ku。能够被单克隆抗体SAF-70识别。
- 路伟张鹏张杰刘永生卫广森陈豪泰姜海霞朱小玲
- 关键词：克隆
- 中国黄牛成熟叠朊蛋白及其多克隆抗体的制备方法
- 本发明涉及一种采用基因工程制备中国黄牛叠朊蛋白和用这种蛋白制备免疫抗体的方法，以及这种蛋白和相应抗体的用途。
- 张杰刘永生路伟孙德惠陈豪泰刘湘涛才学鹏
- 文献传递
- 秦川黄牛成熟朊蛋白单克隆抗体的制备及鉴定
- 2006年
- 目的制备及鉴定抗秦川黄牛成熟朊蛋白的单抗。方法用重组成熟朊蛋白免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与SP2/0细胞融合,以间接ELISA方法筛选能够稳定分泌抗成熟朊蛋白的单抗的杂交瘤细胞株。以亲和层析法纯化腹水抗体,检测其Ig类和亚类、效价、相对亲和力以及特异性,并用基因片段表达作图法初步分析抗原表位。结果获得了能够稳定分泌抗牛成熟朊蛋白的杂交瘤细胞株N64,分泌的抗体属于IgG2a,腹水效价为1×105,相对亲和力为0.15μg/ml,Western blot表明该单抗具有较强的特异性。表位分析显示N64单抗仅与羧基端重组朊蛋白反应。结论抗牛成熟朊蛋白的腹水单抗N64效价高、亲和力和特异性强,可以作为疯牛病免疫诊断的核心试剂。
- 朱小玲刘永生张杰吴润陈豪泰姜海霞路伟谢庆阁
- 关键词：牛海绵样脑病单克隆抗体间接ELISA
- 牛、羊、人叠朊基因的克隆与分析被引量：3
- 2007年
- 为了解我国哺乳动物叠朊基因Prnd的生物信息,本实验采用PCR方法克隆了秦川黄牛、甘肃土种绵羊和汉族人的Prnd,运用分子生物学软件对这些序列进行了分析比较。结果表明,获得的三种哺乳动物的Prnd均位于1个单一的外显子内,与GenBank登录的相应序列具有高度同源性。秦川黄牛与甘肃土种绵羊Prnd的同源性为96.8%,推导氨基酸序列同源性为93.3%。汉族人Prnd与秦川黄牛和甘肃土种绵羊Prnd的同源性均为80%,推导的氨基酸序列同源性均为76.3%。氨基酸一级结构分析显示3种Prnd编码的叠朊均由氨基端的信号肽、中间的成熟蛋白和羧基端的GPI锚结合区组成。二级结构预测表明,3种Prnd编码的叠朊均由3个α-螺旋和2个β-片层组成。本研究获得的这3种主要哺乳动物的Prnd信息为一进步研究叠朊的结构与功能奠定了基础。
- 张杰张鹏刘永生陈豪泰姜海霞路伟朱小玲谢庆阁
- 关键词：传染性海绵状脑病朊蛋白朊蛋白基因
