赵永贞
- 作品数：48 被引量：119H指数：5
- 供职机构：广西水产研究所更多>>
- 发文基金：国家科技支撑计划国家现代农业产业技术体系建设项目广西壮族自治区科学研究与技术开发计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 转基因鼠及基因沉默技术的研究
- 郑新民刘西梅乔宪凤魏庆信谷习文华文君肖红卫王亚刚丁军涛周荆荣李莉田永祥刘中华赵永贞李聚学
- 该成果中的相关技术比较成熟：其中①原核注射构建转基因鼠技术较广的应用于医学模型和功能基因验证，先后进行多种基因功能测试，构建成功转单基因小鼠8种，转双基因小鼠2种；②鼠基因沉默技术除在遗传工程小鼠上的大量工作和应用外，还...
- 关键词：
- 关键词：转基因鼠动物实验
- 凡纳滨对虾精荚低温保存方法
- 本发明公开了一种凡纳滨对虾精荚低温保存的方法，包括精荚采集、精荚固定、精荚保存和精子染色过程，采用浓度为1.8～3.0％的自制I型液态鼠尾胶原0.3～0.4份为培养层收缩的介质，与2×1640培养液0.3～0.4份，美国...
- 陈秀荔赵永贞陈晓汉谢达祥杨春玲蒋伟明
- 三维子宫组织的构建及形态学观察被引量：1
- 2008年
- 本研究旨在体外构建含有3种细胞的三维子宫组织。体外成功分离和培养兔子宫内膜细胞和平滑肌细胞,将3代以内的平滑肌细胞以1×107/mL与3 mg/mLⅠ型鼠尾胶原和Matrigel(4∶1)的混合物混合,迅速接种在自制的模具中,置于37℃、体积分数5%CO2培养箱中待其凝固,以同样的方法接种1×107/mL子宫内膜基质细胞,待其凝固后接种上皮细胞悬液,将其置于37℃,体积分数5%CO2培养箱中培养。采用HE染色和免疫组织化学染色方法观察和鉴定三维子宫组织。结果表明,在体外成功地构建了含有3种细胞结构的类似于在体子宫组织的三维子宫组织;HE染色观察,在静态外力作用下,培养10 d的子宫组织细胞呈明显的按拉伸方向排列;细胞在细胞外基质中自由移动,上皮层呈弯曲状;免疫组织化学染色可以观察到具有3层细胞结构的子宫组织,弯曲的上皮层细胞呈柱状。可见子宫内膜细胞和平滑肌细胞能在细胞外基质中生长;建立了一套由3种细胞组成的类似于在体子宫组织结构的三维子宫培养体系;为胚胎植入机理的研究提供良好的体外模型。
- 陈秀荔赵永贞尹宝英张彦明
- 关键词：子宫内膜细胞平滑肌细胞胶原免疫组织化学染色
- 对虾WSSV病毒VP281基因的siRNA筛选研究
- 2011年
- 构建一个对虾WSSV VP281基因的siRNA筛选体系,获取有效siRNA,为进一步开展siRNA抗WSSV研究建立基础。根据已报道的VP281基因编码序列,设计并合成一对引物,扩增出带双酶切位点的VP281。对VP281和质粒pEGFP-C1分别酶切后进行连接,获取表达载体pEGFP-VP281。利用专业软件设计3对靶向VP281的siRNA(VP281-siRNA1﹑VP281-siRNA2﹑VP281-siRNA3),并合成siRNA,将3种siRNA分别与pEGFP-VP281共转染PK细胞。采用Western blot方法检测GFP-VP281融合蛋白的表达,半定量RT-PCR方法检验siRNA抑制VP281基因转录的效果。结果显示,pEGFP-VP281可在BHK细胞正常表达融合蛋白GFP-VP281。3对siRNA对GFP-VP281的mRNA转录均有不同程度的干扰效果,siRNA2的干扰效果最为显著。构建针对WSSV-VP281基因的siRNA筛选体系,初步验证了该系统的有效性,为开展siRNA抗WSSV研究建立了基础。
- 黎铭陈晓汉陈秀荔彭金霞马春霞蒋伟明彭敏赵永贞杨春玲李咏梅
- 关键词：对虾WSSVRNA干扰
- 对虾肝胰腺坏死性细菌研究进展
- 2008年
- 坏死性肝胰腺炎(Necrotizing hepatopancreatitis,NHP)对世界对虾养殖业危害极大。NHP是由一种专性细胞内寄生的革兰氏阴性菌——肝胰腺坏死性细菌(Necrotizing hepatopancreatitis bacterium,NHPB)引起的。NHPB是一种类立克次体的α蛋白菌。目前在美洲中部和南部的几个国家蔓延,受感染的虾池其对虾的死亡率可高达95%。目前已被世界动物卫生组织(OIE)列入高危病原。文章综述了NHPB研究进展,对NHPB的形态特征、理化特性、引起的症状和病理变化、检测方法和防治等问题进行了介绍。
- 王大鹏韦嫔媛赵永贞杨彦豪陈晓汉
- 关键词：对虾
- 基于HSP60基因哈氏弧菌PCR检测方法的建立被引量：1
- 2013年
- 研究基于哈氏弧菌HSP60基因序列设计1对特异性引物,通过优化PCR条件,特异性及敏感性检测,建立了一套哈氏弧菌特异性PCR检测方法。结果表明,该PCR检测方法可使分离自患病南美白对虾的哈氏弧菌扩增出238 bp的HSP60基因片段,其他五种对照病原弧菌未扩增出任何条带;检测方法最低能检测出2.1 pg的哈氏弧菌基因组DNA。表明建立的哈氏弧菌PCR检测方法可用于该菌引起的水产动物疾病的快速诊断。
- 何苹萍赵永贞陈秀荔张彬黄婷彭敏杨春玲杨彦豪李咏梅邵朋威陈晓汉
- 关键词：南美白对虾哈氏弧菌PCR检测
- 对虾类幼体孵化方法及装置
- 本发明涉及一种对虾类幼体孵化的方法，其特点是：该方法包括以下步骤：一、对虾孵化装置的设计，二、孵化水体的准备，三、虾卵受精和孵化，四、幼体收集和洗涤；实现以上所述的对虾类幼体孵化的方法所采用的孵化装置，包括孵化桶、孵化桶...
- 赵永贞谢达详陈秀荔陈晓汉阮志德
- 家兔子宫内膜细胞和平滑肌细胞的分离培养被引量：6
- 2007年
- 本试验旨在体外分离培养兔子宫内膜细胞(腺上皮细胞和基质细胞)和平滑肌细胞,并且探讨纯化子宫内膜上皮细胞和基质细胞的方法。用差速离心法和差速贴壁法获得纯化的子宫内膜上皮细胞和基质细胞,用滤网法分离得到子宫平滑肌细胞,分别在添加20%胎牛血清(FBS)、100μg/mL牛胰岛素、63.5 nmol/L雌二醇(E2)、7.14nmol/L孕酮(P4)的DMEM/F12(1∶1)培养液和37℃5%CO2的饱和湿度条件下培养;用免疫组化和免疫荧光法鉴定细胞并检测分离的细胞纯度。结果表明用该方法成功地分离培养了兔子宫内膜上皮细胞和基质细胞,且2种细胞纯度都达98%左右,基质细胞出现蜕膜化;子宫平滑肌细胞的纯度为97%左右,而且出现横纹状的生长。本研究表明子宫内膜细胞和平滑肌细胞能够在体外成功培养;在含20%FBS、100μg/mL牛胰岛素、63.5 nmol/L E2、7.14 nmol/L P4的DMEM/F12(1∶1)培养液和37℃5%CO2饱和湿度的培养条件下最有利于体外培养的子宫内膜细胞和平滑肌细胞的生长。
- 陈秀荔赵永贞靳亚平张彦明
- 关键词：子宫内膜细胞平滑肌细胞免疫组织化学免疫荧光蜕膜化
- RecA蛋白介导的转基因小鼠制备被引量：3
- 2008年
- 受精卵原核内核酸酶对外源基因的降解是导致显微注射法制备转基因动物效率低的重要原因之一,RecA蛋白可与单链DNA结合而阻止细胞核内核酸酶对单链DNA的降解。本试验建立了显微注射和RecA蛋白结合制备转基因动物的技术模型,并初步探讨了RecA蛋白对显微注射法制备转基因动物效率的影响。以单链DNA、RecA蛋白与单链DNA的复合体以及双链DNA为外源基因进行受精卵原核显微注射转基因试验,分别获得F0代小鼠28、41和32只,并通过PCR和Southern blot进行了转基因鉴定。结果显示,在小鼠受精卵原核显微注射Re-cA+ssDNA复合体获得的F0代中14.6%(6/41)为转基因个体,显微注射dsDNA获得的F0代中转基因个体占6.2%(2/32),而显微注射ssDNA获得的F0代中无一为转基因个体。
- 赵永贞肖邦张兴举唐中林崔文涛杨述林李奎
- 关键词：显微注射SSDNA转基因
- 凡纳滨对虾亲环素A基因的克隆及表达分析被引量：3
- 2011年
- 通过电子克隆所得基因序列设计引物,采用RT-PCR方法首次克隆得到长度为885 bp的凡纳滨对虾亲环素A（Cyclophilins A）CYPA基因cDNA序列,其开放阅读框为35~529 bp,可编码164个氨基酸.推算其分子量约为17.6×103,理论等电点为8.55.与其他物种的CYPA基因比对发现,该基因的氨基酸序列具有较高的保守性.基于氨基酸序列的聚类分析表明,凡纳滨对虾与斑节对虾的亲缘关系最近.荧光定量PCR的结果显示该基因在组织中广谱表达,在抗病组中,胃中的表达量最高,心脏中的表达量最低,差异约为2倍.而在感病组中,该基因在心脏中的表达量最高,肌肉中的表达量最低.利用ProtFun在线预测蛋白质的功能分类,表明CYPA基因可能是一免疫应答抑制因子,参与凡纳滨对虾免疫防御反应.
- 丁兆坤辛文伦陈秀荔赵永贞许友卿陈晓汉
- 关键词：凡纳滨对虾亲环素A克隆荧光定量PCR
