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耿士忠: 作品数：69 被引量：208H指数：8; 供职机构：扬州大学兽医学院江苏省人兽共患病学重点实验室更多>>; 发文基金：国家自然科学基金江苏省自然科学基金江苏省高校自然科学研究项目更多>>; 相关领域：农业科学生物学医药卫生文化科学更多>>

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嵌合鞭毛蛋白在大肠杆菌BL21(DE3)和沙门菌SL5928中的表达与组装分析（英文）: 2017年; 鞭毛蛋白根据能否组装可以表达为单体或多聚体。目前,关于它们之间的区别少有报道。文中,将重组质粒p ET-fli C/M2e2分别导入大肠杆菌BL21(DE3)和沙门菌SL5928中来表达嵌合鞭毛蛋白mfli C/M和pfli C/M,然后分析它们的组装特性。SDS-PAGE结果表明,两重组菌成功表达了嵌合鞭毛蛋白。透射电镜观察显示,在重组大肠杆菌表面未见鞭毛,而重组沙门菌表面呈现鞭毛。将嵌合蛋白纯化后,圆二色谱(Circular dichroism,CD)分析表明,两者的CD信号明显不同,pfli C/M的CD信号与野生型鞭毛蛋白一致,而mfli C/M基本上没有CD信号出现。动态光散射分析表明,mfli C/M的聚集程度明显低于pfli C/M。将嵌合蛋白转染小鼠腹腔细胞3 h后,两者均能诱导产生IL-1β,但mfli C/M组高于pfli C/M组。以上结果对于鞭毛蛋白表达形式的选择具有重要的参考价值。; 胡茂志潘志明杨芸孟闯张磊耿士忠焦新安; 关键词：鞭毛蛋白白细胞介素1Β

人禽共患病原婴儿沙门菌的流行现状与防治进展: 2021年; 沙门菌是一种重要的人兽共患病原菌,是世界动物卫生组织(WHO)法定报告的动物病原菌之一。沙门菌病不仅会对畜禽养殖业造成严重损失,而且可通过食物链传染给人,严重威胁人类健康,危害公共卫生安全。近年来,婴儿沙门菌在全球范围内的畜禽养殖业中分离率逐渐上升,其在人类中的感染率也在逐年升高。婴儿沙门菌是一种具有侵袭性的泛宿主沙门菌,也是一种重要的人畜共患病原菌。该菌不仅会引起人胃肠炎等疾病,而且能够感染家禽,导致感染动物发热、腹泻、肠道炎症和组织损伤等症状。当前婴儿沙门菌感染率和发病率逐年升高,给家禽养殖业带来了严重影响。基于婴儿沙门菌危害性日益突出,文章就婴儿沙门菌的流行现状、耐药现状、致病机制、鉴定方法及防治措施等进行总结,以期为研究婴儿沙门菌的致病机制和防治措施提供指导。; 王洋张健刘桂凤黄鹏耿士忠; 关键词：家禽养殖业世界动物卫生组织法定报告分离率公共卫生安全胃肠炎

大肠杆菌EscI蛋白C-末端多肽诱导巨噬细胞炎性体应答: 2015年; 【目的】分析E.coli的Esc I蛋白C-末端多肽诱导巨噬细胞NLRC4炎性体应答情况。【方法】以含有E.coli的Esc I蛋白C-末端氨基酸序列的多肽为材料,通过体外导入小鼠腹腔巨噬细胞,分析细胞的应答情况。【结果】利用脂多糖预先刺激后,含有Esc I蛋白C-末端15个氨基酸的多肽能够明显地激活细胞内NLRC4炎性体应答,细胞内半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶1被激活,细胞发生pyroptosis,细胞培养上清中IL-1β和IL-18的含量增加(P<0.05)。通过优化刺激条件发现,以多肽/脂质体为70μg/μL的比例导入细胞并孵育4 h时,IL-1β的分泌量最高。【结论】含有E.coli的Esc I蛋白C-末端15个氨基酸的多肽能够明显地诱导巨噬细胞NLRC4炎性体应答。; 胡茂志李文华严秋香耿士忠潘志明崔桂友焦新安; 关键词：巨噬细胞

禽源大肠埃希菌质粒介导的喹诺酮类药物耐药基因的检测被引量：8: 2010年; 从我国部分地区病、死家禽中分离到大肠埃希菌403株。按照CLSI(clinical and laboratory standards institute)推荐的K-B药敏纸片法对其中的344株分离株进行药敏纸片试验;根据GenBank上发表的序列,设计并合成了五对引物,对所有分离细菌进行质粒介导的喹诺酮类药物耐药基因的扩增:qnrA、qnrB、qnrS、aac(6′)-ib-cr和qepA。1993年-1996年禽源大肠埃希菌分离株仅对萘啶酸的耐药率超过60%;2001年-2008年禽源大肠埃希菌分离株对1-3代7种喹诺酮类药物的耐药率均超过58%。在403株禽源大肠埃希菌中共检出3(0.7%)株qnrB阳性菌株,2(0.5%)株qnrS阳性菌株,5(1.2%)株aac(6′)-ib-cr阳性菌株以及5(1.2%)株qepA阳性菌株,未检测到qnrA阳性菌株。结果显示,近20年来,我国禽源大肠埃希菌对喹诺酮类药物的耐药性不断上升,同时,质粒介导的喹诺酮类药物耐药基因在禽源大肠埃希菌中呈不断上升的流行趋势。; 张维秋潘渭涓陈祥耿士忠黄金林潘志明焦新安; 关键词：大肠埃希菌质粒介导

酪蛋白和巨细胞病毒(CMV)复合启动子激活人乳铁蛋白cDNA基因在转基因小鼠乳腺中表达: 为了提高转基因动物乳腺特异性表达水平，构建了两种不同启动子的乳腺特异性表达载体，以比较其乳腺特异性表达效果。应用山羊β-酪蛋白或α s1-牛酪蛋白调控序列、鸡β-球蛋白隔离元件、巨细胞病毒(CMV)基因表达调控元件构建了...; 成勇袁玉国张信军黄玉政张玉峰耿士忠; 关键词：人乳铁蛋白酪蛋白乳腺特异性表达; 文献传递

在网络环境下学生自主学习拓宽生物学知识的教学实践及体会: 2015年; 该教学实践,在充满诱惑的网络环境下,让学生自主学习英文版生物信息学软件的使用,学习者利用丰富的网络信息资源及与国外专家的交流,成功实现预期目标,并将所学知识传授给其他学生。成功教学实践促使教师进一步利用网络资源进行生物学教学改革,也拓宽了学生生物学知识和激发他们学习的兴趣。; 耿士忠潘志明陈祥殷月兰焦新安; 关键词：网络生物学

“纸上谈兵”话创新——大学本科生实验自主设计教学改革初探被引量：3: 2018年; 本文实验教学过程中,改变以往学生被动式按照标准实验操作验证某一实验,对实验原理及实验设计思考较少的现象,转换思路使学生先行"纸上谈兵",促使学生主动设计实验,增加实验设计过程中讨论及实验趣味性等过程,提高学生灵活运用知识的能力,以及培养学生逻辑思维和表达能力。; 耿士忠潘志明黄金林孙林; 关键词：实验教学

我国地方品种鸡IL-17 cDNA的克隆、表达及鉴定被引量：1: 2011年; 目的:克隆我国地方品种鸡IL-17 cDNA,构建该基因的原核表达质粒,获得融合表达蛋白并鉴定其免疫特性。方法:利用特异性引物,通过RT-PCR方法扩增得到隐性白羽鸡IL-17(ChIL-17)的基因片段,PCR产物克隆至原核表达载体pGEX-6P-1中,构建重组表达质粒pGEX-6P-1-ChIL17。将重组质粒pGEX-6P-1-ChIL17转化E.coliBL21,IPTG诱导表达目的蛋白,应用SDS-PAGE和Western blot分析鉴定表达产物。结果:成功扩增出ChIL-17基因片段,大小约510 bp,序列与GenBank登录的序列(NM 204460)相比,核苷酸同源性为99.8%,第477位碱基由G变为A,氨基酸同源性为100%。酶切鉴定结果表明,ChIL-17基因正确克隆入原核表达载体pGEX-6P-1中。重组质粒pGEX-6P-1-ChIL17在大肠杆菌中获得表达,SDS-PAGE结果显示出Mr约46 000大小的目的蛋白表达条带;Western blot结果表明,表达产物与小鼠IL-17抗体具有良好的反应性。结论:成功克隆并表达出我国地方品种鸡ChIL-17基因,为抗ChIL-17单克隆抗体的研制奠定了基础。; 赵雯潘志明耿士忠方强丛秋霞焦新安; 关键词：IL-17 克隆原核表达

鸡细胞因子实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用被引量：6: 2010年; 根据鸡IL-6I、L-1β、IFN-γ、TGF-β4 mRNA的保守序列设计特异性引物,提取经鞭毛蛋白刺激的鸡巨噬细胞HD11总RNA,并反转录成cDNA,建立了实时荧光定量PCR方法。结果显示,融解曲线均呈单一峰;同一份cDNA经过3个相同反应体系的实时荧光定量PCR扩增后,其扩增曲线基本重合。HD11细胞经鞭毛蛋白刺激后,前炎性细胞因子IL-6和IL-1β的相对表达量分别为14.90和29.09,与对照组相比显著升高(P<0.05);而IFN-γ与抗炎性细胞因子TGF-β4的相对表达量无显著变化(P>0.05)。应用该方法检测了3份沙门菌感染鸡血液样品异嗜白细胞中这4种细胞因子的表达水平,前炎性细胞因子IL-6、IL-1β的相对表达量分别为6.19和2.39,与对照组相比显著升高(P<0.05);TGF-β4的相对表达量无明显变化(P>0.05)。结果表明,建立的实时荧光定量PCR方法特异性强、重复性好,为定量检测鸡细胞因子的一种快速、准确的方法。; 丛秋霞耿士忠方强潘志明焦新安; 关键词：实时荧光定量聚合酶链反应细胞因子

双特异性抗体阳离子纯化工艺研究: 2023年; 开发某双特异性抗体的阳离子纯化工艺,去除聚集体及片段,提高该抗体产品质量。方法本研究通过对阳离子层析步骤填料载量、不同淋洗及洗脱条件等进行研究评估,筛选出高质量高回收率的纯化工艺。结果采用阳离子层析填料Fractogel EMD COO-(M),当上样载量控制25.0~35.0mg/mL,洗脱液比例在12.5%~15.0%、淋洗CV数4~8CV范围内时,蛋白单体含量大于98.0%,抗体回收率可大于60.0%。结论弱阳离子填料Fractogel EMD COO-(M)能够有效地去除该抗体的聚集体和片段,该工艺操作简单,稳定性好,易放大,满足规模化生产需求。; 张山洪李星张娜李瑞胜耿士忠; 关键词：双特异性抗体纯化工艺抗体片段

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