王箭 作品数:31 被引量:85 H指数:5 供职机构: 重庆医科大学检验医学院临床检验诊断学省部共建教育部重点实验室 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 国家教育部博士点基金 重庆市自然科学基金 更多>> 相关领域: 医药卫生 生物学 自动化与计算机技术 理学 更多>>
高效液相色谱紫外检测法同时测定小鼠红细胞中S-腺苷甲硫氨酸和S-腺苷同型半胱氨酸 被引量:3 2013年 建立了高效液相色谱紫外检测同时测定红细胞中S-腺苷甲硫氨酸(SAM)和S-腺苷同型半胱氨酸(SAH)的方法。采用ZORBA×Eclipse×DB-C8色谱柱(150 mm×4.6 mm,5μm),以含3 mmol/L庚烷磺酸钠的40 mmol/L磷酸钠缓冲溶液(pH 3.72)-甲醇(95∶5,V/V)为流动相,流速0.9 mL/min,柱温35℃,紫外检测波长设置:0~8.00 min,450 nm;8.01~16.00 min,260 nm。SAH与SAM的线性范围分别为0.25~3.0 mg/L和0.50~10 mg/L,检出限分别为0.15和0.07 mg/L。方法日内和日间相对标准偏差(RSD)分别小于6.5%和7.4%,平均回收率为80.9%~116.2%。利用本方法对19例叶酸缺乏孕小鼠和11例健康对照孕小鼠红细胞进行测定。结果表明:叶酸缺乏组SAH明显高于健康对照组,而SAM两组间无显著差异。 唐秀芳 王箭 张晓清 高茹菲 丁敏关键词:高效液相色谱 S-腺苷甲硫氨酸 S-腺苷同型半胱氨酸 红细胞 染色体数目异常滋养层细胞中CENP-I基因的的异常表达 被引量:3 2008年 目的:探讨人胚胎滋养层细胞中染色体数目异常与着丝粒特异性蛋白质CENP-I表达水平的相关性。方法:T-A克隆制备CENP-I、GAPDH定量PCR标准品;用Ni2+-NTA亲和层析柱纯化CENP-I重组蛋白,免疫兔制备抗人CENP-I多克隆抗体;采用FQ-PCR和Western-blot检测23例染色体数目异常的滋养层细胞(实验组)和30例具有正常核型的滋养层细胞(对照组)中CENP-ImRNA和蛋白表达水平。结果:成功制备CENP-I、GAPDHFQ-PCR标准品,表达和纯化CENP-I重组蛋白,获得兔抗人CENP-I多克隆抗体;FQ-PCR和Western-blot结果显示CENP-I在实验组和对照组中均有表达,但实验组中CENP-I的表达水平明显降低(P<0.05)。结论:CENP-I表达的降低可能是导致人胚胎滋养层细胞中染色体数目异常的原因之一。 蔡燕 王箭 袁泰先 翁亚光 施琼 刘子杰 刘斌 王应雄关键词:滋养层细胞 染色体数目异常 有丝分裂关卡基因致染色体数目异常自然流产胚胎发生的机制 被引量:3 2008年 目的探讨有丝分裂关卡基因(hBUB1)在染色体数目异常自然流产胚胎发生中的可能机制。方法采用实时定量逆转录(RT)-PCR和免疫印迹法(WB)检测染色体数目异常组和正常对照组的自然流产胚胎组织中目的基因在mRNA和蛋白水平的表达;构建针对hBUB1基因的短发卡状(shRNA)表达载体,用细胞免疫化学、WB和实时定量RT-PCR方法评价其对胚胎细胞内源性hBUB1表达的干扰效果;用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT)试验测定细胞增殖抑制率;用流式细胞术解析细胞周期分布。结果hBUB1蛋白在染色体数目异常组中的表达显著低于正常对照组(阳性表达率分别为8%和93.5%,P〈0.05)。shRNA的重组质粒表达载体能明显抑制胚胎细胞中hBUB1基因的表达(干扰前后mRNA水平分别为0.196±0.067和0.042±0.006,P〈0.05)。胚胎细胞转染有效干扰质粒48h后,染色体数目异常组细胞增殖抑制率达62%,显著高于正常对照组(4%,P〈0.05)。有效干扰质粒引起G2/M期细胞从对照组的40.2%和41.3%降低至21.3%。结论hBUB1基因表达下调可导致细胞增殖的抑制和周期的改变,在染色体数目异常自然流产胚胎发生中可能起很重要的作用,这将为寻找可靠的临床检测指标奠定基础。 施琼 袁泰先 王箭 翁亚光 王应雄 徐远久 刘子杰 蔡燕关键词:胚胎 染色体畸变 蛋白质丝氨酸苏氨酸激酶 逆转录聚合酶链反应 免疫印迹法 阻断ERK1/2蛋白激酶可促进BMP9诱导的C_3H10T1/2细胞成骨分化 2012年 目的:初步分析丝裂原活化蛋白激酶家族成员ERK1/2在BMP9诱导间充质干细胞成骨分化中的作用及可能机制。方法:BMP9重组腺病毒感染C3H10T1/2细胞,Western blot检测ERK1/2激酶的磷酸化。ERK1/2的特异性抑制剂PD98059阻断ERK1/2活性,细胞化学染色和活性定量检测碱性磷酸酶(Alkaline Phosphatase,ALP)的表达情况;Western blot检测骨桥蛋白(Osteopontin,OPN)表达,茜素红染色检测钙盐沉积情况;荧光素酶报告基因实验检测Smad经典途径的变化。RNA干扰抑制ERK1/2表达,分析其对于BMP9诱导的C3H10T1/2细胞ALP活性和钙盐沉积的影响。结果:BMP9可以促进ERK1/2激酶的磷酸化;ERK1/2抑制剂PD98059可增强由BMP9诱导的C3H10T1/2细胞早期和晚期成骨分化,并促进由BMP9诱导的Smad经典途径的活化;RNA干扰导致ERK1/2基因沉默同样也可促进BMP9诱导的C3H10T1/2细胞成骨分化。结论:BMP9可以促进ERK1/2蛋白激酶的活化,而阻断ERK1/2蛋白激酶可进一步增强BMP9诱导的C3H10T1/2细胞成骨分化。 王箭 何娟文 王锦 胡晶 罗进勇 曾照芳关键词:间充质干细胞 ERK1/2 成骨分化 重庆市公共场所吸烟现状分析及干预对策研究 被引量:9 2011年 目的:了解重庆市公共场所吸烟状况和控烟工作开展情况,为政府制定干预措施提供依据。方法:在全市学校、医院、政府机关、公共交通工具及餐厅等公共场所使用分层随机抽样法进行调查,每类选择5至15个场所,每个场所选10至20个点进行现场观察、在场所内进行15人以上的拦截调查。结果:我市目前吸烟率很高,且男性高于女性:人群二手烟暴露严重;知晓吸烟会引起肺癌、心脏病发作、中风等疾病的比例较高,知晓二手烟会引起相关疾病的比例也较高;支持对公共场所室内全面禁烟的比例从高到低依次为:公共交通工具、学校、医院、办公室、餐厅、酒吧。即便是吸烟者,对全面禁烟的支持率也很高。结论:我市公众对吸烟危害的知晓率较高:但公共场所现行吸烟情况与全面禁止吸烟差距明显,控烟行为形成率差,造成被动吸烟现象普遍、暴露人群很高。需尽快针对目标人群展开控烟工作,扩大控烟覆盖范围,进行健康教育宣传,提高群众控烟意识。须尽快制定《重庆市公共场所控烟条例》加大政策干预强度。 王箭 曾照芳 吴成斌 顾亮关键词:吸烟现状 控烟 干预对策 基于DNA-AuNPs信号放大的肠出血性大肠埃希菌快速检测电化学生物传感器 被引量:1 2017年 快速检测肠出血性大肠埃希菌(EHEC)有利于疾病的早期诊断,为医生合理使用药物提供指导。本实验基于DNA修饰的金纳米粒子(DNA-AuNPs)与亚甲蓝(MB)结合进行信号放大构建了一种灵敏的电化学生物传感器。采用透射电镜(TEM)和紫外可见吸收光谱(UV-Vis)对该生物传感器的修饰进行表征,利用交流阻抗法(EIS)、循环伏安法(CV)和差分脉冲伏安法(DPV)进行电化学性能检测。该方法的检测范围是100pM到50nM,检测限为75pM(S/N=3)。与传统细菌分离培养方法相比,该方法具有快速、灵敏等优点,对EHEC的早期诊断有着巨大潜力。 陈中平 李俊龙 余文 王箭 邹正渝 汪婷 谢国明关键词:肠出血性大肠埃希菌 RRNA基因 电化学生物传感器 基于多壁碳纳米管的三电极血乙醇生物传感器的研究 被引量:9 2010年 采用丝网印刷技术在PVC基板上印制三电极,将多壁碳纳米管、麦尔多拉蓝、乙醇脱氢酶(ADH)以及氧化型辅酶Ⅰ(NAD+)依次修饰在工作电极表面,然后在该三电极表面贴一层亲水膜,形成一个5μL反应池,制成血乙醇检测新型生物传感器检测条。结果表明,此生物传感器具有良好的准确性和稳定性;检测线性范围为0.5~20mmol/L,r=0.99493;检出限为0.22mmol/L;电流达到95%稳态时间小于15s。考察了pH值、温度及干扰物对生物传感器的影响。用此生物传感器和顶空气相色谱法对10份全血标本乙醇浓度平行测试,两者相关性良好r=0.97583。利用虹吸现象吸取微量全血直接定量测定乙醇浓度是此生物传感器的特点。 甄生航 郑军 邹超世 王艳 朱洋 邓世雄 谢国明 王箭关键词:丝网印刷技术 多壁碳纳米管 生物传感器 miR-21的高表达与乳腺癌预后关系的meta分析 2013年 目的:评价miR-21的高表达与乳腺癌预后的相关性。方法:检索PubMed,MEDLINE,EMBASE,Web of science,维普,CNKI数据库,收集从建库至2013年9月期间关于miR-21的高表达与乳腺癌预后相关性的文献,用meta分析方法评价miR-21的高表达是否与乳腺癌的预后相关。结果:共纳入4篇文献(总计548个病例),总生存率(OS)HR的合并值为1.61(95%CI:1.09至2.37,P<0.05)。结论:miR-21的高表达是乳腺癌预后的一个危险因素。 郭仲莉 王箭关键词:META分析 乳腺癌 MIR-21 自然流产胚胎组织中人类纺锤体有丝分裂俘获缺陷基因的表达及意义 被引量:1 2008年 目的 探讨自然流产胚胎组织中人类纺锤体有丝分裂俘获缺陷(hsMAD)2基因的表达,以及hsMAD2基因表达降低与染色体数目异常的相关性。方法 采集2006年3月至2007年3月重庆医科大学附属第一、第二医院妇产科自然流产患者的胚胎组织标本33份,其中流产1次者23份,流产2次及以上者10份;同时采集人工流产患者的胚胎组织标本35份。采用FQ-PCR和蛋白印迹法检测自然流产和人工流产胚胎组织中hsMAD2基因的mRNA和蛋白表达水平;原代培养人工流产胚胎组织并经染色体分析筛选出5例具有正常核型的胚胎细胞,构建hsMAD2基因的短发夹RNA(shRNA)表达载体,转染筛选出来的胚胎细胞以抑制其内源性hsMAD2基因的表达,将细胞分为实验1组(转染重组干扰质粒pshRNA-hsMAD2-1)、实验2组(转染pshRNA-hsMAD2-2)、实验3组(转染pshRNA-hsMAD2-3)、对照1组(未做任何处理)、对照2组(转染pTZU6+1干扰质粒空载体)、无关对照组(转染pshRNA-N1)。用蛋白印迹法和定量PCR技术评价shRNA的干扰效果,四甲基偶氮唑蓝比色法测定胚胎细胞增殖抑制率,流式细胞技术检测胚胎细胞周期的分布,并计算染色体数目的变化。结果 (1)自然流产1次者、自然流产2次及以上者、人工流产者的胚胎组织中hsMAD2基因mRNA的表达量分别为0.00879±0.00035、0.00901±0.00033、0.00941±0.00026,3者分别比较,差异均无统计学意义(P〉0.05);hsMAD2蛋白的表达量分别为0.2791±0.0311、0.0431±0.0020、0.5790±0.0331,3者分别比较,差异均有统计学意义(P〈0.05)。(2)shRNA的重组质粒表达载体能明显抑制胚胎细胞中hsMAD2基因的表达,转染有效干扰质粒后,实验1组胚胎细胞的增殖抑制率为54%,分别与对照1组(4%)、对照2组(3%)比较,差异均有统计学意义(P〈0.05);G2/M期细胞比例实验1组� 蔡燕 王箭 袁泰先 施琼 翁亚光 王应雄 蒋洪彦 刘子杰关键词:胚胎 钙结合蛋白质类 细胞周期蛋白质类 小分子干扰 核酸纯化对蝎型探针定量PCR准确检测结核分枝杆菌DNA的必要性研究 2007年 目的探讨经煮沸、Chelex 100树脂处理、核酸纯化三种方法平行处理的标本在进行结核分枝杆菌蝎型探针荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测中的有效性,以得到标本的最佳处理效果。方法收集42例结核确诊患者的多种标本和14例非肺结核患者的痰标本,对其分别用上述3种方法平行处理后,采用蝎型探针荧光定量PCR法进行检测,并分析其结果。结果核酸纯化法处理的标本阳性检出率为100%,明显高于煮沸法57.14%和Chelex 100树脂法52.38%(分别为P=0.0103,P=0.0233);尤其是外观呈血性和菌阴性的标本,采用核酸纯化法处理标本后检测所得结核DNA量较其他方法处理所得量高约1~2个数量级。结论标本的处理对于结核分枝杆菌蝎型探针荧光定量PCR检测十分重要,煮沸(裂解)法和Chelex 100树脂法不适合用以处理临床标本,而应使用核酸纯化法。 王虹 王箭 阳强 朱旦 尹一兵关键词:聚合酶链反应 结核