王海烽
- 作品数：8 被引量：19H指数：4
- 供职机构：新疆农业大学动物医学学院更多>>
- 发文基金：新疆维吾尔自治区高技术研究发展计划项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- O型口蹄疫病毒VP1蛋白原核表达及结构预测
- 口蹄疫(foot and mouth disease，FMD)是由口蹄疫病毒(foot and mouthdisease virus，FMDV)引起的偶蹄动物发生的急性、热性、高度接触性传染病。当前对口蹄疫的预防工作极为...
- 王海烽
- 关键词：O型口蹄疫病毒VP1蛋白原核表达
- 文献传递
- IPTG诱导浓度、时间对AsiaⅠ型口蹄疫病毒VP1蛋白表达的影响被引量：4
- 2009年
- 将口蹄疫病毒VP1基因插入原核表达载体pET-28a中,转化至大肠杆菌BL21。用不同的IPTG浓度与不同诱导时间诱导菌株表达VP1蛋白,分析不同IPTG浓度及不同诱导时间对蛋白表达量的影响,以确定最佳表达条件。结果表明,在一定范围内,随IPTG浓度的增高,表达量并不会随之增大;而在菌体对数生长期内,随诱导时间的延长,表达量会随之增大。最后确定当IPTG浓度为3 mmol/L,诱导表达到最长时间9 h时,VP1蛋白表达量最大。
- 魏婕易忠魏玉荣王海烽胡尔玛西符子华冉多良
- 关键词：口蹄疫病毒VP1蛋白IPTG
- 口蹄疫病毒VP1基因的原核可溶性表达被引量：5
- 2009年
- 针对重组原核表达载体表达目的蛋白以包涵体形式存在的问题,作者对影响外源蛋白表达的IPTG的浓度、温度、时间等因素均进行了探索,以观察VP1蛋白的可溶性情况。通过PCR技术将VP1基因克隆至pGEM-T载体中,然后将pET-28a(+)和pGEM-T载体分别进行双酶切,构建重组的pET-28a-VP1载体,将重组载体转化至BL21中,诱导后经SDS-PAGE检测可见约29 ku的目的蛋白条带。插入的外源目的蛋白主要以包涵体的形式存在,上清中的可溶性蛋白甚微。试验结果表明,这可能与蛋白本身的氨基酸组成有重要关联。
- 王海烽易忠魏玉荣魏婕胡尔马西符子华
- 关键词：口蹄疫病毒VP1基因原核可溶性表达
- O型口蹄疫病毒VP1基因在2种原核表达载体上的表达被引量：1
- 2009年
- 设计1对引物将口蹄疫病毒(foot and mouth disease virus,FMDV)VP1基因克隆到T载体上,通过NdeI和XhoI双酶切VP1基因和pET-28(a),在T4连接酶的作用下构建重组表达载体pET-28a-VP1;然后用EcoR I和XhoI双酶切VP1基因与pET-41(a),在T4连接酶的作用下构建重组表达载体pET-41a-VP1;然后将这2个新构建的载体分别通过热冲击法转化BL21(DE3),37℃不同IPTG浓度和32℃、0.01 mmol/L IPTG诱导表达,SDS-PAGE结果显示pET-28a-VP1的表达量高于pET-41a-VP1,在DTT和乙醇的作用下,二者均没有可溶性蛋白出现。
- 王海烽易忠魏玉荣胡尔马西符子华
- 关键词：口蹄疫病毒VP1基因原核表达
- 狂犬病病毒SRV_9株N、P、G和L蛋白基因的克隆及表达载体构建被引量：8
- 2009年
- 以狂犬病病毒RNA为模板,采用RT-PCR方法克隆获取N、P、G及L蛋白编码基因核苷酸序列,应用定向克隆技术,构建真核表达载体pcDNA3.1-N、pcDNA3.1-P、pcDNA3.1-G及pcDNA3.1-L。经测序鉴定证实获取的N、P、G及L蛋白区全长核苷酸序列与文献报道的一致,并成功构建了其真核表达载体。
- 魏玉荣易忠符子华马素贞王晓萍简子健魏婕王海烽朱晶晶
- 关键词：基因序列分析表达载体构建
- 狂犬病病毒SRV_9株修饰全长基因组cDNA克隆的构建被引量：3
- 2010年
- 为获得狂犬病病毒(rabies virus,RV)SRV9株的基因组全长cDNA克隆并对其进行基因修饰,深入研究狂犬病病毒的基因组特性及构建新型病毒载体,本研究根据GenBank中公布的SRV9基因组序列设计数对引物,以SRV9病毒为材料,从病毒总RNA中将全长基因组11 928 bp分5段扩增,克隆至载体测序鉴定。测序正确后,设计引物缺失基因组Ψ区并在缺失位置插入人细胞色素C基因,又设计引物删除糖蛋白(G)胞质区(CD区)。利用引物在病毒基因组起始处添加锤头状核酶序列,在病毒序列结尾处添加了丁型肝炎核酶序列。再次测序后克隆至pcDNA3.1(+)载体,利用扩增片段自身内切酶位点顺次进行修饰后全长连接,从而获得含修饰SRV9全长基因组的质粒pcDNA3.1-SRV9,为RV感染性克隆的建立奠定了基础。
- 魏玉荣易忠符子华马素贞简子健胡尔玛西王海烽魏婕朱晶晶张先锋
- 狂犬病病毒口服疫苗株SRV9全长基因质粒的构建被引量：4
- 2009年
- 狂犬病病毒(Rabies Virus)是一种致死性的人畜共患病。为了深入研究狂犬病病毒的基因组特性及构建新型病毒载体,研究根据GenBank中已公布的狂犬病病毒口服疫苗株SRV9(登录号:AF499686)基因组序列设计数对引物,以SRV9病毒为材料,通过RT-PCR技术将总RNA中SRV9全长基因组11,928 bp分5段扩增,分别克隆到pMD18-T或pGEM-T载体测序鉴定。测序正确后,再克隆至pBluescript skⅡ(+)载体,利用扩增片段自身内切酶切位点顺次进行全长连接,获得含SRV9全长基因组的质粒pBLSRV9。通过基因组序列同源性比较分析,SRV9株具有稳定的遗传特性,为进一步探索狂犬病病毒的复制、感染、致病及免疫分子机制和研制新型狂犬病病毒疫苗奠定良好的基础。
- 魏玉荣易忠符子华马素贞王晓萍简子健王海烽魏婕
- 关键词：RT-PCR基因序列分析
- 狂犬病病毒修饰基因组的构建
- 2010年
- 【目的】利用反向遗传学技术在DNA水平上构建了狂犬病病毒修饰基因组。【方法】提取狂犬病病毒(Rabies Virus,RV)口服疫苗株SRV9基因组总RNA作为RT-PCR的扩增模板,并根据GenBank已发表的SRV9基因组序列设计引物,缺失狂犬病基因组Ψ区并在缺失位置插入人细胞色素C基因,再设计引物删除糖蛋白(G)胞质区(CD区)。缺失Ψ区及删除CD区时采用基因同源重组的方法进行。在缺失的Ψ区插入人细胞色素C基因时,利用引物引入酶切位点NheI和EcoRI,用PCR扩增出人细胞色素C基因并插入NheI和EcoRI位点。【结果】获得含预期的人细胞色素C基因,同时缺失了CD区与Ψ区的质粒pBSK-LA。【结论】全基因组测序结果表明已成功构建了狂犬病病毒修饰基因组。
- 魏玉荣易忠符子华马素贞简子健胡尔玛西王海烽魏婕朱晶晶
- 关键词：狂犬病病毒同源重组反向遗传学
