王嘉
- 作品数：48 被引量：64H指数：4
- 供职机构：中国兽医药品监察所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金北京市自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生生物学更多>>
- 鸡传染性法氏囊病病毒弱毒株在鸡体连续传代后毒力增强的分子机理研究被引量：2
- 2014年
- 将两株鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)弱毒株在SPF鸡体内连续传代至第5、第6代时,出现明显的法氏囊萎缩和B∶B指数下降,表明IBDV弱毒株在鸡体内连续传代后毒力增强。为进一步阐释哪些基因位点导致了上述毒力的变化,本试验测定了基础弱毒株及其在鸡体内传代后各个代次毒的基因组序列,比对分析后发现VP2蛋白253位氨基酸发生了由H到Q或N的变异,表明VP2蛋白253位氨基酸的替换可能会增强传染性法氏囊病病毒在鸡体内的致病性。
- 宫世玲王嘉毛娅卿吴涛王哲蒋桃珍
- 关键词：传染性法氏囊病病毒VP2蛋白
- 抗鸡传染性贫血病毒VP2蛋白单克隆抗体的制备及其应用研究
- 2024年
- 为制备针对鸡传染性贫血病毒(Chicken infectious anemia virus,CIAV)的单克隆抗体,以CIAV的VP2原核表达蛋白作为抗原免疫小鼠,经杂交瘤技术获得3株能稳定分泌抗VP2蛋白特异性抗体的细胞株,进一步经IFA筛选出特异性和灵敏度俱佳的杂交瘤细胞Mab-VP2-4株,制备的小鼠腹水效价达到1∶2000。结果显示,制备的抗VP2蛋白单克隆抗体可与多株CIAV感染的MDCC-MSB1细胞发生特异性反应,而对EDSV、ALV、ILTV、ARV以及空白MDCC-MSB1细胞、CEF细胞等均无交叉反应,特异性良好,且应用于IFA方法时对CIAV感染的最低检出限为5 TCID 50。以该单克隆抗体对市场上10种不同来源的禽活疫苗进行病毒分离结合单克隆抗体IFA检测,同时与《中国兽药典》规定的鸡检查法进行对比检测,结果一致,均未检出CIAV污染。本研究制备了针对CIAV VP2蛋白的特异性单克隆抗体,为该病特异性诊断方法的建立奠定了基础。
- 侯力丹薛麒王嘉孔冬妮吴宏举翟天舒邓永毛娅卿吴华伟孙瑶刘丹
- 关键词：鸡传染性贫血病毒VP2蛋白单克隆抗体间接免疫荧光
- 我国SPF鸡胚生产与质量控制现状分析被引量：3
- 2013年
- 从生产能力、饲养方式、微生物质量监测等方面介绍了我国SPF鸡胚发展概况,对我国SPF鸡胚生产与质量控制现状进行了调查与分析,并对存在的问题提出建议。经调查,2012年我国有20家SPF鸡生产企业生产SPF鸡胚年产量约5050万枚,其中年产600万枚以上的企业有3家,300万～600万枚的企业有4家,10家企业年产量在100万～200万枚之间,其他3家企业年产量少于100万枚。从供需情况可以看出,目前我国SPF鸡胚生产数已供大于求略有结余。
- 毛娅卿杨承槐吴涛孙晔王嘉王哲孔冬妮程水生
- 关键词：SPF鸡胚
- 鸡产蛋下降综合征病毒间接免疫荧光检测方法的建立及应用
- 2024年
- 为建立检测鸡产蛋下降综合征病毒(EDSV)的间接免疫荧光方法,并对该检测方法的各个步骤进行优化,以鸡产蛋下降综合征病毒多抗血清和FITC标记的兔抗鸡IgG为组合,对一抗和二抗的最适工作浓度和孵育时间进行了优化,对IFA方法进行了敏感性、特异性和重复性试验。结果表明,检测接种EDSV的96孔细胞培养板时,多抗血清的最适工作浓度为1∶320,孵育时间为45 min;FITC标记的兔抗鸡IgG的最适工作浓度为1∶200,孵育时间为30 min;病毒敏感性试验表明,该方法可以检测到10-2 TCID 50/mL的病毒;多抗血清敏感度试验表明,当多抗血清稀释到1∶1280时仍可见较明显的特异性荧光;特异性试验表明,该方法只针对EDSV,而不与禽副流感病毒4型、鸡新城疫病毒等其他病原反应;批内重复性试验和批间重复性试验结果表明,该方法具有较好的重复性和可靠性。结果表明,建立的间接免疫荧光方法具有较高的灵敏度和较好的稳定性,可为我国禽源性生物材料EDSV的检测提供技术支持,有巨大的市场需求。
- 孔冬妮王嘉邓永翟天舒刘丹黄小洁薛琪候力丹吴华伟薛青红李俊平毛娅卿
- 关键词：间接免疫荧光
- 抗禽多瘤病毒VP4蛋白单克隆抗体及其应用
- 本申请公开了一种结合APV结构蛋白VP4的单克隆抗体，一种编码所述单克隆抗体的核酸分子，一种用于检测和/或诊断禽多瘤病毒感染的试剂盒，以及所述抗体在用于诊断APV的试剂盒中的用途。本申请的单克隆抗体亲和力高、灵敏度高，对...
- 毛娅卿翟天舒王嘉汪溪闫佳佳孔冬妮邓永陈小云薛青红
- 鸡痘鹌鹑化弱毒株种子批的建立及鉴定
- 2017年
- 为保证制苗所用毒种质量和稳定性,在对鸡痘鹌鹑化弱毒株病毒含量、病毒纯净性、特异性、免疫原性及安全性等研究的基础上,建立了鸡痘鹌鹑化弱毒株种子批。将鸡痘鹌鹑化弱毒F278 E1(1966年6月3日冻干)通过鹌鹑连续传至4代(F282 E1)后,再经鸡胚传至14代(F282E14)。传代毒种的鉴定结果表明:抽检的各代次的毒种均无细菌、支原体、外源病毒污染,且病毒含量检测稳定,均≥10^(6.2)EID_(50)/0.2m L。将抽检的各代次的毒种制成活疫苗,免疫适龄鸡只后均能产生完全保护。因此,确定鸡痘鹌鹑化弱毒株基础种子代数为F282 E2-E6代,生产用毒种继代应不超过3代。种子批的建立,为鸡痘鹌鹑化弱毒株疫苗的生产奠定了基础。
- 毛娅卿王嘉吴涛王哲孔冬妮李岭李慧姣
- 关键词：种子批
- 外源性马立克氏病病毒荧光定量PCR检测方法的建立被引量：1
- 2023年
- 【目的】为解决现有兽用生物制品外源性马立克氏病病毒(Marek’s disease virus,MDV)检验方法灵敏度低、检测时间长、鉴别性不强的问题,研究分别建立MDV血清1型(MDV serotype 1,MDV 1)和MDV血清3型(MDV serotype 3,MDV 3)毒株的实时荧光定量PCR检测方法,用于禽用生物制品纯净性控制。【方法】从NCBI下载MDV 1、MDV血清2型(MDV serotype 1,MDV 2)和MDV 3各毒株UL19序列,进行核苷酸和氨基酸序列比对分析;分别针对MDV 1 CVI988毒株、MDV 3 FC126毒株的UL19设计特异性引物和相应的Taqman探针,建立实时荧光定量PCR检测方法;分别构建相应的重组质粒作为阳性标准品,建立标准曲线,并评价所建立方法基因拷贝数检测的灵敏度;分别对其他禽用病毒类生物制品、毒种、MDV 2 SB-1毒株UL19的全长质粒及生产原材料(SPF鸡胚尿囊液、胚体、尿囊膜、鸡胚成纤维细胞)进行检测,评价检测方法的特异性;分别对600、60、6、0.6、0.06、0.006、0.0006 PFU的CVI988毒株和FC126毒株进行检测,评价所建立方法检测活病毒粒子的灵敏度;分别以不同稀释度的阳性标准品质粒为模板,进行3次重复性检测,计算变异系数,分析所建立检测方法的可重复性。【结果】MDV UL19在同一血清型内核苷酸和推导的氨基酸同源性达99.99%,具有很高的保守性,在不同血清型间核苷酸同源性只有约75%,推导的氨基酸同源性只有约85%;分别建立了MDV 1和MDV 3两种实时荧光定量PCR检测方法;MDV 1检测方法标准曲线的扩增效率E=98.8%,相关系数R^(2)=0.992,标准曲线方程Y=-3.351X+38.828(Y=Ct,X=lg(拷贝数)),MDV 3检测方法标准曲线的扩增效率E=95.0%,相关系数R^(2)=0.998,标准曲线方程Y=-3.447X+36.496(Y=Ct,X=lg(拷贝数));所建立的两种检测方法特异性好,MDV 1或MDV 3毒株扩增曲线良好,其他禽用病毒类生物制品、毒种、MDV 2 SB-1毒株UL19的全长质粒及生产原材料未出现特异性扩增曲线;灵敏度高,M
- 苏佳赵炜刘丹王嘉白洪旭吴华伟薛青红陈晓春
- 关键词：马立克氏病病毒实时荧光定量PCR外源病毒
- 禽多瘤病毒VP4蛋白单克隆抗体的制备及其间接免疫荧光检测方法的初步建立
- 2024年
- 为制备禽多瘤病毒(avian polyomavirus,APV)VP4蛋白单克隆抗体,初步建立APV的间接免疫荧光检测方法,本研究通过原核表达APV VP4蛋白,纯化后免疫BALB/c小鼠制备单克隆抗体,以制备的VP4单克隆抗体为一抗,FITC-山羊抗小鼠IgG为二抗,优化反应条件。结果表明,筛选获得15株阳性细胞株,经亚型鉴定,其中2株单克隆抗体的重链为IgG2b类型,13株重链为IgG1类型,轻链均为κ型。选择3株细胞制备单克隆抗体,这3株抗VP4单克隆抗体浓度分别为2.9、2.6、3.2 mg/mL;亲和常数分别为1.06×10^(10)、2.95×10^(9)、9.60×10^(9)。其中两株效价均为1∶204800,另一株的效价为1∶51200。经Western-blot和间接免疫荧光试验(IFA)鉴定,这3株单克隆抗体均能与APV发生特异性反应;本研究建立的间接免疫荧光检测方法的最适条件为:Anti-A-VP4-151∶1000倍稀释,4℃条件下过夜孵育,二抗1∶200稀释,37℃条件下孵育1 h。以建立的方法检测细胞中的减蛋综合征病毒(EDSV)、网状内皮组织增生症病毒(REV)、禽白血病病毒(ALV)、新城疫病毒(NDV)、鸡传染性支气管炎病毒(IBV)和APV,只有APV的检测结果显示阳性,检测其他病毒的结果均为阴性。应用该单克隆抗体建立的间接免疫荧光方法在细胞上能检出至少5 TCID50 APV感染。本研究制备的单克隆抗体和建立的间接免疫荧光方法为APV感染的流行病学调查和实验室诊断奠定了基础。
- 汪溪翟天舒许冠龙王嘉孔冬妮邓永闫佳佳薛青红印春生何后军陈小云毛娅卿
- 关键词：原核表达单克隆抗体间接免疫荧光试验
- 禽多瘤病毒TaqMan探针实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用被引量：1
- 2023年
- 为建立检测禽多瘤病毒(avian polyomavirus,APV)的快速诊断方法,根据APV VP4基因的保守序列设计并合成引物和探针,建立了TaqMan探针实时荧光定量PCR检测方法,验证了其特异性、敏感性和重复性,并利用建立的方法对采集的临床样本组织进行检测。结果显示,建立的TaqMan探针实时荧光定量PCR检测方法的C_(t)值与标准品在1.0×10^(9)~1.0×10^(2)copies/μL范围内呈良好的线性关系,相关系数为0.996,斜率为-3.021,检测下限为1.0×10^(1)copies/μL,与其他禽源病毒未发生交叉反应,重复性试验的变异系数均小于2%,重复性好,并且该方法在实际临床检测中可行。上述结果表明,建立的方法可用于禽多瘤病的早期诊断和APV快速检测。
- 闫佳佳翟天舒许冠龙王嘉孔冬妮邓永汪溪薛青红程佳毛娅卿印春生
- 关键词：VP4基因
- 不同H9N2亚型禽流感灭活疫苗毒株HA序列分析及其免疫效果评价
- 禽流感(Avian Influenza，AI)是由A型流感病毒所弓J起的禽类重要传染病，广泛流行于世界各地，给养禽业带来了巨大的经济损失。目前，我国禽流感预防主要使用油乳剂灭活疫苗，其免疫效果与疫苗毒株关系密切。本试验选...
- 王嘉吴涛毛娅卿王哲李俊平
- 关键词：禽流感病毒灭活疫苗免疫功能
