沈君豪
- 作品数：5 被引量：14H指数：3
- 供职机构：中国医学科学院北京协和医学院更多>>
- 发文基金：北京市自然科学基金国家教育部博士点基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学化学工程更多>>
- 紫穗槐-4,11-二烯合酶及其代谢工程研究进展被引量：4
- 2009年
- 紫穗槐-4,11-二烯合酶催化FPP(farnesyl pyrophosphate,法尼基焦磷酸)生成青蒿素前体紫穗槐-4,11-二烯,是青蒿素生物合成途径中的关键酶。本文对紫穗槐-4,11-二烯合酶的分子生物学和代谢工程研究进行了综述。紫穗槐-4,11-二烯合酶编码基因及其相关核酸序列已经得到了克隆。紫穗槐-4,11-二烯合酶cDNA全长1641bp,编码546aa。紫穗槐-4,11-二烯合酶最适pH范围较宽,但需要二价金属离子作为辅酶才能发挥作用,其产物和底物的特异性不高。在紫穗槐-4,11-二烯合酶作用下,FPP首先进行的是1,6-合环,然后是1,10-合环,形成紫穗槐-4,11-二烯。由于紫穗槐-4,11-二烯合酶在青蒿素生物合成中具有重要的意义,自从其基因被克隆测序后,先后被导入E.coli、S.cereviseae、烟草、拟南芥和A.nidulans,获得了能产生紫穗槐-4,11-二烯的各种工程菌或细胞,研究通过不同方式提高工程菌中紫穗槐-4,11-二烯产量的方法。
- 孔建强黄勇沈君豪王伟程克棣朱平
- 关键词：青蒿素工程菌
- 血红蛋白促进酵母工程菌中紫穗槐-4,11-二烯产量的研究
- 目的提高酵母工程菌中紫穗槐-4,11-二烯的产量。方法紫穗槐-4,11-二烯是抗疟药物青蒿素的中间体,由紫穗槐-4,11-二烯合酶催化FPP环化形成。通过连续重叠PCR的方法将透明颤菌血红蛋白基因突变成用酵母偏爱密码子表...
- 孔建强沈君豪黄勇王伟程克棣朱平
- 关键词：透明颤菌血红蛋白
- 文献传递
- 血红蛋白促进酵母工程菌中紫穗槐-4,11-二烯产量的研究
- 目的提高酵母工程菌中紫穗槐-4,11-二烯的产量。方法紫穗槐-4,11-二烯是抗疟药物青蒿素的中间体,由紫穗槐-4,11-二烯合酶催化FPP环化形成。通过连续重叠PCR的方法将透明颤菌血红蛋白基因突变成用酵母偏爱密码子表...
- 孔建强沈君豪黄勇王伟程克棣朱平
- 关键词：透明颤菌血红蛋白
- 文献传递
- 甲型H1N1流感病毒非结构蛋白NS1与人CPSF30结合拮抗剂筛选模型的建立及药物筛选被引量：6
- 2010年
- 利用酵母双杂交技术研究甲型H1N1流感病毒非结构蛋白NS1和人切割与多聚腺苷酸化特异因子30kDa亚基(CPSF30)的相互作用,构建了一个酵母模型用于筛选NS1和CPSF30相互作用的拮抗剂,从而为筛选抗甲型H1N1流感病毒药物奠定基础。采用连续重叠PCR技术克隆得到H1N1流感病毒NS1基因。提取人HeLa细胞RNA,通过RT-PCR克隆得到人CPSF30基因。将NS1基因克隆到表达载体pGBKT7中获得诱饵载体pGBKNS1,将CPSF30基因克隆到载体pGADT7中获得捕获载体pGADCPSF;将pGBKNS1和pGADCPSF共转入酿酒酵母AH109,获得重组酿酒酵母AH109[pGADCPSF+pGBKNS1]。利用该模型筛选了30余种中成药,发现双黄连口服液等4种中成药能抑制NS1和CPSF30之间的相互作用。
- 孔建强沈君豪黄勇阮仁余项斌郑晓东程克棣王伟
- 关键词：H1N1流感病毒中药筛选
- 酵母工程菌制备紫穗槐-4,11-二烯的研究被引量：5
- 2009年
- 构建了两种能产生紫穗槐-4,11-二烯的酿酒酵母工程菌,其中附加体型工程菌W303-1B[pYeDP60/G/ADS]含有表达载体pYeDP60/G/ADS。整合体型工程菌W303-1B[rDNA:ADS]是将ADS基因的表达盒序列通过同源重组的方式整合到酿酒酵母W303-1B基因组中。GC-MS检测发酵产物,结果表明这两种工程菌均能产生紫穗槐-4,11-二烯,但附加体型工程菌产生的紫穗槐-4,11-二烯的产量要高于整合体型工程菌的产量。Southern杂交检测表明,ADS基因以单拷贝的形式整合到W303-1B基因组中,低于附加体型工程酵母中的ADS基因拷贝数。这些结果表明,ADS基因的拷贝数与酵母工程菌中紫穗槐-4,11-二烯的产量呈正相关。
- 孔建强沈君豪黄勇王伟程克棣朱平
