杭晓峰
- 作品数：3 被引量：2H指数：1
- 供职机构：第二军医大学长征医院更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 焦磷酸法检测171例慢性乙型肝炎患者HBV多位点耐药突变株结果分析被引量：1
- 2013年
- 目的分析慢性乙型肝炎患者HBV常见核苷(酸)类似物耐药相关10个位点的突变对早期发现耐药变异的临床意义。方法收集171例慢性乙型肝炎患者,分为治疗组和未治疗组,提取血清对HBV反转录酶(RT)基因区核苷(酸)类似物变异耐药突变10个位点进行检测,采用焦磷酸测序技术进行DNA测序,数据分析采用PSQ-96MA型焦磷酸测序仪配套的分析软件进行;同时进行HBV DNA载量、HBeAg、HBV基因型、ALT和AST检测。结果治疗组122例中53例发生变异,检出率为43.44%,未治疗组49例中3例发生变异,检出率为6.12%;拉米夫定耐药变异形式多为M204V/I单独出现或伴随L180M或/和V173L突变,阿德福韦酯耐药变异以A181T/V位碱基替换为主,恩替卡韦耐药以S202G和M250V位点的碱基替换最为常见,均伴随拉米夫定和阿德福韦酯耐药变异。未治疗组3例耐药突变分别为M204I、M204V+V173L和A181V。两组间发生变异者与未发生变异者比较,HBV DNA载量、ALT、AST、HBeAg阴性率及基因型差异均无统计学意义(P>0.05)。结论治疗或未经核苷(酸)类似物抗病毒治疗的慢性乙型肝炎患者均存在耐药变异相关突变,对抗病毒治疗不同时期进行多位点耐药突变检测,并对变异相关因素进行分析,能使核苷(酸)类似物抗病毒治疗更加规范、科学和合理。
- 覃霞杭晓峰徐文胜王东倪武朱樑
- 关键词：抗药性突变焦磷酸测序
- 急性乙型肝炎患者血清HBV基因耐药变异及相关因素分析被引量：1
- 2012年
- 目的了解急性乙型肝炎(AHB)患者感染HBV基因耐药相关变异性,并对变异相关因素HBV DNA、HBeAg、ALT、AST及TBil进行分析。方法收集AHB患者123例,提取血清HBV DNA对反转录酶(RT)基因区核苷(酸)类似物变异耐药突变10个位点进行检测,同时进行HBV DNA载量、HBeAg、ALT和AST检测。采用焦磷酸测序技术(pyrosequencing)进行DNA测序,数据分析采用PSQ-96MA型焦磷酸测序仪配套的分析软件进行。结果 123例患者中9例发生变异,检出率为7.32%,病毒以变异/未变异共存形式存在。变异位点和变异形式均以204V/I和181V为主,相关耐药主要为拉米夫定、替比夫定和阿德福韦酯。发生变异者与未发生变异者比较,HBV DNA载量、ALT、AST、TBil及HBeAg阴性率差异均无统计学意义(P>0.05)。结论急性HBV感染者体内存在HBV核苷(酸)类似物耐药相关突变,自然变异与HBVDNA载量、ALT、HBeAg、TBil及AST无显著相关性。
- 覃霞杭晓峰徐文胜王东倪武朱樑
- 关键词：肝炎病毒乙型药物耐受性
- 焦磷酸测序技术检测乙型肝炎病毒多个基因型耐药突变方法的建立及初步评价
- 2012年
- 目的建立焦磷酸测序(Pyrosequencing,PyroS)法检测HBV反转录酶基因区(rt区)与核苷(酸)类似物(NAs)耐药相关基因突变的检测方法。方法针对HBVDNArt区10个已知常见耐药突变位点的12种突变形式,分别构建野生型和突变型质粒作为标准品;设计通用PCR扩增引物和针对不同突变位点的焦磷酸测序引物,建立基于PyroS技术的HBV耐药突变检测方法。分别采用传统的双脱氧测序法和我们构建的PyroS法对接受/未接受NAs治疗的慢性乙型肝炎患者95份血清标本进行检测比较,并采用克隆测序法进行结果验证。结果 1.构建了HBVrt区常见耐药突变的野生株和变异株标准质粒,并建立了能对12种常见NAs耐药突变同时进行检测的PyroS方法;证实当标准质粒浓度≥1000拷贝/mL时,PyroS法对耐药突变位点的检出率、特异性和重复率均可达100%;2.对95份临床血清标本共检测了950个耐药相关氨基酸置换位点,PyroS法检测结果与直接测序法相符位点939个(符合率98.84%),PyroS法较直接测序法多检出8份标本中共11个变异位点,克隆测序法证实了焦磷酸测序法结果。结论成功建立了能同时定量检测10个已知NAs相关耐药基因突变的PyroS技术,可用于临床抗病毒疗效的监测、及早发现基因型耐药突变,并指导治疗方案的及时调整。
- 覃霞徐文胜杭晓峰王东倪武朱樑
- 关键词：慢性乙型肝炎基因型耐药焦磷酸测序核苷(酸)类似物
