杨润琴
- 作品数：5 被引量：2H指数：1
- 供职机构：第四军医大学西京医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 比格犬会厌黏膜来源干细胞的分离培养与生物学特性鉴定
- 2013年
- 目的:探讨建立喉部黏膜间充质干细胞的分离培养方法,并对其生物学特性进行鉴定,为进一步研究其在喉部瘢痕中形成的作用及喉部组织工程提供参考。方法:以比格犬喉部会厌背侧(舌面)黏膜为研究对象,采用消化培养的方法分离具有间充质干细胞样细胞。选取第3代细胞对其进行生物学特性鉴定,首先利用MTT法检测其增殖活性及克隆形成情况,然后通过流式细胞术检测细胞表面分子标记物CD29及CD34的表达情况,最后应用第3代细胞对其进行成脂肪细胞和成骨细胞分化培养,观察其分化能力。结果:分离培养细胞形态较为一致,绝大多数呈梭形,排列不规则。MTT增殖活性实验及克隆形成试验结果显示,所分离的细胞具有良好的增殖活性和克隆形成率;流式细胞术结果显示,该细胞表达CD29间充质干细胞细胞表面标记物,低表达造血干细胞细胞表面标记物CD34;同时,该细胞诱导分化成脂肪细胞和成骨细胞实验表明,其具有多向分化潜能。结论:从比格犬会厌背侧黏膜分离的细胞具有间充质干细胞样特性,为进一步研究喉部瘢痕形成机制及喉部组织工程提供了技术基础。
- 梁媛媛韩鹏杨润琴刘阳邓志宏
- 关键词：间充质干细胞生物学特性
- 声带组织切片方法的比较
- 2012年
- 目的:探讨犬声带冠状位切片与水平位切片各自的特点,为声带实验提供合适的切片方法。方法:家犬4只,2只取材后行冠状位石蜡切片,2只取材后行水平位石蜡切片。通过HE染色观察声带固有层的一般组织结构,Masson三色染色观察固有层中胶原的排列情况。结果:HE染色示冠状位、水平位切片均可见声带表面被覆复层鳞状上皮,固有层内有大量排列紧密的纤维组织,纤维组织中夹杂少量腺体,固有层下方为肌层。冠状位切片可观察声带某一点冠状面固有层的情况,若观察整个声带的情况需声带连续切片;水平位切片可在一张切片中观察到前联合、声带膜部及声带突部位的固有层情况,解剖标志明显,利于定位。Masson三色染色示冠状位、水平位切片均可见固有层浅层有较细的胶原纤维束,中层有较粗的纤维束与较细的纤维束交织排列,深层纤维束排列更紧密。结论:冠状位切片可观察声带某一点冠状面固有层的整体情况,水平位切片可在一张切片中观察到前联合、膜部及声带突部位的固有层情况。
- 韩鹏赵昱王延辉梁媛媛刘阳杨润琴邓志宏
- 关键词：声带MASSON三色染色
- 喉黏膜间充质干细胞肌向分化的实验研究
- 2014年
- 目的 将喉黏膜间充质干细胞（laryngeal mucosal mesenchymal stem cells,LM-MSC）向成肌细胞诱导分化,为声带部分或全部缺失的组织工程修复寻求优势种子细胞.方法 从正常会厌舌面黏膜分离培养获得LM-MSC,流式细胞仪检测细胞表面分子标志CD44、CD105、CD90、CD29、CD34和CD45;向成脂、成骨细胞分化鉴定细胞多向分化潜能,油红O、茜素红染色鉴定成脂、成骨分化情况;加入成肌诱导液向成肌细胞方向分化,于成肌诱导分化后1周和3周时行免疫荧光化学染色,诱导后1周、3周和6周行实时定量RT-PCR分析,以分别定性和定量分析成肌分化相关蛋白及基因Myod1、Myogenin、肌球蛋白重链（myosin heavy chain,MyHc）的表达.结果 本实验分离培养获得的LM-MSC可贴壁生长,呈长梭形;高表达间充质干细胞表面分子标志物：CD44（100.0％）,CD105（90.4％）,CD90（99.9％）,CD29 （93.0％）,低表达造血系干细胞表面分子标志物：CD34（0.4％）和CD45（1.3％）;LM-MSC在体外定向向成脂、成骨分化14 d和21 d后有大量串珠样脂滴和矿化结节生成;成肌细胞初始标志蛋白Myod1和特异性标志蛋白Myogenin,MyHc分别于成肌诱导分化后1周和3周出现,RT-PCR结果与免疫荧光化学染色结果一致,并且相关基因持续表达于成肌诱导分化后6周.结论 LM-MSC符合间充质干细胞的特性,并可定向分化为成肌细胞,有潜能成为声带组织工程修复的优势种子细胞.
- 杨润琴明磊国邓志宏金岩
- 关键词：喉黏膜间充质干细胞声带成肌细胞细胞分化
- 犬声带激光损伤模型的建立及意义
- 2012年
- 目的建立支撑喉镜下犬声带激光损伤模型,观察其声带损伤愈合的大体形态学及组织学变化,为研究声带损伤后的修复提供动物模型。方法选用中华田园犬5只,4只于支撑喉镜下以半导体激光损伤双侧声带膜部中后1/3,深达甲杓肌,1只犬未行任何处理作为对照组。分别在术后4d、2、4及8w于支撑喉镜下观察声带大体形态改变后,各处死1只犬取声带损伤部位组织,通过HE染色、Masson三色染色、EVG染色、爱先蓝染色及免疫组化染色观察声带固有层胶原、弹力纤维、透明质酸(HA)及纤维连接蛋白(fibronectin)含量及分布的变化。结果术后4d支撑喉镜下见犬双侧声带充血水肿,组织切片示上皮未被覆固有层,损伤处大量炎性细胞侵润,固有层、肌层结构混乱不清;2w时喉镜下见声带充血水肿较前减轻,切片示受损部位上皮完全被覆,炎性细胞较前减少,胶原增生并排列紊乱,弹力纤维含量减少,HA含量下降,纤维连接蛋白含量增加;4w时喉镜下见声带炎症反应基本消失,受损部位表面不规则,瘢痕形成,切片示受损部位固有层被致密的纤维组织所替代,胶原含量持续增加,弹力纤维含量略下降,HA含量持续下降,Fibronectin含量持续增加;8w时喉镜下仍可见声带瘢痕,损伤处局部萎缩,切片示胶原呈粗大条索状,弹力纤维含量趋于稳定,HA含量下降,Fibronectin含量略上升。结论半导体激光可造成犬声带膜部热损伤模型,损伤后声带固有层内大量纤维组织形成,胶原含量上升,弹力纤维含量降低,HA含量降低,为研究声带损伤修复提供了可靠的动物模型。
- 韩鹏梁媛媛赵昱刘阳杨润琴邓志宏
- 关键词：声带动物模型支撑喉镜
- 炎症对声带间充质干细胞生物学行为的影响被引量：2
- 2014年
- 目的研究炎症对声带间充质干细胞(vocal fold mesenchymal stem cells,VF-MSCs)生物学行为的影响,为炎症声带损伤修复提供一定的理论依据。方法正常和慢性炎症声带组织分别取自于下咽癌喉全切除的正常声带组织及水肿型声带息肉手术患者切除的标本,所取组织大小约1mm×1mm,每种组织3例,对其行HE、Masson三色染色和Elastin Van Gieson(EVG)染色,观察炎性声带组织较正常组织胶原纤维和弹性纤维改变情况;通过细胞克隆形成实验和MTT细胞生长曲线实验研究炎症对VF-MSCs增殖能力的影响;通过VF-MSCs定向向成骨和成脂细胞分化,研究炎症对VF-MSCs多向分化能力的影响。结果 Masson三色和EVG染色结果显示炎性声带组织固有层细胞外基质(extracellular matrix,ECM)胶原纤维变粗,含量增多,弹力纤维变细,含量减少;细胞克隆形成实验和MTT细胞生长曲线结果显示炎性声带间充质干细胞(inflammatory vocal fold mexenchymal stem cells,I-VF-MSCs)较正常声带间充质干细胞(normal vocal fold mesenchymal stem cells,N-VFMSCs)增殖能力增强;细胞成骨和成脂分化实验结果显示I-VF-MSCs较N-VF-MSCs多向分化能力减弱。结论炎性声带组织较正常声带组织弹性减弱,抗压力增强,炎症促进VF-MSCs增殖能力,抑制VF-MSCs多向分化能力。
- 杨润琴梁媛媛邓志宏
- 关键词：炎症EXTRACELLULARVOCALMESENCHYMAL
