李祥
- 作品数：9 被引量：11H指数：2
- 供职机构：温州医学院检验医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金浙江省自然科学基金浙江省教育厅科研计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 肿瘤靶向性RGD-IFN-α2a融合蛋白在原核细胞中的表达与纯化被引量：1
- 2013年
- RGD肽是一类含有精氨酸．甘氨酸-天冬氨酸（Arg—Gly—Asp）的短肽，作为整合素和其配体相互作用的识别位点，能与肿瘤细胞或肿瘤组织新生血管特异性高表达的某些整合素如αV β3结合，从而将治疗效应分子靶向性地导入肿瘤部位，有效减少肿瘤治疗中对正常组织细胞的损害，提高药物本身疗效。干扰素（interferon，IFN）是一类重要的细胞因子，具有抗病毒、抑制某些细胞生长、免疫调节、抑制和杀伤肿瘤细胞等多种作用，在临床上已被广泛用于恶性肿瘤与病毒疾病的治疗。
- 康帅贾群英李祥吕建新
- 关键词：RGD肽IFN-Α2AGST融合蛋白肿瘤
- 丙型肝炎病毒Core蛋白类病毒颗粒的表达及纯化
- 2012年
- 目的通过PCR将丙肝病毒(HCV)Core与蜂毒素信号肽(Mel)进行融合,构建到pIZ/V5载体上获得pIZ/V5-Core-Mel表达载体。方法将pIZ/V5-Mel-core稳定转染Sf9细胞,经Zeocin抗性筛选,获得单克隆抗性细胞株。RT-PCR检测结果表明获得稳定表达Mel-core的细胞系Sf9-Core。对稳定细胞系Sf9-Core的上清进行离心纯化并Western印迹检测。结果在上清离心纯化的样品中有HCV Core形成的类病毒颗粒(VLPs)。透射电镜显示Core蛋白能自组装成直径约30 nm的球形颗粒。结论该研究成功构建了HCV Core与蜂毒素信号肽的融合蛋白并在Sf9细胞稳定表达,在细胞培养的上清中获得了VLPs。
- 李祥邹立林吕建新高基民
- 关键词：丙型肝炎病毒
- 可诱导肿瘤靶向性IFN-α2a重组腺病毒的构建及其表达被引量：1
- 2012年
- 腺病毒载体广泛应用于恶性肿瘤的靶向性基因治疗的研究,但这些肿瘤靶向载体缺乏可控性,其疗效和安全性受到很大的影响,因此开发新型可诱导的生物肿瘤靶向载体是当今抗肿瘤靶向药物研究的当务之急。该研究构建了可诱导肿瘤靶向性IFN-α2a重组腺病毒。重组腺病毒能够有效感染人肝癌细胞株HepG2等多种肿瘤细胞株,RT-PCR和Western blot结果表明肿瘤细胞能高效表达IFN-α2a,而其非肿瘤细胞株L02几乎没有表达。诱导试验表明重组腺病毒Ad MT-Ⅱ-hTERT/IFN-α2a能被ZnSO4诱导表达。可诱导肿瘤靶向性重组腺病毒Ad MT-Ⅱ-hTERT/IFN-α2a成功构建为下一步体内外抑癌实验研究打下了基础。
- 李祥璩津生康帅何哲耘杨纪峰高基民
- 关键词：肿瘤靶向性腺病毒HTERT启动子
- 抗鼠伤寒沙门菌单链抗体-跨膜蛋白融合基因的构建、克隆及表达
- 应用PCR重叠延伸技术将抗鼠伤寒沙门菌单链抗体轻链VL,重链VH以及跨膜蛋白p6Ⅷ基因通过一疏水多肽接头(GlySer)前后将三段基因拼接,构建成VL-VH-pⅧ融合基因,并进行测序;融合基因经XhoI/KpnI双酶切后...
- 崔晓阳陈勇李祥吕建新
- 关键词：SF9细胞融合蛋白
- 文献传递
- 转录因子GATA-1与人巨细胞病毒UL111A基因5＇上游序列结合的实验研究被引量：5
- 2012年
- 目的:利用人巨细胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)潜伏及再激活感染THP-1细胞模型,研究细胞核内转录因子GATA-1与HCMV UL111A基因5'上游DNA序列的相互作用。方法:采用免疫印迹(Western blotting)技术定量分析HCMV潜伏及再激活感染时细胞核内转录因子GATA-1的表达;通过MATCH工具软件分析UL111A基因5'上游DNA序列,发现存在着11个GATA-1的结合位点,针对这11个GATA-1结合位点DNA序列设计9对引物,采用染色质免疫沉淀(chromatin immunoprecipitation,ChIP)及实时荧光定量PCR技术分析转录因子GATA-1与UL111A基因5'上游DNA序列的结合情况。结果:HCMV潜伏感染时UL111A基因未表达cmvIL-10,激活感染时表达cmvIL-10,潜伏感染时转录因子GATA-1的相对表达量高于激活感染;以GATA-1抗体特异性结合的DNA片段为模板,9对引物中共有5对扩增出目的条带;HCMV潜伏感染组和激活感染组5个位点转录因子GATA-1结合率分别为:-4.00±0.26、-4.50±0.33、-4.41±0.21、-3.61±0.20、-3.47±0.11和-1.13±0.07、-0.63±0.05、-1.10±0.07、-0.24±0.03和-0.14±0.01,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:HCMV感染时转录因子GATA-1可能通过与UL111A基因5’上游序列1119(-3760)位点、107(-4772)位点、609(-4270)位点、849(-4030)位点和2047(-2832)位点结合,调节UL111A基因的转录,参与HCMV潜伏与再激活感染的过程。
- 田可港浮苗高艳彭颖李祥郑晓群徐志伟宋建华吕建新
- 脊椎动物成纤维细胞生长因子及其受体被引量：3
- 2008年
- 成纤维细胞生长因子(FGFs)具有广泛的生物学功能,已知FGF家族至少包括23个因子(FGFs1-23);成纤维细胞生长因子受体(FGFRs)家族有3类:酪氨酸激酶受体类、富胱氨酸FGF受体和低亲和力受体肝素硫酸糖蛋白。FGFs和FGFRs一起组成了一个大而复杂的信号分子家族,具有促细胞分裂、促细胞运动和促形态形成的作用,在胚胎、组织发育和成熟中发挥着重要作用。
- 李祥吕建新彭颖陈新文
- 关键词：脊椎动物成纤维细胞生长因子成纤维细胞生长因子受体
- 杆状病毒表面展示丙型肝炎病毒结构蛋白及其对丙型肝炎病毒的检测
- 2012年
- 目的:利用杆状病毒表面展示系统对丙型肝炎病毒(HCV)进行早期检测。方法:利用杆状病毒表面展示(baculovirus surface display)技术,构建展示HCV结构蛋白的重组杆状病毒vAc-Flag-HCV C-GP64、vAc-Flag-HCV E-GP64和vAc-Flag-CE-GP64。结果:(1)Western blotting分析结果表明重组杆状病毒表达了C(HCV核心蛋白)、E(HCV包膜蛋白)和CE蛋白。(2)激光共聚焦显微镜检测结果表明,重组杆状病毒感染昆虫细胞Sf9后在昆虫细胞膜上表达了C、E和CE蛋白。(3)免疫金电子显微镜观察表明重组蛋白展示在杆状病毒囊膜上。(4)重组病毒进行浓缩纯化后,利用时间分辨荧光免疫分析(TRFIA)技术对HCV样本进行检测,vAc-Flag-CE-GP64的检测阳性率可达80.2%。结论:vAc-Flag-CE-GP64可用于对HCV进行早期检测。
- 李祥金爱慧邹立林高基民吕建新
- 关键词：时间分辨荧光免疫分析
- 棉铃虫核多角体病毒成纤维细胞生长因子受体的获得及初步分析
- 2010年
- 成纤维细胞生长因子(fibroblast growthfactor,FGF)是一类非常重要的调节因子,它主要通过激活其受体再激活信号转导途径来调节细胞的生长、发育和迁移。昆虫杆状病毒如棉铃虫单核衣壳多角体病毒(Helicoverpa armigera nucleopolyhedrovirus,HearNPV)编码FGF并具有趋化宿主细胞的功能。为了深入研究其作用的分子机制,本文根据家蚕的FGF受体Bmbtl和草地贪夜蛾的FGF受体Sfbtl基因序列设计引物,通过RT-PCR从HearNPV的敏感细胞中获得了FGF受体Habtl的部分序列并对其进行了初步研究。序列分析结果显示获得的Habtl序列与Bmbtl和Sfbtl有很高的同源性;通过siRNA抑制试验,发现Habtl在HearNPV FGF趋化和病毒感染过程中发挥着重要作用。
- 李祥金爱慧张欢吕建新
- 关键词：成纤维细胞生长因子受体趋化
- 人巨细胞病毒潜伏相关IL-10基因克隆及体外表达被引量：1
- 2010年
- 为了研究人巨细胞病毒潜伏相关白细胞介素-10(LA-cmvIL-10)及巨细胞病毒编码的白细胞介素-10(cmvIL-10)在病毒感染中的作用,构建了cmvIL-10基因和LA-cmvIL-10基因的原核及真核表达体系。从患儿尿液标本中提取病毒DNA,应用重叠延伸PCR扩增cmvIL-10基因和LA-cmvIL-10基因外显子,产物克隆至原核表达载体pMal-c2x和真核表达载体pCDNA3.1上,测序显示扩增的cmvIL-10基因和LA-cmvIL-10基因外显子包含了完整的编码区;重组的原核表达质粒pMal-c2x-cmvIL-10和pMal-c2x-LAcmvIL-10转化受体菌E.coli BL21(DE3),经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导,在受体菌内表达目的蛋白。将表达产物免疫家兔,获得特异性抗血清。真核表达载体pCDNA3.1-cmvIL-10和pCDNA3.1-LAcmvIL-10转染Hela细胞,经Western blot鉴定与设计相符。
- 郑晓群冯晶晶曾智姜招嫦季敬璋李祥吕建新
- 关键词：人巨细胞病毒白细胞介素-10克隆体外表达
