李晓剑
- 作品数：4 被引量：6H指数：1
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- 发文基金：广西壮族自治区自然科学基金广西壮族自治区科技计划项目更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 哺乳动物小腔卵泡的体外发育
- 2009年
- 杜莹莹黎宗强卢晟盛姚玲李婵赵广伟李春艳李晓剑
- 关键词：小腔卵泡体外发育哺乳动物卵母细胞体外成熟胚胎工程技术卵泡卵母细胞
- 转座酶Tn3体外定向进化和酶活力提高方法的建立
- 2020年
- 试验旨在对转座酶Tn3的酶活力提高和进化进行初步探索。采用PCR扩增、限制性酶切、DNA连接、重组质粒的转化、易错PCR的优化及构建、D值的测定、酶切鉴定方法对转座酶Tn3进行体外定向进化研究。结果表明,用SacⅠ和XbaⅠ对重组质粒进行酶切,得到了450 bp的酶切产物;在含有卡那霉素的LB培养基培养菌体24 h,测量其D值,经过3轮重复性的研究,其D值和增殖能力从开始的0上升至0.18、0.42、0.60,说明Tn3活性有了明显的提高;将筛选得到的进化型重组质粒进行质粒抽提,用内切酶XhoⅠ和XbaⅠ进行双酶切鉴定,发现进化型重组质粒酶切产物条带相对较小;之后对进化型重组质粒进行基因测序分析,发现Tn 3基因序列的多个位点发生了突变以及Tn3-Gal4靶向序列中间的CCR5-delta32基因被切除。说明成功完成了转座酶Tn 3基因的克隆;确立了易错PCR的最优反应体系;选择卡那霉素作为筛选标记对进化型Tn3进行筛选,初步验证利用含有卡那霉素的LB培养基和对菌液D值的测定来进行筛选是可行的;Tn 3基因序列突变和基因敲除,说明不论是在功能上还是在基因序列上Tn3都发生了改变,这种变化正是向着需要的方向进行的。
- 宋尚桥马围围李晓剑曾素先李鑫严瑾孙翠翠黎宗强
- 关键词：易错PCR定向进化基因序列
- SD大鼠睾丸支持细胞的分离、培养、纯化及鉴定被引量：6
- 2010年
- 为进一步简化、优化SD大鼠睾丸支持细胞的体外培养条件及鉴定方法,采用三酶两步消化法和差异贴壁法分离、培养、纯化SD大鼠支持细胞,并用HE染色、油红染色、Feulgen染色及透射电镜扫描其超微结构予以鉴定。结果表明:平均0.10g睾丸组织可获得2.5×106个支持细胞,细胞存活率90%以上,体外培养5h后开始贴壁,96h后细胞生长速率下降,其对数生长期为3～7d,整个体外生长周期约为10～15d。对获得的纯化细胞进行鉴定,发现其形态结构及超微结构与支持细胞的形态特征一致。可见,采用三酶两步消化法和差异贴壁法,可达到分离、培养、纯化SD大鼠支持细胞的目的。
- 姚玲李春艳李晓剑黎宗强谢丽萍张留光靖蓓蓓
- 关键词：睾丸支持细胞体外培养SD大鼠
- 食蟹猴支持细胞的分离、纯化以及不同血清浓度对其增殖的影响研究
- 2011年
- [目的]纯化培养食蟹猴支持细胞,并测定不同血清浓度对细胞增殖的影响。[方法]分离并纯化食蟹猴支持细胞后,分别以5%、10%、15%、20%4种不同血清浓度的培养基对食蟹猴支持细胞进行培养。利用MTT比色法判断支持细胞的增殖情况,从而确定最佳的血清培养浓度。[结果]5%血清浓度的培养基对细胞增殖能力的影响与10%血清浓度的培养基差异不显著,15%与20%的血清浓度的培养基对细胞增殖能力的影响差异不显著,5%、10%与15%、20%的血清浓度的培养基对细胞增殖能力的影响差异极显著。[结论]15%的血清浓度是支持细胞增殖的最佳比例。
- 李晓剑张留光姚玲黎宗强谢丽萍李春艳
- 关键词：食蟹猴支持细胞MTT比色法血清浓度增殖
