李小康
- 作品数：16 被引量：12H指数：2
- 供职机构：华南农业大学更多>>
- 发文基金：广东省自然科学基金长江学者和创新团队发展计划广东省科技计划工业攻关项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- H9N2亚型禽流感病毒广东分离株的全基因克隆及序列分析
- 本研究以一株2006年广东省分离的H9N2亚型禽流感病毒A/Chicken/Guangdong/HL/2006 (H9N2)(简称Ck/GD/HL/06)为研究对象,用RT-PCR法扩增病毒基因组各片段,将各扩增片段分别...
- 齐岩袁润余张贺楠谢杰单芬胡月李小康陈晓春赵丽荣廖明
- 关键词：禽流感病毒H9N2
- 文献传递
- Ⅰ型鸭肝炎病毒VP1基因克隆及其原核表达被引量：2
- 2009年
- 根据Genbank中的Ⅰ型鸭肝炎病毒全基因序列设计了扩增Ⅰ型鸭肝炎病毒VP1基因的包含有EcoRV和XhoⅠ酶切位点的引物,用该特异性引物从Ⅰ型鸭肝炎病毒cDNA模板中扩增得到目的基因VP1,以相同的限制性内切酶酶切目的基因和表达载体pET32a后构建重组表达载体,经酶切及PCR鉴定筛选出阳性克隆,测序证明目的基因正确插入了表达载体,转化宿主菌RossetaⅡ,用不同浓度的IPTG诱导VP1基因的表达,收集菌液进行SDS-PAGE电泳,Western-blotting分析蛋白免疫原性。结果表明,VP1在大肠杆菌RossetaⅡ中表达量较高,表达产物的分子量约为48 ku、并能被Ⅰ型鸭肝炎病毒阳性血清所识别。Ⅰ型鸭肝炎病毒VP1蛋白在大肠杆菌RossetaⅡ中表达产物具有免疫原性。
- 孔留五康艳梅何逸民李小康潘全会张桂红
- 关键词：VP1基因
- H5亚型禽流感病毒多肽疫苗的初步研制被引量：1
- 2008年
- 本试验利用生物软件对H5亚型禽流感病毒A/CK/GD/178/04的血凝素进行抗原特性分析,结合关于禽流感病毒血凝素抗原位点的文献报道,选定97～212位氨基酸和369～529位氨基酸两个区域作为多肽表位候选区域。利用本实验室自主研发的原核表达载体pBT载体,串联表达HA的两个区域,经SDS-PAGE和Western Blotting分析,证明重组产物得到表达,Ni2+柱纯化重组蛋白后,对2周龄SPF鸡进行免疫,经HI试验检测该重组蛋白可以刺激机体产生HI抗体。本研究为H5亚型AIV多肽疫苗的进一步研制奠定了基础。
- 柯艳坤齐岩叶贺佳张贺楠陈晓春李小康袁润余亓文宝廖明
- 关键词：禽流感病毒H5亚型HA多肽疫苗
- 一株猪繁殖与呼吸障碍综合症病毒缺失变异株的分离及鉴定
- 根据GenBank中PRRSV EU型和US型的Nsp2序列特点,设计三对RT-PCR引物,对疑似PRRSV感染猪的血液、肺脏和淋巴结进行RT-PCR扩增检测,并对RT-PCR检测为PRRSV阳性的病料进行PRRSV分离...
- 孔留五康艳梅罗玉均何逸民李小康潘全会张桂红
- 关键词：猪繁殖与呼吸障碍综合症变异株
- 文献传递
- 一种DNA片段及其在构建表达红色荧光蛋白基因的重组流感病毒中的应用
- 本发明公开了一种DNA片段及其在构建表达红色荧光蛋白基因的重组流感病毒中的应用。本发明在H9N2流感病毒毒株的NS1基因后面插入mCherry荧光基因，其中，完整NS基因以NS1基因、mCHerry荧光基因和NEP基因依...
- 亓文宝周傲白雪劳光杰廖明李华楠李小康
- 文献传递
- 一株H9N2亚型禽流感病毒全基因组分析被引量：1
- 2012年
- 为了研究H9N2亚型AIV A/Chicken/Guangdong/333/2008的全基因组序列变异情况,试验利用RT-PCR方法扩增出该病毒的8个基因序列,并应用DNAStar和MEGA4.0软件分析所得基因序列。结果表明:该病毒HA基因的第226位氨基酸由Q(Gln)变为了L(Leu),其NP基因与Viet Nam/1203/2004(H5N1)的NP基因同源率最高。说明该病毒已具备了感染哺乳动物的分子特征,并可能在遗传演化过程中突变为高致病性的禽流感病毒(AIV)。
- 胡玥谭淑娴和君李小康李芳焦培荣亓文宝廖明
- 关键词：禽流感病毒H9N2亚型基因组系统发生分析
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒变异株RT-PCR鉴别诊断方法的建立被引量：1
- 2009年
- 孔留五何逸民康艳梅罗玉均李小康潘全会李少方吴翠花张桂红
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒变异株基因组结构开放阅读框呼吸道症状
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒变异株实时荧光定量PCR鉴别诊断方法的建立
- 根据GenBank登录的PRRSV基因序列,利用PRRSV非缺失变异株与缺失变异株NSP2基因序列特点,设计合成两对特异性引物,经RT-PCR扩增后,用T4连接酶将目的片段与pMD18-T载体连接,并转化到大肠杆菌DH-...
- 孔留五康艳梅李小康何选民张桂红
- 文献传递
- H9N2亚型禽流感病毒广东分离株的全基因克隆及序列分析被引量：6
- 2010年
- 本研究以一株2006年广东省分离的H9N2亚型禽流感病毒A/Chicken/Guangdong/HL/2006(H9N2)(简称Ck/GD/HL/06)为研究对象,用RT-PCR法扩增病毒基因组各片段(包括5′端和3′端的非编码区序列),将扩增片段进行克隆、测序并与参考毒株的相应序列进行比较分析,绘制各基因片段的系统发生树。分析结果表明,Ck/GD/HL/06株的HA基因同1997年中国香港鸭源毒株Dk/HK/Y280/97(H9N2)在同一进化分支,从HA的糖基化位点、受体结合位点等综合分析,该毒株HA基因未发生明显的变异,符合我国大陆H9亚型禽流感病毒的特点。HA的226位氨基酸残基为亮氨酸(Leu),具有同哺乳动物SAα,2-6受体结合的特性。Ck/GD/HL/06的PB1、PA和NP基因,同2004年越南分离的人源高致病性H5N1亚型流感病毒A/VietNam/1203/2004(H5N1)株(简写A/VN/1203/04)的核苷酸序列一致性分别是93.8%、95%和96.8%,在先前的研究中未见有类似特性毒株的报道,而这种特性H9N2亚型AIV的出现,是否会增加在重组过程中产生新的高致病性H5N1亚型AIV的可能性,是值得我们关注的一个问题,也提醒在我国华南地区应更加重视防控H9N2亚型AIV,做好长期对H9N2亚型AIV监控及分子流行病学调查的工作。
- 齐岩袁润余张贺楠亓文宝单芬胡玥李小康焦培荣廖明
- 关键词：禽流感病毒H9N2亚型全基因
- pIRES2-EGFP-LR真核表达载体的构建及其在293T细胞中的表达
- 2009年
- 为探讨层黏蛋白受体的生理功能及其在疾病发生、发展过程中的作用,以培养的SD大鼠大脑皮质神经元的总RNA为模板,运用RT-PCR方法扩增了SD大鼠层黏蛋白受体基因。将其克隆到pMD18-T载体中,经酶切纯化后再将其亚克隆到带有加强型绿色荧光蛋白报告基因的pIRES2-EGFP真核表达载体中,对重组质粒pIRES2-EGFP-LR进行酶切和测序鉴定后,采用阳离子脂质体转染法将重组质粒转染到293T细胞,荧光显微镜和激光共聚焦显微镜观察其表达情况。结果表明,真核表达载体pIRES2-EGFP-LR构建成功并可以在293T细胞中表达。该表达载体可以作为研究层黏蛋白受体生理功能的重要工具。
- 宁章勇罗敏意亓文宝李小康程艳芬
- 关键词：真核表达载体转染
