张琨
- 作品数：38 被引量：58H指数：4
- 供职机构：陕西省微生物研究所更多>>
- 发文基金：中国科学院西部之光基金陕西省自然科学基金北京市自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生农业科学轻工技术与工程更多>>
- 金黄色葡萄球菌蛋白A(SpA)Z结构域串联体的克隆、表达和筛选被引量：2
- 2012年
- 筛选一种高效重组金黄色葡萄球菌蛋白A(SpA)用于制备抗体纯化亲和介质。首先通过基因操作获得金黄色葡萄球菌蛋白A(SpA)的Z结构域单体、二串体、三串体、四串体和五串体基因,将目的基因分别克隆至pET-22b表达载体并转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,获得不同串联个数的Z结构域基因工程菌,经诱导表达和Ni2+亲和层析纯化得到Z结构域单体和二-五串体蛋白。纯化后的目的蛋白偶联至琼脂糖凝胶作为亲和层析介质,对人免疫球蛋白G(IgG)进行分离纯化。分析比较Z结构域串联体蛋白产量及其偶联的亲和介质对抗体吸附载量的差异。结果表明,构建的Z结构域单体、二串体、三串体、四串体和五串体基因工程菌能有效表达目的蛋白,制备的凝胶亲和介质可特异性吸附人IgG。增加Z结构域串联数,重组蛋白产量和单位摩尔数多聚体蛋白吸附载量获得提高,其中,重组四串体蛋白产量大(160 mg/10 g湿菌体),对抗体的吸附载量高(34.4 mg人IgG/mL胶),更适合作为配基用于亲和层析介质的制备。
- 万一訾静张琨张志敏张月娟王琰王军
- 耐热、高产重组人Cu,Zn-SOD改构体的构建及纯化方法的研究被引量：2
- 2010年
- 目的通过对天然人Cu,Zn-SOD基因的改造,得到热稳定性、活性产量提高的重组人Cu,Zn-SOD(rhCu,Zn-SOD)改构体,并进行蛋白纯化方法的研究。方法重叠PCR技术将天然hCu,Zn-SOD的Cys6突变为A la6,Cys111突变为Ser111,构建重组质粒pET22b-rmhCu,Zn-SOD6A la,111Ser,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导后SDS-PAGE分析改构体蛋白的表达,并进行W estern blot鉴定;研究改构体蛋白的纯化方法,HPLC检测蛋白纯度,比较rhCu,Zn-SOD及其改构体的活性和热稳定性。结果成功构建了rmhCu,Zn-SOD6A la,111Ser表达载体;SDS-PAGE显示rmhCu,Zn-SOD6A la,111Ser蛋白在BL21(DE3)宿主菌中得到了有效表达,表达量占菌体蛋白总量的64.6%;Western blot结果显示表达产物可以特异性地与小鼠抗人SOD多克隆抗体结合;纯化得到纯度大于95%的rmhCu,Zn-SOD6A la,111Se改构体蛋白,从1g湿菌体中获得的活性蛋白总量高于未改构体的2倍;改构体的热稳定性较未改构体获得大幅提高。结论构建的rmhCu,Zn-SOD6A la,111Ser改构体具有较好的热稳定性和较高的活性产量,摸索出一种比较简易的蛋白纯化工艺,为Cu,Zn-SOD的广泛应用奠定基础。
- 张琨张月娟王琰张志敏马晓迅万一
- 关键词：定点突变纯化
- 秦巴山区虫生真菌的分离鉴定与多样性分析被引量：7
- 2021年
- 【目的】对陕西境内秦巴山区5个不同地区采集的昆虫进行虫生真菌分离鉴定及多样性分析,为秦巴山区农林作物害虫的生物防治提供菌种资源。【方法】2018-2019年连续2年从陕西境内秦巴山区的留坝县、柞水县、凤县、周至县和鄠邑区5个地区,选择阔叶林、针叶林及低矮灌木等不同生境进行昆虫样本采集。在无菌操作条件下,利用孟加拉红培养基分离虫生真菌,采用形态学和分子生物学方法对虫生真菌进行鉴定,并采用Simpson多样性指数、Shannon-Wiener指数和均匀度指数(Pielou)对秦巴山区虫生真菌的多样性进行分析。【结果】2018-2019年连续2年从陕西境内秦巴山区的留坝县、柞水县、凤县、周至县和鄠邑区共采集昆虫样本243只,归属于8个目。利用孟加拉红培养基从采集的243只昆虫表面和虫体中分离得到虫生真菌187株,经形态学和分子生物学鉴定归属于9目13科22属。优势目为丛梗孢目(Moniliales),共120株虫生真菌(占比64.17%),归属于2科9属,其中棒束孢属(Isaria)占比最大(占总数量的18.72%)。多样性分析结果表明,秦巴山区虫生真菌群落多样性丰富,但物种均匀度偏低,优势种属现象较为明显,有4个地区的优势菌均为棒束孢属(Isaria)。此外,5个昆虫采集地区虫生真菌群落具有一定的多样性,但单一地区物种分布的均匀程度较整体偏高。【结论】秦巴山区虫生真菌种类多、分布广,多样性较为丰富。
- 王军张琨张琨刘柳宁硕瀛陈川万一
- 关键词：虫生真菌生物农药物种多样性
- 秦岭地区羊肚菌根系土样黏细菌的分离
- 2019年
- 通过分离陕西秦岭地区羊肚菌根系土样中的黏细菌,建立黏细菌的分离方法,分析羊肚菌根系土样中黏细菌的多样性。采集自陕西商洛地区种植羊肚菌根系土样,采用不同诱导方法分离土样中的黏细菌,比较不同方法的出菌率,通过菌落形态、显微照片对黏细菌进行观察,并结合16S rRNA序列,分析得到的黏细菌种类。采用活的大肠埃希菌作为诱导底物分离出的黏细菌数量最多,本次实验从羊肚菌根系土样中共分离纯化出17株黏细菌,包括5个属,其中黏球菌属(Myxococcus)12株,珊瑚球菌属(Corallococcus)2株,孢囊杆菌属(Cystobacter)1株,原囊菌属(Archangium)1株,标桩菌属(Stigmatella)1株。结果显示羊肚菌根系土壤有黏细菌存在,其中以黏球菌属居多,为后续探讨黏细菌与羊肚菌之间是否存在互生关系提供参考。
- 王军高磊高磊万一
- 关键词：羊肚菌黏细菌分离纯化
- 秦岭丹江流域黏细菌的分离及其代谢产物研究被引量：2
- 2019年
- [目的]分离陕西秦岭丹江流域土壤中的黏细菌,收集其代谢产物,对代谢产物成分和活性进行分析.[方法]采用大肠杆菌诱导法和滤纸片诱导法分离从丹江流域采集的18份土壤样品中的黏细菌,用摇瓶发酵得到其代谢产物,采用枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、藤黄微球菌和大肠杆菌作为指示菌对代谢产物进行平板抑菌试验;对4种指示菌抑制活性明显菌株的代谢产物成分进行HPLC和薄层色谱(TLC)分析,采用细胞凋亡法测试了代谢产物组分对HepG2肝癌细胞的毒性.[结果]共分离纯化出23株黏细菌,包括黏球菌属(Myxococcus) 15株,珊瑚球菌属(Corallococcus)3株,孢囊杆菌属(Cystobacter)1株,原囊菌属(Archangium)3株,软骨霉状菌属(Chondromyces)1 株.抑菌试验表明15号菌株的2号代谢产物对4种指示菌均有不同程度的抑制作用.对HPLC得到的15号菌株2号代谢产物的5号组分进行研究,结果表明,其能明显增加HepG2细胞凋亡.[结论]秦岭丹江流域土样中的黏细菌具有一定的多样性,得到1株活性菌株,其代谢产物具有抑菌活性和抗肿瘤细胞活性.
- 王军李宏铎张琨张琨万一
- 关键词：黏细菌代谢产物生物活性丹江流域
- 光合细菌处理皂素生产废水实验研究被引量：6
- 2009年
- 目的研究光合细菌对皂素生产废水的处理效果及其影响因素。方法在单因子实验的基础上,进行四因素三水平的正交试验,根据CODcr值变化跟踪监测水质情况,考察在各种条件下PSB对废水的处理效果,并进行实验验证。结果在接种量25%,pH值为7,光照强度为2 000Lx,30℃下厌氧培养72 h,废水的去除率可达44.94%,可生化性达到0.52。结论通过光合细菌处理后的皂素废水COD降低,可生化性提高,为废水的后续处理奠定了基础。
- 宋晓东张琨黄建新
- 一种水溶性磷脂酰丝氨酸及其制备方法
- 本发明属于生物工程技术领域，具体涉及一种水溶性磷脂酰丝氨酸及其制备方法。本发明提供了一种水溶性磷脂酰丝氨酸，包括：磷脂酰丝氨酸和环糊精。本发明通过环糊精对磷脂酰丝氨酸进行包裹制得了水溶性磷脂酰丝氨酸，其在水中有较好的溶解...
- 万一张月娟高磊张琨张绪
- 内含肽介导的重组人干扰素α2a的原核表达及其生物学活性
- 2013年
- 目的原核表达内含肽介导的重组人干扰素α2a(rhIFNα2a)融合蛋白,并检测其生物学活性。方法以质粒pBV220-IFN-α2a为模板PCR扩增rhIFNα2a基因,将其插入原核表达载体pTWIN1的内含肽Ssp DnaB基因下游的多克隆位点,构建重组表达质粒pTWIN1-rhIFNα2a,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,表达产物进行SDS-PAGE及Western blot分析,并对裂菌上清的生物学活性进行测定。结果双酶切及测序结果显示,融合蛋白基因已克隆入表达载体中;rhIFNα2a蛋白的相对分子质量约44 300,表达量占全菌总蛋白的30%,在裂菌上清中的表达量占目的蛋白的25%,可与小鼠抗hIFNα单克隆抗体特异性结合;裂菌上清中rhIFNα2a蛋白的活性为5.57×107IU/ml,表明该重组蛋白具有良好的IFN抗病毒活性。结论已成功在大肠杆菌BL21(DE3)中表达了具有生物学活性的可溶性重组rhIFNα2a与内含肽Ssp DnaB融合蛋白,为大量生产IFNα2a提供了新的思路。
- 万一张琨张月娟贺丽清赵宁訾静
- 关键词：干扰素Α2A原核细胞内含肽
- 陕西地区寺庙遗址博物馆发展现状与问题分析
- 陕西地区寺庙遗址博物馆发展现状与问题分析是研究陕西地区寺庙遗址向遗址博物馆的发展历程与保护历程,根据遗址博物馆的保护与发展提出对现在寺庙遗址走向遗址博物馆的方向提出的一个具有重要理论意义和实践意义的研究课题。这一问题关系...
- 张琨
- 关键词：遗址博物馆多中心治理
- 文献传递
- 一种基于抗菌肽的双功能融合蛋白及其制备方法和用途
- 本发明公开了一种基于抗菌肽的双功能融合蛋白及其制备方法和用途，所述的基于抗菌肽的双功能融合蛋白，是基于天蚕素B蛋白序列和人表皮生长因子的融合蛋白，并将其连接蛋白特别设计为凝血酶能够识别的位点，并且在融合蛋白上构建纯化的H...
- 万一韩丽萍沈卫荣张月娟孙晓宇张琨李玥
