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高浓度的staurosporine aglycone激活大鼠肺动脉平滑肌细胞中的ERK1／2被引量：2: 2009年; 目的有报道表明staurosporine作为一种蛋白激酶C（PKC）的抑制剂，可以在多种细胞系内调节细胞外信号调节激酶（ERK1／2）的活性，但是它的衍生物staurosporineagly—COfle（SA）是否具有相同的作用还不清楚，本次实验旨在阐明其对ERK1／2活性的调节作用。方法培养至4～8代的大鼠肺动脉平滑肌细胞，经过SA处理后提取细胞蛋白，应用Westernblot方法检测磷酸化ERK1／2的含量，观察不同浓度和时间点的SA对ERK1／2活性的影响。结果在纳摩尔浓度水平的SA可以降低大鼠肺动脉平滑肌细胞中ERK1／2的磷酸化水平，但是30μmol·L-1的SA可以激活ERK1／2，这种激活作用可以被丝裂素活化蛋白激酶的激酶（MEK）的抑制剂PD98059或蛋白激酶A（PKA）的激活剂异丙肾上腺素（isoproteren01）所抑制。结论sA对肺动脉平滑肌细胞中的ERK1／2活性有双向调节作用，这种作用是通过PKC和（或）PKA通路产生的。; 张家宁褚晓杰吕昌莲吴春铃包红霞唐晓波朱大岭; 关键词：STAUROSPORINE 细胞外信号调节激酶蛋白激酶A

鼠抗人CD20单克隆抗体的制备与鉴定被引量：2: 2009年; 目的:制备CD20融合蛋白及制备CD20的单克隆抗体(mAb),并对其进行特性鉴定。方法:以人单核细胞cD-NA文库为模板,构建重组表达质粒pGEX-4T-1-CD20(即CD20-GST)和pET-32a-CD20(即CD20-His)。以融合蛋白CD20-GST为免疫源免疫BALB/c雌性小鼠制备(mAb),用间接ELISA法测定抗体的效价,Western blot、免疫荧光鉴定其特异性及免疫组化染色法对mAb相应的抗原进行组织定位。结果:CD20-GST和CD20-His蛋白在大肠杆菌中可高效表达,经纯化后可获得高纯度的CD20蛋白,经细胞融合得到1株稳定分泌CD20抗体的杂交瘤细胞株,Western blot和免疫组化显示抗CD20mAb与CD20蛋白具有良好的反应性。结论:成功制备高纯度CD20蛋白并以此为抗原制备了1株能够稳定分泌抗人CD20的鼠mAb的杂交瘤细胞株BD11F4,为进一步研究CD20对非霍奇金淋巴瘤的诊断治疗提供基础。; 包红霞吴春铃李淑珍唐晓波褚晓杰王爽张家宁朱大岭; 关键词：CD20 原核表达融合蛋白抗体制备

TRPP2和TRPV4形成异源非选择性阳离子通道复合体调节血管内皮细胞功能的研究: 张家宁

在大鼠中15-LO/15-HETE参与缺氧对K_V1.5表达的抑制作用: 2009年; 目的采用分子生物学技术从组织和细胞水平上观察阻断15-LO/15-HETE后,缺氧对KV1.5表达的影响。方法通过酶法分离、培养Wistar大鼠肺动脉血管平滑肌细胞(pulmonary artery smooth muscle cells,PASMCs)和大鼠肺动脉,应用Western blot和RT-PCR方法分别从蛋白质水平和mRNA水平上观察在15-LO阻断剂CDC和NDGA作用下,缺氧对KV1.5表达的影响。结果从组织和细胞水平上,用CDC和NDGA阻断15-LO即阻断了内源性15-HETE的产生,KV1.5的表达量在蛋白质水平和mRNA水平与未阻断组比较都增加。在阻断了内源性15-HETE的产生以后,加入外源性15-HETE,KV1.5的表达量减低。说明不仅内源性15-HETE参与诱导缺氧对KV1.5表达的影响,外源性15-HETE也同样能影响缺氧条件下KV1.5的表达量。但在阻断了内源性15-HETE的产生以后,加入外源性15-HETE,KV1.5的表达量减低。说明不仅内源性15-HETE参与诱导缺氧对KV1.5表达的影响,外源性15-HETE也同样能影响缺氧条件下KV1.5的表达量。结论上述结果表明,从大鼠肺动脉组织和细胞水平上,内源性15-HETE介导了缺氧对KV1.5表达的抑制作用。; 褚晓杰张家宁郭蕾吴春铃张爽唐晓波朱大岭; 关键词：15-HETE 缺氧肺动脉平滑肌细胞肺动脉

15-HETE激活平滑肌ERK1/2途径收缩慢性缺氧大鼠肺动脉: 目的为揭示缺氧性肺血管收缩机制探讨细胞外信号调节激酶1/2（extracellular signal regulated kinase-1/2,ERK1/2）是否参与15-羟基二十碳四烯酸（15-hydroxyeico ...; 吕昌莲张家宁李一经朱大岭; 关键词：缺氧花生四烯酸类肺动脉血管收缩; 文献传递

15-HETE与ERK1/2在大鼠缺氧性肺动脉收缩中的作用被引量：3: 2006年; 目的:为揭示缺氧性肺血管收缩机制,探讨细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)是否参与15-羟基二十碳四烯酸(15-HETE)收缩缺氧大鼠肺动脉的过程以及15-HETE对ERK1/2活性的影响。方法:将大鼠置于氧气分数为12.0%的低氧箱中连续9 d形成缺氧模型。完整取出心肺,在显微镜下分离直径0.8-1.0 mm肺动脉剪为3 mm长的动脉环在组织浴槽内进行张力研究。比较15-HETE给药前后肺动脉环张力变化;用ERK1/2上游激酶抑制剂U0126孵育肺动脉环,比较U0126孵育前后15-HETE对缺氧性肺动脉环的收缩作用;机械法去除动脉环内皮,再比较U0126孵育前后15-HETE的收缩作用。酶法分离培养大鼠肺动脉平滑肌细胞。W estern b lotting方法检测15-HETE作用时间(5-90 m in)及浓度(10-9-10-6mol/L)对ERK1/2的表达及活性的影响。结果:15-HETE对缺氧大鼠肺动脉环有收缩作用,呈浓度-效应关系,与正常对照组比较差异显著(P<0.05);内皮完整和内皮去除的肺动脉环,U0126孵育前后,15-HETE的缩血管作用都受到抑制,差异显著(均为P<0.05)。W estern b lo-ting结果显示,15-HETE明显增强肺动脉血管平滑肌细胞ERK1/2的活性,随时间延长而降低,随浓度增加而增加,但对ERK1/2的蛋白表达无影响。结论:15-HETE能上调大鼠肺动脉血管平滑肌细胞ERK1/2的活性,提示ERK1/2的活化是15-HETE收缩慢性缺氧大鼠肺动脉的一个重要环节。; 吕昌莲张家宁叶宏李一经朱大岭; 关键词：缺氧花生四烯酸类肺动脉血管收缩有丝分裂素激活蛋白激酶类

属于生化与生物技术药物15-HETE激活平滑肌ERK1/2途径收缩慢性缺氧大鼠肺动脉: 目的为揭示缺氧性肺血管收缩机制探讨细胞外信号调节激酶1/2 (extracellular signal regulated kinase-1/2,ERK1/2)是否参与15-羟基二十碳四烯酸(15-hydroxyeic...; 吕昌莲张家宁李一经朱大岭; 关键词：缺氧花生四烯酸类肺动脉血管收缩; 文献传递

Staurosporine aglycone双向调节大鼠肺动脉平滑肌细胞中ERK1/2的活性: 目的：有报道表明staurosporine作为一种蛋白激酶C(PKC)的抑制剂，可以在多种细胞系内调节细胞外信号调节激酶(ERK1/2)的活性，但是它的衍生物staurosporine aglycone是否具有相同的作用...; 张家宁; 关键词：肺动脉平滑肌细胞细胞外信号调节激酶蛋白激酶C

15-羟基二十碳四烯酸收缩慢性缺氧动脉环信号转导通路的部位:内皮细胞还是平滑肌被引量：1: 2007年; 目的:观察15-羟基二十碳四烯酸(15-HETE)致慢性缺氧性大鼠肺动脉收缩的信号转导途径,阐明15-羟基二十碳四烯酸引起慢性缺氧性肺动脉收缩作用的可能机制。方法:实验于2006-03/2006-09在哈尔滨医科大学药学院进行。①实验材料:健康成年雄性Wistar大鼠,体质量220～240g,清洁级,由哈尔滨医科大学附属第二医院实验动物中心提供。②实验方法:取18只成年雄性Wistar大鼠连续缺氧9d(O2体积分数为0.12)制作大鼠缺氧模型,通过氧气监测控制器控制箱内氧气体积分数为0.12,9d后即成为缺氧大鼠模型。16只正常大鼠吸入正常空气(O2体积分数为0.21)作为对照。将大鼠麻醉后分离直径1.5mm肺内动脉,剪成2mm长动脉环置于组织浴槽中,记录血管张力变化。③实验评估:观察15-羟基二十碳四烯酸对缺氧模型组、正常组大鼠血管收缩作用,在此基础上,除去血管内皮细胞和使用丝裂素活化蛋白激酶的激酶抑制剂PD98059,明确血管内皮细胞和丝裂素活化蛋白激酶的激酶系统在15-羟基二十碳四烯酸收缩肺动脉中的作用。结果:34只大鼠均进入结果分析。①15-羟基二十碳四烯酸对正常组、缺氧模型组大鼠血管环均有收缩作用,呈浓度-效应正相关,但缺氧组收缩明显,与正常组比较,差异显著(P<0.01)。②丝裂素活化蛋白激酶的激酶抑制剂PD98059可明显阻断15-羟基二十碳四烯酸对缺氧大鼠肺动脉的收缩作用(P<0.05)。③去掉内皮的缺氧大鼠肺动脉,PD98059仍明显阻断15-羟基二十碳四烯酸的收缩作用(P<0.05)。结论:15-羟基二十碳四烯酸通过激活肺动脉平滑肌丝裂素活化蛋白激酶的激酶信号转导途径收缩慢性缺氧性大鼠肺动脉,作用部位主要位于血管平滑肌。; 吕昌莲张家宁朱大岭李一经; 关键词：缺氧性肺血管收缩

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张家宁

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