张培因 作品数:75 被引量:164 H指数:6 供职机构: 吉林大学白求恩医学院 更多>> 发文基金: 国家高技术研究发展计划 国家自然科学基金 吉林省科技厅科研基金 更多>> 相关领域: 医药卫生 生物学 农业科学 化学工程 更多>>
建立一种用重组蛋白检测抗口蹄疫病毒抗体的间接ELISA方法 被引量:5 2007年 目的研究以重组蛋白作为包被抗原检测口蹄疫病毒(FMDV)感染后的动物血清中特异性抗体的可能性,为建立一种非病毒颗粒的ELISA检测试剂盒提供实验依据。方法利用自行构建表达的O型口蹄疫病毒VP1表位肽重组蛋白(VP1epi)作为包被抗原,采用间接ELISA方法确定抗原的最佳工作浓度和包被方法,优化各项实验条件,并以FMDV感染后的豚鼠血清作为标准阳性血清确定ELISA方法的特异性和灵敏度。结果FMDV感染后的阳性豚鼠血清可以很好地识别VP1epi重组蛋白,用此蛋白包被检测抗FMDV抗体的灵敏度可达1∶3200,并证明所检测的抗体是FMDV特异性的。结论VP1epi重组蛋白可以替代FMDV颗粒用于建立检测抗FMDV抗体的ELISA试剂盒。 胡大利 冯宇 张培因 冉波 卫红飞 邵明玉 王爱丽 王丽颖 于永利关键词:口蹄疫病毒 间接ELISA 重组卡介苗热休克蛋白70的纯化及内毒素去除的效果评价 被引量:6 2010年 目的:表达、纯化重组卡介苗热休克蛋白70(BCGHSP70)并去除其中的内毒素。方法:采用10L发酵罐经IPTG诱导表达含有重组表达质粒pET28a/HSP70的BL21(DE3)工程菌(pET28a/HSP70/BL21),SDS-PAGE检测BCGHSP70的表达。超声破碎菌体,裂菌后上清依次经过NiSepharose4B亲和层析、TritonX-114洗涤、SuperdexG-25凝胶过滤层析、Q-SepharoseFF离子交换层析进行纯化。SDS-PAGE鉴定纯化蛋白,Lowry法检测蛋白浓度,37℃水浴孵育0~4h检测纯化蛋白的稳定性,鲎试剂法检测内毒素含量。结果:工程菌pET28a/HSP70/BL21在发酵表达3h后获得96g湿菌,其中相对分子质量约为70000的蛋白约占菌体总蛋白量的29.6%;表达产物纯化后在相对分子质量约70000处可见特异性条带,该分子质量蛋白约占总蛋白量的96.5%;纯化后蛋白浓度约1.2g.L-1;37℃水浴中放置4h后相对分子质量为70000的蛋白约占总蛋白量的95.1%;纯化产物内毒素含量<0.01EU.μg-1。结论:成功表达、纯化了重组BCGHSP70,并有效地去除了其中的内毒素。 李贺 张培因 卫红飞 曹昭 王影 王华 胡小平 万敏 王丽颖 于永利关键词:热休克蛋白70 纯化 TRITON 内毒素类 Hsp65与HBV多表位融合基因的表达及其免疫应答研究 被引量:4 2008年 目的用基因工程的方法构建并表达一种由Hsp65、通用辅助T细胞表位(PADRE)和HBV表面抗原与核心抗原的多个表位组成的乙型肝炎治疗性疫苗(简称为Hsp65-HBV)。方法采用PCR方法人工合成由PADRE和HBV的多个表位组成的基因片段,将此片段克隆入原核表达质粒pET28a/Hsp65后,利用大肠杆菌进行融合蛋白的表达。用纯化后的蛋白免疫Balb/c小鼠。将小鼠脾细胞用HBsAg装载的P815细胞在体外刺激5d后,用流式细胞仪检测IFN-γ+细胞的频率。用ELISA方法检测小鼠血清中的特异性抗体(IgG1和IgG2a)的产生。结果由Hsp65、通用辅助T细胞表位(PADRE)和HBV的多个表位组成的融合蛋白能在大肠杆菌中进行高水平的表达,能诱导小鼠产生IgG2a亚型的特异性抗体,并能诱导HBV特异性的IFN-γ+的淋巴细胞的产生。结论获得了大肠杆菌表达的由Hsp65、通用辅助T细胞表位(PADRE)和HBV的多个表位组成的融合蛋白,并能被机体以MHC-Ⅰ途径递呈,为检测本融合蛋白是否能激发出HBV特异性CTL反应奠定了基础。 王华 尹晓光 张培因 卫红飞 于永利 王丽颖关键词:热休克蛋白65 乙型肝炎病毒 多表位 遗传性牙龈纤维瘤病致病基因的排除性定位 2004年 目的 :对我国现有的 2例家族遗传性牙龈纤维瘤病进行国外已证实的已知基因突变位点 - -SOS1基因2 1号外显子的排除性定位。方法 :采用PCR -SSCP -银染的方法对 2例遗传性牙龈纤维瘤病家系的致病基因进行排除性定位。结果 :两家系中均未发现SOS1基因的缺失。 5 %的聚丙烯酰胺凝胶电泳结果表明两家系中无典型临床表现者电泳条带无明显的异常 ,而有典型临床表现者发现家系 1有 4例患者的电泳条带有明显位移 ,条带离加样孔较正常对照近 ,家系 2有 2例患者的电泳条带有明显位移 ,但条带离加样孔较正常对照远。结论 :两家系无典型临床表现者无SOS1基因的突变 ,有典型临床表现者存在有SOS1基因 2 1号外显子的突变 ,但是 ,是否所有有典型临床症状的患者其基因突变的位置及涉及的碱基片段都相同还需进一步研究。 孟秀萍 于海霞 张培因 王万成 申玉芹 张鹏关键词:遗传性牙龈纤维瘤病 聚合酶链反应-单链构象多态性分析 基因突变 降钙素(CT)增强化学发光酶免疫分析法的建立及其在骨质疏松症中的应用 被引量:2 2012年 目的建立应用增强剂的化学发光酶免疫分析法,并进行方法学检定。方法用辣根过氧化物酶(HRP)标记降钙素(CT)制备抗体,筛选增强剂剂量建立分析方法,并与放射免疫分析(RIA)对比对大鼠骨质疏松症血清检测。结果该分析方法结果符合方法学各项指标,血清检测结果与RIA相近。结论该方法灵敏度高,稳定性好,检测范围宽。 车彦海 赵令军 马宁 张培因维生素D过量兔髁突软骨细胞动力学研究 1996年 维生素D过量兔髁突软骨细胞动力学研究黄洋蔡家骏孙宏晨石育原张培因本实验通过体外培养兔髁突软骨细胞并以氚标记的胸腺嘧啶核苷(3H-TdR)掺入,观察不同剂量的1α,25二羟基维生素D3[1,25(OH)2D3]对软骨细胞生长及DNA合成的影响。探讨维生... 黄洋 蔡家骏 孙宏晨 石育原 张培因关键词:维生素D 药物副作用 髁突 心钠素前体RNA探针的制备 1989年 本文报告了使用p^(NI)-11质粒,在HindⅢ消化使之线性化后,用SP_6 RNA聚合酶,体外合成^(32)P标记的与心钠素前体mRNA(proANF-mRNA)互补的RNA探针(c-proANF-mRNA)的实验方法。 洪敏 李小林 麦荫乔 金岩 张培因关键词:RNA探针 心钠素 分子杂交 两种尿素浓度测定方法的比较 被引量:4 2010年 曹昭 万敏 孙陆果 胡小平 于永利 王丽颖 张培因关键词:血清尿素 肾小球滤过功能 流动注射分析法 一种双抗体夹心ELISA检测热休克融合蛋白方法的建立 2005年 包木胜 高新 王莉 李大鹏 张培因 于永利 王丽颖关键词:ELISA检测 双抗体夹心 特异性免疫应答 MUC1 VNTR 表位肽 乳腺癌Ⅳ期患者血清黏蛋白1抗体的中和作用 2014年 目的探讨乳腺癌Ⅳ期患者血清黏蛋白1(mucin 1,MUC1)抗体与MUC1抗原的结合反应,阐明MUC1抗体在乳腺癌Ⅳ期的中和作用。方法分别采用斑点杂交及抑制试验、血清中和试验检测MUC1蛋白与乳腺癌Ⅳ期患者血清的特异性结合反应。结果乳腺癌Ⅳ期患者血清MUC1抗体与MUC1蛋白的反应可被MUC1数目可变串联重复序列(variable number of tandem repeats,VNTR)核心肽鼠抗人单克隆抗体阻断,而不能被乙型肝炎表面抗原鼠抗人单克隆抗体阻断;经MUC1蛋白中和后,乳腺癌Ⅳ期患者血清中MUC1抗体水平降低。结论乳腺癌Ⅳ期患者血清MUC1抗体可中和MUC1抗原,可能具有抗肿瘤作用。 唐艳 李亚荣 马桢赫 张培因 石光 曲荣锋 郑百红 于永利 王丽颖关键词:乳腺癌 抗体