孙晋华
- 作品数：6 被引量：21H指数：3
- 供职机构：暨南大学生命科学技术学院生物工程研究所更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 重组人骨形成蛋白-2在大肠杆菌中的表达、纯化和复性(英文)被引量：9
- 2005年
- 目的:通过对大肠杆菌表达重组人骨形成蛋白-2的复性研究,得到高活性的重组人骨形成蛋白-2。方法:在大肠杆菌中通过温度诱导表达重组人骨形成蛋白-2经过Triton X-100清洗之后,又通过DEAE离子交换层析纯化包涵体,包涵体在8 mol/L尿素变性溶解,在氧化-还原(还原型和氧化型谷胱甘肽)复性系统中,通过简单的稀释复性,通过肝素亲和层析一步纯化法纯化重组人骨形成蛋白-2 ,最后通过诱导C2C12细胞产生碱性磷酸酶检测重组人骨形成蛋白-2活性。结果:温度诱导表达重组人骨形成蛋白-2是以包涵体单体的形式存在,经过几步纯化后,得到高纯度的包涵体。重组人骨形成蛋白-2在不同氧化-还原剂比例,和不同小分子化学辅助剂浓度中复性,得到复性的效率也不同。亲和层析纯化后,本实验得到重组人骨形成蛋白-2的生物学活性比商业化的重组人骨形成蛋白-2更高。结论:重组人骨形成蛋白-2属于转化因子-β家族,此复性方法可能应用于此家族的其他成员同时得到成本低、产量高的重组人骨形成蛋白-2 ,可能为临床应用创造了良好的条件。
- 孙奋勇汪炬孙晋华戴云邱垂源洪岸
- 关键词：骨形态发生蛋白质类大肠杆菌
- 由BMP-4基因转入C2C12细胞引起的成肌细胞到成骨细胞的表型转变(英文)被引量：3
- 2004年
- 目的 :研究BMP - 4基因对C2C12细胞分化的影响。方法 :BMP - 4基因在pCI-neo质粒中构建后转入C2C12细胞。转入pCI-neo -BMP - 4重组质粒的细胞、转入pCI-neo质粒的细胞及没有转染的细胞在相同的条件下培养。结果 :转入pCI-neo质粒的细胞及没有转染的细胞在增殖期和分化期均不表达BMP - 4 ,在未分化期表现为典型的星形形态 ,并相互融合成细长而多核的肌小管。而转入pCI -neo -BMP - 4重组质粒的细胞在增殖期和分化期均大量表达BMP - 4 ,形态上不形成肌小管 ,而是形成类似成骨细胞的形态 ,并高水平表达碱性磷酸酶、在培养基中分泌骨钙素。结论 :表明将BMP - 4基因转入C2C12细胞可改变其肌源的分化途径 ,而分化为成骨细胞系 ,且这种分化转向是基因水平上的。
- 汪炬孙奋勇戴云余榕捷孙晋华李明
- 关键词：骨形态发生蛋白质类C2C12细胞
- 重组人骨形成蛋白-2在大肠杆菌中的高效表达及体外复性
- 骨形成蛋白—2(Bone Morphogenetic Protein-2,BMP-2)是骨形成蛋白家族成员之一,具有多种生物学功能,在体内不仅可以诱导骨的形成,而且还是胚胎发育阶段必需的细胞调节因子,因此在临床应用具有广...
- 孙晋华
- 关键词：人骨形成蛋白-2大肠杆菌体外复性
- 文献传递
- 骨形态发生蛋白-2在大肠杆菌中的表达与纯化
- 2005年
- 骨形态发生蛋白-2(bone morphogenetic protein,BMP-2)具有多种生物活性,有潜在的药用价值.为探索利用基因工程技术重组BMP-2并在大肠杆菌表达系统表达的可行性.在大肠杆菌中重组和筛选BMP-2基因,SDS-PAGE电泳分析,显示外源蛋白带在相对分子量约12kD处,以离子交换层析DEAE和分子筛纯化蛋白,缓慢复性并在C2C12细胞内检测到其蛋白活性.
- 黄更生孙奋勇孙晋华卜丹
- 关键词：骨形态发生蛋白-2大肠杆菌纯化
- 重组人碱性成纤维细胞生长因子结构类似物在大肠杆菌中的高效稳定表达研究(英文)被引量：1
- 2006年
- 目的:用基因工程的方法获得高效稳定表达的重组人碱性成纤维细胞生长因子结构类似物。方法:利用定点突变技术,将天然hbFGF的第78与96位半胱氨酸替换为丝氨酸,通过载体pET-3c ,突变基因被克隆并转化至大肠杆菌BL21( DE3) plysS,IPTG诱导表达后,SDS-PAGE分析蛋白表达结果。结果:纯化后突变蛋白的可溶性成分大幅度增加,而二聚体与多聚体显著减少至纯化后总蛋白的8 %以下。MTT法的结果表明,结构类似物蛋白具有良好的生物学活性。这种新的结构类似物蛋白能较好地替代天然hbFGF在临床上的使用。结论:在不影响生物学活性的条件下,对个别氨基酸残基进行突变以获得新的结构类似物的方法,能够有效提高外源蛋白在大肠杆菌中表达的稳定性及可溶性。
- 陈琼玉孙奋勇陈小佳谢秋玲孙晋华洪岸
- 关键词：成纤维细胞生长因子2大肠杆菌
- 大肠杆菌可溶性表达人碱性成纤维细胞生长因子的研究被引量：8
- 2003年
- 包涵体的形成与外源基因在大肠杆菌中的表达量高度相关 ,在适当的范围内 ,降低hbFGF在表达宿主BL2 1 (DE3)plysS中的表达 ,成为实现高可溶性表达的关键。在不改变氨基酸序列的条件下 ,对hbFGF高表达菌株突变重组子起始密码ATG下游前 3个密码子的摇摆碱基进行随机回复突变 ,共有 7种组合 ,合成引物PCR扩增后 ,克隆至表达载体pET 3c ,将重组子转导BL2 1 (DE3)plysS后 ,IPTG诱导表达 ,发现其中 1株有较高可溶性和活性的菌株。可见部分降低外源蛋白的表达量可以避免与减少包涵体的形成。
- 孙晋华洪岸张玲孙奋勇宋照雷
- 关键词：大肠杆菌可溶性表达人碱性成纤维细胞生长因子回复突变外源基因
