史楠
- 作品数：4 被引量：13H指数：1
- 供职机构：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金哈尔滨市科技攻关计划项目国家科技部农业科技成果转化资金更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 马属动物cyclinT1基因的扩增与真核表达载体的构建
- 2009年
- 在慢病毒复制过程中cyclinT1(CycT1)是重要的辅助因子。为了揭示慢病毒的复制机理,试验使用RT-PCR方法扩增马和驴的cyclinT1基因,并进行克隆和序列分析,然后用DNASTAR(MegAlign)软件将测得的序列和国外发表的马属动物CycT1序列(GenBank中登录号为AF137509和AF190905)进行同源性比较。结果表明:马属动物CycT1大小为2184bp,编码727个氨基酸;4种CycT1基因氨基酸同源性在98%以上;将扩增出的马CycT1基因克隆至真核表达载体pcDNA3.1(+)中,经酶切及测序鉴定证实成功构建了pcDNA3.1(+)/eCycT1重组质粒。
- 史楠赵立平吕晓玲马建周建华
- 关键词：克隆真核表达载体
- 2011年～2012年G9型猪轮状病毒流行病学调查及VP7基因遗传进化分析被引量：12
- 2013年
- 为分析G9型猪轮状病毒(RV)的遗传变异情况,本研究根据GenBank中VP7序列设计合成一对扩增VP7基因的引物,采用PCR方法对2011年～2012年分离的部分RV VP7基因进行扩增、克隆和序列测定,并进行比对和遗传进化分析。结果表明:531份病料中RV阳性份数为39,阳性率为7.34%;而在检测的121个猪场中,共有23个猪场显示阳性,猪场阳性率为19%。VP7基因全长1 062 bp,含有一个982 bp的开放阅读框,编码326个氨基酸。与参考病毒株VP7全长基因核苷酸比较,同源性为91.5%～99.3%。在31 nt、56 nt、75 nt、82 nt、191 nt、215 nt等位置均存在点突变,无插入和缺失。核苷酸系统发育进化树表明:黑龙江省哈尔滨市、桦南、绥化,辽宁省大连市、内蒙古自治区采集病料样品的基因间差异较小,与采集自中国广西、浙江、贵州、北京的病料样品基因相比差异性较大,这表明VP7基因存在地域差异。
- 王璐时洪艳陈建飞张鑫史楠石达刘随新张莎冯力
- 关键词：轮状病毒VP7基因
- 应用ViewRNA技术特异性检测感染细胞中的不同马传染性贫血病毒株被引量：1
- 2011年
- 为了对体外培养细胞感染的不同马传染性贫血病毒(EIAV)株进行特异的鉴别检测,本研究基于一种新的RNA原位杂交-ViewRNA技术,通过设计合成针对EIAVFDDV13和EIAVUK3病毒株基因组RNA的特异性探针,并结合信号放大技术和荧光标记技术,同时通过激光共聚焦显微镜进行观察,建立了可对两种不同株的EIAV基因组RNA进行细胞内原位检测的方法。研究结果表明,两组探针能够特异地与感染细胞中EIAVFDDV13和EIAVUK3的病毒RNA相结合,可在两种不同EIAV株共感染的宿主细胞中实现对两种毒株的有效鉴别和定位检测。该方法为进一步研究EIAV与宿主细胞间相互作用提供了有效手段。
- 王珊珊马建史楠刘强韦华冕周建华
- 关键词：马传染性贫血病毒原位杂交
- 马传染性贫血病毒疫苗株EIAV_(FDDV)穿膜蛋白GP45的截短突变
- 2010年
- 为研究中国马传染性贫血病毒(EIAV)弱毒疫苗致弱过程中基因组的进化特征,作者对EIAVFDDV前病毒的囊膜基因env进行了分析。使用PCR方法体外扩增EIAVFDDV前病毒DNA的env,并随机挑取PCR的阳性克隆子进行测序和序列比对分析。结果表明,随机挑取的PCR阳性克隆中,29/30的克隆子在第2 128-2 130位核苷酸处存在TGG→TGA(翻译中止密码)的突变。该基因对应的EIAV穿膜蛋白gp45的氨基酸数在突变株中较未截短株中减少154,变成259个aa。对EIAVFDDV进行Western blot分析时发现,EIAVDLV45 ku的gp45条带被约35 ku的条带取代。由此推测,EIAVFDDV疫苗株绝大多数病毒颗粒的gp45是截短型。对该代次疫苗株免疫马匹第15和40天体内EIAV前病毒DNA和基因组RNA的序列进行分析,结果表明该截短毒株具有在体内和体外进行复制的能力。由于已有研究表明细胞嗜性改变与gp45的截短有关,因此,推断EIAVFDDV的gp45的截短是其适应在体外培养的驴胎皮肤细胞上复制传代的结果。综上所述,本研究发现EIAVFDDV的gp45存在高比例截短突变,证明该截短突变毒株具有在体内和体外进行复制的能力。但该截短突变是否可通过改变EIAVFDDV在免疫马体内的细胞嗜性,进而影响其毒力和免疫原性,还有待进一步验证。
- 马建史楠吕晓玲赵立平姜成刚林跃智孔宪刚沈荣显周建华
