刘娟娟
- 作品数：28 被引量：92H指数：7
- 供职机构：山西医科大学基础医学院更多>>
- 发文基金：山西省自然科学基金国家自然科学基金山西高校科技研究开发项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学文化科学更多>>
- 可溶性弓形虫速殖子抗原联合蜂胶和IFN-γ鼻内免疫小鼠诱导的细胞免疫应答被引量：17
- 2006年
- 目的 比较蜂胶、IFN-γ佐剂以及两种佐剂混合鼻内免疫辅助STAg增强机体细胞免疫应答的水平，探讨两种佐剂联合应用的免疫效果。方法 将5～6周龄雌性BALB／c小鼠60只随机分为4组：20μg STAg组，20μg STAg＋40μg蜂胶组，20μgSTAg＋1000U IFN-γ组和20μg STAg＋40μg蜂胶＋1000U IFN-γ组。将抗原和佐剂溶于20μl PBS中，双侧鼻孔（10μl／鼻孔）滴鼻免疫。免疫2次，间隔14d，末次免疫后第10d用RH株弓形虫速殖子4×10^4个／只灌胃攻击。逐日观察小鼠存活情况。攻击后第43d处死全部存活小鼠，免疫细胞化学（ICC）法检测小鼠PP结、IEL和脾T淋巴细胞亚群水平。结果 与STAg组相比，各佐剂组小鼠T淋巴细胞亚群比例有升高的趋势，其中IFN-γ、蜂胶＋IFN-γ佐剂组小鼠PP结CD4^＋、CD8^＋T淋巴细胞，IEL、脾CD8^＋T淋巴细胞数显著高于STAg组，CD4^＋／CD8^＋T淋巴细胞比值倒置。结论 在抗弓形虫感染中，IFN-γ的佐剂作用优于蜂胶，有效激发机体细胞免疫应答，可用作鼻内免疫抗弓形虫感染的粘膜佐剂。IFN-γ＋蜂胶佐剂鼻内免疫效果优于单独蜂胶、IFN-γ佐剂，应用联合佐剂是抗弓形虫感染免疫的一个新思路。
- 殷国荣刘成芳刘娟娟管志玉石蓉张宇斌银晶晶
- 关键词：可溶性速殖子抗原IFN-Γ蜂胶鼻内免疫细胞免疫粘膜免疫
- 弓形虫排泄-分泌抗原鼻内免疫小鼠诱导体液免疫应答的动态观察被引量：8
- 2007年
- 观察从Vero细胞与弓形虫速殖子共培养液分离的排泄-分泌抗原（Excreted-secreted antigens，ESA）鼻内免疫小鼠诱导的体液免疫应答及动态变化，为弓形虫复合黏膜疫苗候选抗原提供实验依据。BALB／c小鼠84只随机分为实验组和对照组，实验组以ESA为抗原（20μg／只），对照组用未接种弓形虫的细胞培养上清液20μL（μg／只），滴鼻免疫2次（间隔2周）。分别于2次免疫后第1、2、3、4、5、6、7周颈椎脱位处死小鼠。ELISA法测定血清IgG、IgA，粪便sIgA及肠液sIgA。结果表明，免疫组小鼠血清IgG、IgA和粪便sIgA及肠液sIgA均增高。血清IgG、IgA水平分别第5周、第4周达高峰，免疫后第1～7周（P〈0．05）显著高于对照组。粪便sIgA第4周即达高峰，之后逐渐降低，至第7周仍（P〈0．05）显著高于对照组。肠液sIgA第4周达高峰，第2、3、4周（P〈0．05）高于对照组。可见，弓形虫ESA鼻内免疫BALB／c小鼠可有效诱导体液免疫应答，特异性抗体生成明显且可持续较长时间。
- 殷国荣周永安刘娟娟孟晓丽刘红丽
- 关键词：弓形虫排泄-分泌抗原鼻内免疫黏膜免疫
- 弓形虫二氢叶酸还原酶一胸背酸合成酶ROP17真核表达载体的构建及ROP17参与自噬的研究被引量：1
- 2019年
- 目的构建刚地弓形虫二氢叶酸还原酶一胸苷酸合成酶(dihydrofolate reductase-thymidylate synthase,DHFR-TS)-棒状体蛋白17真核表达载体pIRES/TgDHFR-TS-TgROP17,将其转染人胚肾细胞(HEK 293T)后观察ROP17对细胞自噬的作用。方法以弓形虫速殖子总RNA为模板.逆转录PCR(RT-PCR)扩增DHFR-TS基因片段,克隆至真核表达载体pIRES的多克隆位点B,构建重组质粒pIRES/TgDHFR-TS.经菌液PCR、双酶切和测序鉴定正确后.用脂质体法转染人胚肾细胞(HEK 293T),RT-PCR法和Western blot检测DHFR-TS的表达。以弓形虫速殖子ecDNA为模板,PCR获得ROP17.将其引人重组质粒pIRES/TgDHFR TS的多克隆位点A.构建重组载体pIRES/TgDHFR-TS-TgROP17。重组载体经菌液PCR、双酶切和测序鉴定后转染人胚肾细胞(HEK 293T),对转染细胞血清饥饿诱导,通过.Western blot检测自噬标志蛋白LC3-II、Beclin-1和P62的表达。结果RT-PCR检测显示,从RH株弓形虫速殖子中扩增出约1809 bp的片段。菌落PCR、双酶切及测序显示工具载体pIRES/TgDHFR-TS构建成功;转染293T细胞后RT-PCR和Western blot转染pIRES/TgDHFR TS的细胞中有TgDHFR TS的表达,基因大小为1809 bp.蛋白相对分子质量约为68X103。菌液PCR、双酶切和测序显示重组载体pIRES/TgDHFR-TS-TgROP17构建成功,转染293T细胞后RT-PCR和Western blot检测转染pIRES/TgDHFR TS TgROP17的细胞中有TgROP17的表达.基因大小及蛋白分子质量与预期相符,而转染pIRES/TgDHFR-TS质粒组未见相应基因及蛋白表达。经血清饥饿诱导后,Western blot.检测显示随着去血清时间的延长,LC3-I向LC3-II的转化、Beelin-1蛋白逐渐增加、P62蛋白逐渐减少。结论成功构建了工具载体pIRES/TgDHFR-TS和重组载体pIRES/TgDHFR-TS-TgROP17,且能在真核细胞中表达,表达的弓形虫棒状体蛋白17(ROP17)能促进血清饥饿诱导的细胞自噬。
- 刘宏延刘跃华孙佳王文桃陈朝阳王海龙刘娟娟孟晓丽刘红丽
- 关键词：刚地弓形虫真核表达细胞自噬
- 临床病例在医学寄生虫学教学中的应用
- 2020年
- 为提高医学寄生虫学教学效果,将临床病例应用于课堂教学及学生自主学习中。首先采用临床病例引入式教学,在对病例资料精心编写和设计的基础上,教学过程中适当应用临床病例分析、总结所学知识;同时建立和完善网络病例数据库,适应培养自主学习、终身学习人才的需求,以期提高学生发现问题、分析与解决问题及临床应用能力。
- 孟晓丽王海龙刘红丽刘娟娟李珀
- 关键词：医学寄生虫学临床病例教学改革
- 弓形虫排泄-分泌抗原鼻内免疫小鼠诱导的脾与肠相关淋巴组织细胞免疫效应及动态变化被引量：8
- 2007年
- 目的观察弓形虫与Vero细胞共培养提取的排泄-分泌抗原(ESA)鼻内免疫BALB/c小鼠诱导的脾及肠相关淋巴组织(GALT)细胞免疫效应及动态变化。方法84只BALB/c小鼠随机分为实验组和对照组,实验组以ESA(20μg/只)为抗原,对照组用未接种弓形虫的细胞培养上清液(20μl/只),鼻内免疫2次,间隔2周。末次滴鼻后第1、2、3、4、5、6、7周处死小鼠,分离脾、派伊尔结(PP)及小肠上皮内淋巴细胞(IEL)并计数。结果实验组小鼠脾淋巴细胞第3周达高峰,第1、2、3周明显高于对照组;PP淋巴细胞明显增生,第3周达高峰,第1、2、3、4、5周显著高于对照组;IEL第2周增生达高峰,第1～3周显著高于对照组。结论弓形虫ESA鼻内免疫BALB/c小鼠可有效诱导不同黏膜部位及系统特异性的细胞免疫应答,且可持续较长时间。
- 刘娟娟殷国荣张建红孟晓丽陈洁
- 关键词：弓形虫排泄-分泌抗原鼻内免疫细胞免疫应答
- 家蝇幼虫抗菌肽粗提物对人肝癌HepG2细胞凋亡、钙离子浓度及线粒体膜电位变化的影响被引量：3
- 2017年
- 本文从肿瘤细胞凋亡及作用机制的角度出发初步探讨了家蝇幼虫抗菌肽粗提物对人肝癌HepG2细胞的影响。采用Hoechst33258荧光染色法在荧光显微镜下观察家蝇抗菌肽对HepG2细胞形态学的影响。并通过流式细胞术分别观察家蝇抗菌肽粗提物对HepG2细胞凋亡、钙离子浓度及线粒体膜电位变化的影响。Hoechst33258荧光染色法结果显示家蝇抗菌肽粗提物作用于HepG2细胞48h后能够引起细胞核发生核凝聚、染色质趋边化、核碎裂等凋亡形态学的改变；流式细胞仪检测结果显示家蝇抗菌肽粗提物能够诱导HepG2细胞发生凋亡、线粒体膜电位下降、细胞内钙离子浓度增加的现象。因此，我们推测家蝇抗菌肽可能通过增加HepG2细胞内钙离子，降低线粒体膜电位，进而诱导细胞凋亡的发生。
- 邢佳欣郭姗赵瑞君朱爱玉刘娟娟
- 关键词：家蝇幼虫肝癌HEPG2细胞
- 弓形虫排泄-分泌抗原（ESA）鼻内免疫小鼠诱导的免疫应答的观察
- 目的：本研究首先观察弓形虫感染小鼠腹水中分离的排泄-分泌抗原(excreted/secretedantigensESA)鼻内免疫小鼠后对不同黏膜部位和系统的免疫效应，又观察了Vero细胞株体外培养弓形虫并提取ESA鼻内免...
- 刘娟娟
- 关键词：弓形虫排泄分泌抗原鼻内免疫黏膜疫苗免疫应答
- 文献传递
- 刚地弓形虫棒状体蛋白17激活活化蛋白1信号抑制小鼠巨噬细胞凋亡
- 2016年
- 目的检测刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)棒状体蛋白17(rhoptry protein 17,ROP17)对γ干扰素(IFN-γ)诱导的小鼠单核巨噬细胞(J774A.1)凋亡的调控作用。方法将重组质粒p3×Flag-CMV-14/Tg ROP17和p3×Flag-CMV-14空质粒(对照组)转染J774A.1细胞后,加入重组IFN-γ诱导细胞凋亡,通过流式细胞术和蛋白质印迹(Western blotting)检测ROP17对细胞凋亡的调控作用,检测c-Jun磷酸化水平及活化形式的半胱天冬酶3(Caspase 3)、Bcl-2、Bcl-x L和Bcl-3等凋亡相关蛋白的表达情况。J774A.1细胞共转染p3×FlagCMV-14/Tg ROP17和c-Jun sh RNA,加入重组IFN-γ诱导细胞凋亡,Western blotting检测ROP17对凋亡的调控作用及凋亡相关蛋白Bcl-3的表达。结果流式细胞术显示,过表达ROP17组细胞凋亡率为(3.73±0.51)%,明显低于对照组的(7.78±1.10)%(P<0.05)。Western blotting结果显示,过表达ROP17组磷酸化c-Jun蛋白相对表达量为0.196±0.028,对照组为0.075±0.010(P<0.05);Bcl-3相对表达量为0.461±0.063,对照组为0.108±0.013(P<0.05)。活化形式的Caspase 3相对表达量为0.015±0.004,对照组为0.174±0.026(P<0.05)。Bcl-2在过表达ROP17组和对照组中的相对表达量分别为0.119±0.013和0.117±0.018,Bcl-x L则分别为0.124±0.015和0.121±0.023,差异均无统计学意义(P>0.05)。在c-Jun sh RNA有效抑制c-Jun及其磷酸化表达的条件下,活化形式的Caspase 3在RNA干扰组和对照组的相对表达量分别为0.147±0.024和0.087±0.010(P<0.05),Bcl-3则分别为0.085±0.010和0.162±0.011(P<0.05)。结论ROP17抑制IFN-γ诱导的J774A.1细胞凋亡依赖于c-Jun的磷酸化及Bcl-3的表达。
- 王海龙邢佳欣郭姗李佳洁刘红丽孟晓丽刘娟娟赵瑞君殷国荣
- 关键词：刚地弓形虫细胞凋亡活化蛋白1
- 弓形虫排泄-分泌抗原和可溶性速殖子抗原免疫原性的观察被引量：2
- 2009年
- 目的观察弓形虫速殖子排泄-分泌抗原(excreted/secreted antigen,ESA)和可溶性速殖子抗原(soluble tachyzoite antigen,STAg)鼻内免疫小鼠的免疫原性。方法BALB/c小鼠随机分为4组,分别用PBS 20μl/只、体外排泄-分泌抗原(excreted/secreted antigenin vitro,ESAv)、腹腔排泄-分泌抗原(excreted/secreted antigen in mice,ESAm)和STAg各20μg/只鼻内免疫2次,间隔14 d。分别于末次免疫后14 d和44 d每组处死8只小鼠,计数肠上皮内淋巴细胞(intestinal intraepithelial lymphocytes,iIEL)和脾淋巴细胞,ELISA法检测血清IgG和小肠冲洗液sIgA抗体水平。结果实验期间,ESAm组小鼠于二次免疫后状态欠佳,其他各组小鼠健康状况良好。末次免疫后14 d,各抗原组脾淋巴细胞及iIEL均增殖活跃,细胞数与PBS组比较,差异具统计学意义(P<0.05或P<0.01);至免疫后44 d,两种ESA组脾淋巴细胞及iIEL数与PBS组比较差异具统计学意义(P<0.05)。各抗原组血清IgG水平在免疫后14 d和44 d均明显增高,与PBS组比较差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。免疫后14 d肠液sIgA水平ESAv、ES-Am和STAg组与PBS组比较差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01),ESAm和STAg组与ESAv组比较差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01),两种ESA组在免疫后44 d与PBS组比较差异仍具统计学意义(P<0.05)。结论ESAv、ESAm和STAg鼻内免疫均可诱导粘膜及系统的细胞和体液免疫应答,有较强的免疫原性。但ESAm可能对机体有毒副作用,不适宜直接鼻内免疫。
- 刘娟娟吴静殷国荣孟晓丽刘红丽刘转转
- 关键词：刚地弓形虫排泄-分泌抗原可溶性速殖子抗原鼻内免疫免疫原性
- 提高青年教师医学寄生虫学实验教学效果的体会被引量：4
- 2012年
- 为调动学生的学习兴趣和主观能动性,青年教师从医学寄生虫学实验课的特点出发,就如何培养学生学习兴趣、合理应用现代化教学手段、增加学生实验的参与度以及引入病例等方面进行实践,发挥学生在实验课中的主体作用,从而提高实验教学效果与学生的综合素质。
- 刘娟娟殷国荣
- 关键词：医学寄生虫学实验教学青年教师
