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冯云: 作品数：119 被引量：251H指数：8; 供职机构：四川大学华西口腔医学院更多>>; 发文基金：国家自然科学基金美国中华医学基金会项目美国中华医学基金更多>>; 相关领域：医药卫生生物学理学化学工程更多>>

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人皮肤组织桥粒芯糖蛋白4片段的克隆和在寻常型天疱疮中免疫识别的初步研究: 2007年; 目的扩增人皮肤组织桥粒芯糖蛋白4(desm og le in 4,D sg4)胞外区域EC1、EC2、EC3和EC4的核酸序列,为寻常型天疱疮(pem ph igus vu lgaris,PV)发病机制的研究提供依据。方法根据G enB ank中的D sg 4序列(登录号为AY 177664)分析,通过逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法从人正常皮肤组织中抽提RNA,逆转录合成cD-NA,聚合酶链反应(PCR)扩增皮肤组织桥粒芯糖蛋白4胞外区域EC1、EC2、EC3和EC4目的基因;应用基因重组技术将目的基因分别与质粒pET 32a在T 4 DNA连接酶作用下相连接,转化E.coli DH 5α感受态细菌,用含氨苄青霉素的LB培养基平板筛选转化菌,阳性重组子DNA序列测定鉴定;重组融合蛋白经EL ISA法与PV患者、正常对照组血清进行反应。结果RT-PCR扩增产物经凝胶电泳得到均约为350 bp的4条条带;质粒载体pET 32a连接的目的基因经序列测定后与在G enB ank登录的D sg4胞外区域EC1、EC2、EC3和EC4核酸序列完全一致,4个D sg4胞外区域cDNA读码框架正确;D sg4 EC1、EC2、EC3和EC4与患者血清反应,而不与正常对照组血清反应。结论D sg4胞外区域多肽片断在PV发病中可能有作用。; 李薇冯云吕小岩黎静宜冉玉平; 关键词：天疱疮克隆免疫识别

人淋巴结中HMGN2蛋白的分离纯化及其亚细胞分布研究被引量：3: 2010年; 从人淋巴结中分离与纯化HMGN2蛋白,探讨HMGN2分子抗菌作用及其在淋巴结中的亚细胞分布。我们采用高效液相色谱分离纯化,琼脂糖弥散法筛选纯化组分的抗菌活性,对活性组分进行质谱分析测定精确分子量,进行Western-blot检测同源性。结果成功从人淋巴结中分离纯化出的活性蛋白,对致病性大肠杆菌54080有抗菌活性,质谱精确分子质量测定、Western-blot分析证明此活性蛋白即为HMGN2分子,免疫组化实验结果显示在淋巴结组织细胞细胞浆和细胞核均有HMGN2蛋白分布。从人淋巴结组织成功分离纯化出纯度较高、具有生物活性的HMGN2蛋白,可能参与了体内的天然免疫防御作用。; 李薇张平孔祥丽李燕陈思秀冯云吴琦王伯瑶; 关键词：人淋巴结 HMGN2 分离纯化亚细胞定位

突变MyD88重组质粒的构建及其抑制绿脓杆菌诱导的A549细胞IL-8表达: 构建突变MyD88真核表达质粒(MyD88 DN),转染人呼吸道上皮细胞株A549,探讨其对绿脓杆菌及其分泌产物刺激IL-8表达的影响.结果显示:突变MyD88成功构建入pcDNA3.1/zeo真核表达质粒,转染A549...; 冯艳王芳陈襄文冯云黄宁王伯瑶吴琦; 关键词：白细胞介素-8 呼吸道炎症; 文献传递

双歧杆菌胞壁蛋白诱导人肠腺上皮细胞β-防御素-2 mRNA的表达被引量：5: 2003年; 目的　检测双歧杆菌对人肠腺上皮细胞β-防御素 - 2 (h BD- 2 )基因的激活作用及其活性组分。方法　应用逆转录聚合酶链反应 (RT- PCR)法和 Northern杂交检测 HT- 2 9细胞 h BD- 2 m RNA的表达 ;采用超声破碎细胞、超速离心、蛋白萃取等方法分离双歧杆菌胞壁蛋白质成分。结果　 RT- PCR和 Northern杂交分析显示 ,在正常培养条件下 HT- 2 9细胞无可见的 h BD- 2 m RNA表达信号 ,但在双歧杆菌菌体、细胞壁和胞壁蛋白刺激下均检测出显著的 h BD- 2 m RNA表达。结论　双歧杆菌能诱导人肠腺上皮细胞 h BD- 2基因的表达。; 王国兴冯云汪宇辉黄宁吴琦王伯瑶; 关键词：Β-防御素-2 基因表达

活化免疫细胞通过分泌炎症性细胞因子促进口腔鳞癌免疫逃逸: 目的探讨活化免疫细胞在口腔鳞癌免疫逃逸中的作用和机制.方法用PHA刺激健康人PBMC,模拟免疫细胞体内活化过程,以在肿瘤免疫逃逸中发挥重要作用的PD-L1为靶蛋白,采用体内外实验,分析活化免疫细胞及其分泌的相关炎症细...; 冯云陆峻君肖丽英孔祥丽李小玉陈思秀李燕朱株张平; 关键词：口腔鳞癌免疫细胞免疫逃逸 PD-L1; 文献传递

人宫颈黏液HMGN2鉴定及在宫颈组织的表达: 2008年; 为探讨人子宫颈黏液的抗菌机制,采用酸性尿素聚丙烯酰胺凝胶电泳和反相高压液相色谱技术,从人子宫颈黏液酸溶性提取物鉴定出对大肠杆菌氨苄青霉素耐药株ML-35p有较强的抗菌活性的多肽HCP-21和HCP-26.蛋白质N端氨基酸序列测定和精确质谱分子质量测定证明,HCP-21为HMGN2,HCP-26为SLPI片段.提取原代培养宫颈上皮细胞的总RNA,采用RT-PCR技术扩增出一条与HMGN2 cDNA大小相同(270bp)目的基因片段,表明在生理状况下,宫颈上皮细胞即可表达其mRNA.制备HMGN2多克隆抗体,对生理状态下宫颈组织切片和宫颈黏液涂片进行HMGN2分子免疫组化分析表明,该分子主要分布于子宫颈黏膜层,并存在于子宫颈黏液.HMGN2分子在宫颈黏膜上皮组织和黏液中固有表达,可能在子宫颈天然免疫防御中起重要作用.; 王莉莉何跃东黄宁李明熊文碧冯云吴琦王伯瑶潘小玲; 关键词：女性生殖道子宫颈抗菌肽 HMGN2

双歧杆菌胞壁蛋白诱导人肠腺上皮细胞β-防御素-2基因表达及其信号转导机制被引量：1: 2005年; 目的:本项研究目的是检测双歧杆菌对人肠腺上皮细胞hBD-2基因的激活作用并分离其活性组分,进一步探讨其受体及其胞内信号传导通路. 方法:厌氧培养长双歧杆菌,采用超声破碎细胞、超速离心、蛋白萃取方法获得双歧杆菌胞壁蛋白质成份,利用SepharylS-100HR分子筛分离细胞壁蛋白.分别利用活菌,热灭活全菌,全细胞壁组份和全细胞壁蛋白组分,刺激人肠腺上皮细胞Caco-2,应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法、Northem杂交、免疫细胞化学染色和ELISA等技术在mRNA和肽水平上检测hBD-2基因的表达.应用Westem Blotting技术检测到IκB-α磷酸化和降解、NF-κBp65的核移位以及细胞内MAPKs蛋白分子ERK1/2、p38 MAPK和JNK的磷酸化.; 王国兴吴琦黄宁冯云李成梁王伯瑶; 关键词：长双歧杆菌蛋白诱导 Β-防御素-2 信号转导机制 NORTHERN杂交

卡介苗胞壁蛋白增强肺抗铜绿假单胞菌感染防御功能的研究: 2007年; 目的观察卡介苗胞壁蛋白组分能否提高大鼠肺组织对铜绿假单胞菌的清除率。方法密度梯度离心和分子筛方法分离卡介苗胞壁蛋白组分。用Northern杂交和RT-PCR检测卡介苗全菌体及其胞壁蛋白组分对肺上皮SPC-A-1细胞β防御素hBD-1 mRNA表达的刺激作用;腹腔注射卡介苗胞壁蛋白组分48h后,经气管滴入铜绿假单胞菌或金黄色葡萄球菌,24h后处死大鼠,取肺组织进行菌落计数。结果卡介苗胞壁蛋白经分子筛层析后主要得到两大组分,Tricine-SDS-PAGE鉴定组分2相对分子质量约为18×103～30×103。Northern杂交显示热灭活卡介苗能提高肺上皮细胞β防御素hBD-1 mRNA表达,RT-PCR显示胞壁蛋白组分2刺激作用明显强于全菌体。经胞壁蛋白组分2治疗的大鼠肺组织铜绿假单胞菌数低于阴性对照组(P<0.01),而对金黄色葡萄球菌感染无明显抵抗作用。结论卡介苗胞壁蛋白组分可提高肺组织对铜绿假单胞菌的清除率,增强肺抗感染防御能力。; 刘小康周慧黄宁祝秉东冯云吴琦王伯瑶; 关键词：卡介苗防御素铜绿假单胞菌

重组人表皮生长因子对大鼠皮肤烧伤愈合的促进作用被引量：12: 2007年; 目的:观察局部应用重组人表皮生长因子(recombined human epidermal growthfactor,rhEGF)对大鼠皮肤深Ⅱ度烧伤有无促进作用。方法:建立约10%的大鼠烧伤面积,测定给不同剂量的rhEGF治疗后不同时间的烫伤创面愈合面积,创面组织病理组织学以及测定愈合时间来观察rhEGF对皮肤创伤的治疗作用。结果:rhEGF小、中、大剂量(每cm2创面200IU,400IU,800IU)可以缩短大鼠皮肤深Ⅱ度烧伤愈合的时间,同一时间内烧伤愈合面积高于对照组,同时还可以增加表皮细胞和毛细血管的增生,三个剂量之间未见明显的量效反应。结论:局部应用rhEGF可以促进大鼠皮肤烧伤愈合。; 缪世坤彭波杨云霞朱玲冯云范爱兰; 关键词：重组人表皮细胞生长因子烧伤愈合

活化免疫细胞通过分泌炎症性细胞因子促进口腔鳞癌免疫逃逸: <正>炎症和肿瘤,肿瘤微环境与肿瘤免疫逃逸是目前肿瘤研究领域的两大热点和难题。国内外大量研究均已证实:炎症反应参与了肿瘤发生、发展和浸润转移过程,肿瘤微环境相关免疫细胞分子参与了肿瘤的免疫逃逸。表明活化免疫细胞既是机体抗...; 卢礼兵冯云卢婉露陈娇扬军张平; 文献传递

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