何逵夫
- 作品数：4 被引量：12H指数：2
- 供职机构：天津科技大学生物工程学院工业发酵微生物教育部重点实验室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金天津市高等学校科技发展基金计划项目更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 枯草芽孢杆菌嘌呤核苷磷酸化酶酶学性质研究及在利巴韦林酶法合成中的应用被引量：5
- 2010年
- 利用PCR技术从枯草芽孢杆菌基因组DNA中扩增出其编码嘌呤核苷磷酸化酶的两种基因deoD和punA,构建工程菌并采用金属螯合层析纯化PNP702和PNP816,酶学性质研究表明：二者具有一致的最适反应温度（60℃）和最适反应pH值（7~8）,PNP816磷酸解肌苷的催化效率（kcat/Km）比PNP702高出11.12倍。底物特异性试验表明：PNP702为高分子量的六聚体,而PNP816为低分子量的三聚体。分别以纯化酶和工程菌菌体为酶源,以肌苷或鸟苷为核糖基供体,TCA（1,2,4-三氮唑-3-甲酰胺）为底物,酶法合成核苷类抗病毒药物利巴韦林,PNP816和工程菌XL-B lue（pPNP816）较PNP702和工程菌XL-Blue（pPNP702）具有更高的催化速度和底物转化率,表明来源于微生物的低分子量的三聚体PNP在核苷类药物和中间体微生物酶法合成中具有更高的应用价值。
- 夏俊刚何逵夫谢希贤徐庆阳陈宁
- 关键词：枯草芽孢杆菌嘌呤核苷磷酸化酶酶学性质利巴韦林
- 冷适应嘌呤核苷磷酸化酶温敏型高效表达载体的构建及在大肠杆菌中的热诱导表达
- 目的：构建冷适应嘌呤核苷磷酸化酶(XmPNP)重组蛋白温敏型高效表达载体,热诱导XmPNP在大肠杆菌中表达。方法：经PCR从重组子pXMH上克隆XmPNP编码基因deoD,构建XmPNP重组蛋白温敏型高效表达工程菌,热诱...
- 夏俊刚何逵夫谢希贤徐庆阳
- 关键词：抗病毒药物嘌呤核苷磷酸化酶大肠杆菌
- 鸟苷的生产研究进展
- 鸟苷在食品、医药、化工等领域有着广泛的应用。本文列举了鸟苷的主要应用、检测方法及生产方法，重点介绍了工业生产上占主导地位的发酵法生产鸟苷的菌种选育与发酵工艺的最新研究进展。本文为工业生产鸟苷提供了一定理论的依据。
- 何逵夫夏俊刚谢希贤徐庆阳
- 关键词：鸟苷发酵工艺菌种选育
- 解淀粉芽胞杆菌关键酶基因过表达对鸟苷积累的影响被引量：7
- 2012年
- 【目的】研究鸟苷生物合成途径中的3个关键酶编码基因(prs,purF,guaB)过表达对解淀粉芽胞杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)发酵生产鸟苷的影响。【方法】利用穿梭表达载体PBE43,构建含有prs、purF和guaB基因的单独表达载体和prs、purF基因的串联表达载体,将它们分别转入鸟苷生产菌B.amyloliquefaciens TA208后,通过实时定量PCR测定各工程菌株内相关基因的转录水平;通过酶活检测分析关键酶基因扩增对肌苷酸脱氢酶活性的影响;通过摇瓶发酵实验考察工程菌株与对照菌株的生长、耗糖和鸟苷积累情况。【结果】转录分析结果表明prs、purF和guaB基因过表达的同时都伴随着自身转录水平的显著上调。与此同时,prs和purF基因单独表达均轻微下调了嘌呤操纵子的转录水平,但是guaB基因的过表达并不影响嘌呤操纵子和prs基因的转录。酶活分析结果表明prs和purF基因扩增并不影响肌苷酸脱氢酶的活性,guaB基因的扩增使其活性提高了126%。摇瓶发酵实验发现prs和purF基因的单独过表达均未促进宿主菌合成鸟苷,而含guaB基因过表达载体的工程菌鸟苷产量较出发菌株提高20.7%。将prs和purF基因串联表达后,鸟苷产量提高14.4%,糖苷转化率增加6.8%。【结论】过表达guaB基因能够大幅提高鸟苷产量,而prs和purF基因只有实现协同表达才能对宿主菌积累鸟苷产生积极影响,为通过代谢工程技术提高鸟苷产量奠定了研究基础。
- 何逵夫马跃超杜姗姗谢希贤徐庆阳陈宁
- 关键词：鸟苷
