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人血红素加氧酶-1的原核表达、纯化及其中和抗体的制备被引量：1: 2010年; 目的确定人血红素加氧酶-1（human heme oxygenase-1，hHO-1）在大肠埃希菌中的表达条件与纯化方法，利用纯化的蛋白制备具有中和活性的hHO—1多克隆抗体。方法将hHO-1原核表达质粒pMW172／hHO-1转人大肠埃希菌菌株BL21，通过改变摇床转速、诱导剂IPTG浓度和培养时间确定hHO-1蛋白的最佳可溶性表达条件；利用超声破碎、高速离心、分级盐析、分子筛层析等方法纯化hHO-1蛋白，建立体外HO-1活性测定方法检测hHO-1蛋白的活性；利用纯化的hHO-1活性蛋白作为抗原免疫新西兰兔，制备多克隆抗体；利用ELISA方法和Western印迹技术分别测定抗体的效价和特异性，通过HO-1活性测定检测抗体的中和活性。结果确定hHO-1最佳可溶性表达条件为：37℃、200r／min培养3h后，0．1 mmoL／LIPTG诱导培养4h。超声破碎菌体，上清经30％～40％盐析纯化及分子筛层析纯化，获得活性hHO-1蛋白，收得率为30．3％，纯化倍数为2．83倍，纯度为90％。制备的抗hHO-1的兔血清效价达到10^6，并能中和掉46％hHO-1的催化活性。结论为hHO-1蛋白的表达和纯化以及多克隆抗体制备确立了可行的技术方案；获得了高纯度活性hHO-1蛋白及hHO-1多克隆抗体，为HO-1功能、结构研究，以及相关疾病研究奠定了基础。; 魏旭冉杨军刘庆军王波周虹; 关键词：血红素加氧酶原核表达可溶性表达纯化中和抗体

血红素加氧酶-1(HO-1)的多抗制备及其抗原表位的筛选: 血红素加氧酶-1(heme oxygenase-1，HO-1)是体内唯一可被诱导的血红素加氧酶，能够降解血红素为等摩尔一氧化碳、胆绿素和铁离子。在多种细胞中，它均能受到很多因素诱导而高表达，例如：血红素、炎症细胞素、加热...; 魏旭冉; 关键词：血红素加氧酶中和抗体抗原表位

血红素加氧酶-1显性负性突变体转基因小鼠模型的建立与鉴定: 2010年; 目的建立血红素加氧酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)显性负性突变体G143H转基因小鼠模型。方法通过SalI/DraI酶切pCAGGHO-1G143H转基因表达载体,纯化回收HO-1G143H表达盒片段;通过显微注射把表达目的基因的DNA片段导入FVB小鼠受精卵原核,并移植给同期发情的假孕受体母鼠,获得子代小鼠;用PCR对子代鼠尾DNA进行鉴定,并用Southern blot对结果做进一步验证;通过RT-PCR、免疫组化和Western blot方法检测HO-1基因的表达。结果表达盒回收片段正确;假孕鼠出生的17只子代小鼠共有3只阳性,均为雄性;RT-PCR、免疫组化和Western blot结果表明,阳性小鼠体内的HO-1 mRNA与蛋白表达水平增高。结论成功建立HO-1显性负性突变体G143H表达的转基因小鼠,该模型为研究HO-1在体内的作用机制奠定了基础。; 王波程萱刘庆军魏旭冉尹玉静高旭杨晓周虹; 关键词：HO-1 显微注射法转基因小鼠

血红素加氧酶-1重组载体的构建及在胃癌细胞中的初步研究: 2010年; 目的构建人血红素加氧酶-1（hemeoxygenase-1，HO-1）及其突变体的真核表达载体，观察其在胃腺癌细胞中HO-1表达和活性变化，研究HO-1活性变化的胃腺癌细胞对顺铂抗药能力的变化，为进一步研究HO-1对肿瘤细胞影响机制奠定基础。方法根据GenBank中HO-1cDNA序列设计引物，调取基因并克隆入pcDNA3．1（＋）质粒中，构建表达人野生型HO-1与突变型HO-1（HO-1G143H）的重组质粒。脂质体介导重组质粒转染胃腺癌细胞BGC823，用RT—PCR和Western印迹法分别检测细胞中HO-1mRNA的表达和蛋白表达水平，体外测定HO—1活性变化，应用顺铂进行体外抗药性实验。结果酶切鉴定和测序证实，HO-1真核表达载体构建成功；转染质粒后的BGC823，HO-1的mRNA和蛋白的表达水平明显上升；转入野生型质粒的细胞HO-1活性上升，转入突变型质粒的细胞HO-1活性下降；HO-1活性下降BGC823细胞抗顺铂杀伤能力增强。结论构建了HO-1野生型与突变型真核表达载体；将其转入胃腺癌细胞，引起了HO-1的mRNA和蛋白表达的增加和活性变化；体外实验表明，HO-1活性下降的BGC823细胞抗顺铂能力增强。; 王波刘庆军于景翠尹玉静魏旭冉周虹; 关键词：血红素加氧酶-1 肿瘤基因重组

血红素加氧酶-1的表达、纯化方法与抗原表位: 本发明公开了血红素加氧酶-1的表达、纯化方法与抗原表位。通过本发明可以获得高产量的可溶性血红素加氧酶-1，为大量制备具有生物活性的血红素加氧酶-1奠定了基础，可望解决生物工程和药物研发领域等血红素加氧酶-1难以高效表达的...; 周虹魏旭冉刘庆军王波杨光

血红素加氧酶-1的表达、纯化方法与抗原表位: 本发明公开了血红素加氧酶-1的表达、纯化方法与抗原表位。通过本发明可以获得高产量的可溶性血红素加氧酶-1，为大量制备具有生物活性的血红素加氧酶-1奠定了基础，可望解决生物工程和药物研发领域等血红素加氧酶-1难以高效表达的...; 周虹魏旭冉刘庆军王波杨光; 文献传递

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